背景和目的:高血压可导致不同程度的心脏损伤,如心肌纤维化、心肌肥厚和心力衰竭等。心肌细胞受损时,心脏局部血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)异常增加,促进纤维化相关蛋白的表达,导致心肌细胞纤维化。缝隙连接蛋白43(Cx43)是心脏中主要的缝隙连接蛋白之一,参与心肌细胞间的物质交换,并通过电偶联和化学偶联传递信号。既往研究发现Ang Ⅱ可通过抑制心房肌细胞Cx43表达并增加缝隙连接蛋白传导距离,加重心肌纤维化,导致心脏舒张功能障碍。TRV027是一种具有独特功能的新型血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT_1selleck激酶抑制剂R)偏向性配体,能够竞争性阻断Ang Ⅱ与AT_1R的结合,并且能够激活β-arrestin蛋白,进一步改善心脏结构和功能。我们推测Ang Ⅱ可能通过降低心肌细胞Cx43的表达加重心肌细胞纤维化,TRV027能够head and neck oncology抑制Ang Ⅱ的作用提高心肌细胞Cx43的表达,从而改善大鼠心肌细胞纤维化。因此,本研究拟从体外实验验证Ang Ⅱ能否降低大鼠心肌细胞Cx43的表达,引起I型胶原蛋白(COL-1)和ⅡI型胶原蛋白(COL-3)的增加;进一步探索TRV027对Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌细胞Cx43的降低和纤维化的影响,为研究心肌细胞纤维化及其功能障碍提供新的证据。方法:大鼠心肌细胞H9C2细胞(购自和元生物技术股份有限公司,由BD1X大鼠胚胎心脏组织的克隆细胞系亚克隆得到)作为实验对象进行培养,将其分为4组:(1)对照组:正常培养无药物干预;(2)Ang Ⅱ组:1×10~(-5)mol/L干预48h;(3)TRV027组:1×10~(-8)mol/L干预24h;(4)Ang Ⅱ+TRV027组:先给予1×10~(-5)mol/L的Ang Ⅱ干预24h,再给予1×10~(-8)mol/L TRV027继续干预24h。采用CCK-8法检测H9C2细胞增殖活力。通过Western blotting法检测心肌细胞Cx43和β-arrestin的蛋白表达水平。采用q RT-PCR法检测心肌细胞Cx43和β-arrestin的基因表达水平,采用免疫荧光技术观察心肌细胞Cx43、β-arrestin、COL-1和COL-3蛋白的表达情况。应用Image J软件对所得的蛋白条带和荧光效果图进行半定量分析,使用SPSS 23.0软件对结果进行统计学分析,LSD t检验来比较两组之间的差异。对实验结果进行分析后采用Graphd Pad Prism 8软件进行绘图并导出。结果:(1)蛋白水平结果:Western blotting结果显示:(1)与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞Cx43的蛋白表达量明显降低(0.63±0.01、0.42±0.54,P<0.01);与Ang Ⅱ组相比,TRV027组和Ang Ⅱ+TRV027组心肌细胞Cx43的蛋白表达量增加(0.42±0.54、0.66±0.05、0.51±0.04,P<0.05);差异均具有统计学意义。(2)与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞β-arrestin的蛋白表达量也降低(0.65±0.02、0.47±0.06,P<0.01);与Ang Ⅱ组相比,TRV027组和Ang Ⅱ+TRV027组心肌细胞β-arreICI 46474价格stin的蛋白表达量增加(0.47±0.06、0.73±0.02、0.79±0.01,P<0.01);差异均具有统计学意义。(2)基因水平结果:q RT-PCR结果显示:(1)与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞Cx43的m RNA表达量显著降低(0.012±0.006、0.005±0.003,P<0.05);与Ang Ⅱ组相比,Ang Ⅱ+TRV027组Cx43的m RNA表达量明显增加(0.005±0.003、0.015±0.001、0.018±0.001,P<0.01);差异均具有统计学意义。(2)与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞β-arrestin的m RNA表达量显著降低(0.012±0.006、0.005±0.003,P<0.05);与Ang Ⅱ组相比,Ang Ⅱ+TRV027组β-arrestin的m RNA表达量明显增加(0.005±0.003、0.015±0.001、0.018±0.001,P<0.01);差异均具有统计学意义。(3)免疫荧光结果:(1)Cx43和β-arrestin结果显示,与对照组相比,Ang Ⅱ组Cx43和β-arrestin的绿色荧光明显减弱;与Ang Ⅱ组相比,Ang Ⅱ+TRV027组和TRV027组Cx43和β-arrestin的绿色荧光显著增强。半定量分析结果显示:a.与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞Cx43的荧光表达量明显降低(48.49±3.30、28.34±3.70,P<0.01);与Ang Ⅱ组相比,TRV027组和Ang Ⅱ+TRV027组心肌细胞Cx43的荧光表达量明显升高(28.34±3.70、40.73±2.42、59.70±1.13,P<0.01);差异均具有统计学意义。b.与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞β-arrestin的荧光表达量明显降低(65.19±1.71、32.75±4.39,P<0.01);与Ang Ⅱ组相比,单纯TRV027组和Ang Ⅱ+TRV027组心肌细胞β-arrestin的荧光表达量明显升高(32.75±4.39、64.26±1.88、51.61±2.42,P<0.01);差异均具有统计学意义。(2)COL-1和COL-3的免疫荧光结果显示,a.与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞COL-1的荧光表达量明显增加(57.18±1.61、126.57±6.81,P<0.01);与Ang Ⅱ组相比,TRV027组和Ang Ⅱ+TRV027组心肌细胞COL-1的荧光表达量明显降低(126.57±6.81、63.20±1.69、61.70±6.91,P<0.01);差异均具有统计学意义。b.与对照组相比,Ang Ⅱ组心肌细胞COL-3的荧光表达量明显增加(65.38±2.52、149.17±3.06,P<0.01);与Ang Ⅱ组相比,单纯TRV027组和Ang Ⅱ+TRV027组心肌细胞COL-1的荧光表达量明显降低(149.17±3.06、64.85±3.93、67.69±2.19,P<0.01);差异均具有统计学意义。结论:Ang Ⅱ抑制Cx43可以增加心肌细胞纤维化,TRV027能提高Cx43延缓心肌细胞纤维化的发生,从而有望为治疗心肌细胞纤维化提供新思路。