目的探讨镁依赖性蛋白磷酸酶1A(protein phosphatase magnesium dependent1A,PPM1A)对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞增殖、侵袭及上皮-间充质转化(epithelquinoline-degrading bioreactorial-mesenchymal transformation,EMT)的影响及其上下游调控分子机制,为探寻有效的胰腺癌治疗策略提供实验依据。方法1实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)和免疫荧光实验检测人正常胰腺导管上皮细胞HPNE与胰腺癌细胞PANC-1、As PC-1和Bx PC-3中PPM1A的表达情况。2组织芯片免疫组织化学染色实验检测14例人癌旁胰腺组织和88例胰腺癌组织中PPM1A表达情况。3 CCK-8、划痕、Transwell或集落形成实验检测si-PPM1A/pc DNA3.1-PPM1A或miR-105-5p mimic/inhibitor对此网站PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭或集落形成能力的影响。4 q RTPCR、Western Blot或免疫荧光实验检测si-PPM1A/pc DNA3.1-PPM1A或miR-105-5p mimic/inhibitor对PANC-1细胞EMT标志物表达水平的影响。5生物信息学网站预测筛选,q RT-PCR实验验证PPM1A上游微小RNA(micro RNA,miRNA)。6q RT-PCR和双萤光素酶报告基因实验验证miR-105-5p与PPM1A之间的靶定关系。7 CCK-8、Transwell和q RT-PCR检测过表达miR-105-5p是否能够挽救PPM1A对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT的抑制作用。8生物信息学网站筛选出与PPM1A具有相互作用的蛋白。9 Western Blot实验检测PPM1A对胰腺癌细胞PANC-1中转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor beta 1,TGF-β1)、p-Smad2、p-Smad3、Smad2和Smad3表达水平的影响。10 CCK-8检测TGF-β1信号通路抑制剂SB431542或TGF-β1因子是否可逆转si-PPM1A或PPM1A对PANC-1细胞增殖的促进或抑制作用。结果1与HPNE细胞相比,PANC-1、AsPC-1和Bx PC-3细胞中PPM1A表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。2与癌旁胰腺组织相比,胰腺癌组织中PPM1A表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。3 si-PPM1A组和pc DNA3.1-PPM1A组PANC-1细胞的增殖、迁移、侵袭、集落形成能力明显高于或低于各自的对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。4 si-PPM1A可促进,而pc DNA3.1-PPM1A可抑制PANC-1细胞EMT进程,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。5生物信息学网站显示miR-105-5p作为PPM1A可能的上游miRNA,在多种哺乳动物中保守性较高,在胰腺癌中表达水平较高且高表达患者预后较差。6 q RT-PCR和双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-105-5p抑制PPM1A信使RNA(messenger RNA,m RNA)表达并与其靶定结合。7 miR-105-5p mimic组和miR-105-5p inhibitor组PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力显著高于或低于各自的对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。8 miR-105-5p mimic和miR-105-5p inhibitor可分别促进或抑制PANC-1细胞的EMT进程,与各自对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。9 miR-105-5p mimic能够挽救PPM1A对PANC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT的抑制作用,差异均具有统计学意义(P<0.05)。10生物信息学分析表明,PPM1A与Smad2、Smad3具有较强相互作用。11与si-NC组相比,si-PPM1A组PANC-1细胞TGF-β1表达水平、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3比值均显著增高;与pc DNA3.1组相比,pc DNA3.1-PPM1A组PANC-1细胞TGF-β1表达水平、p-Smad2/Smad2和p-Smad3/Smad3比值均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。12SB431542或TGF-β1可逆转si-PPM1A或PPM1A对PANC-1细胞增殖的促进或抑制作用,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1 PPM1A可抑制胰腺癌细胞PANC-1的增殖、侵袭能力及EMT进程。2miR-105-5p是PPM1A上游调控因子。3 miR-105-5p可能通过靶定PPM1A促进胰腺癌细胞PANC-1增殖、迁移和侵袭及EMT进程。4 PPM1A可E7080临床试验能通过抑制下游TGF-β1/Smads信号通路抑制胰腺癌细胞PANC-1的恶性细胞行为。图 36 幅;表 7 个;参 86 篇。