DuDu365生物天地

目的:探讨补益祛痹汤治疗类风湿关节炎(RA)的疗效及对Toll样受体(TLRs)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法:选取86例RA患者随机分为两组:对照组(n=43)给予西药治疗,观察组(n=43)给予西药联合补益祛痹汤治疗,疗程均为3个月。比较两组晨僵时间、关节肿胀指数及压痛指数、双手平均握力,评价中医证候评分、疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、类风湿关节炎患者病情评价量表(DAS28)评分,治疗前后测定并比较外周血单个核细胞中TLRsgenetic mapping/MAPKs/NF-κB信号通路相关因子表达,并检测ESR及血清RF、IgA、IgG、IL-1β、IL-6、TNF-α、hs-CRP水平。评价并比较两组的综合临床疗效及不良反应情况。结果:治疗后,观察组晨僵时间确认细节、关节压痛指数及肿胀指数、中医证候评分、疼痛VAS评分、DAS28评分ESR显著低于对照组,双手平均握力显著高于对照组,外周血单个核细胞中TLR2、TPLX5622溶解度LR4、p38MAPK、NF-κB血清RF、IgA、IgG、IL-1β、IL-6、TNF-α、hs-CRP水平显著低于对照组(P<0.05)。观察组的总有效率(97.67%)显著高于对照组(86.05%)(P<0.05)。两组的不良反应率对照差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补益祛痹汤治疗RA可改善临床症状及体征,提高临床疗效,其机制可能与调节TLRs/MAPKs/NF-κB信号通路及其介导的炎症反应有关。

来自空肠弯曲菌的β1,3-半乳糖基转移酶（CgtB）主要负责蛋白质O-连接糖基化的第二步延伸，在O-连接N-乙酰半乳糖胺（O-GalNAc）修饰后面添加一个半乳糖，目前CgtB已经被广泛应用于体外O-连接糖基化的合成。为了开发O-GalNAc修饰的识别工具，CgtB蛋白质用于突变体设计。在基因水平删除N端30个氨基酸及C端的30个氨基酸得到Cgt1，将Cgt1构建在pMal-c5x表达质粒上并通medication delivery through acupoints过大肠杆菌进行原核表达。可溶性的Cgt1经过麦芽糖结合蛋白（MBP）亲和层析柱进行纯化并利用糖结合实验进行活性分析。结果显示，大肠杆菌体系可以成功表达可溶性重组Cgt1蛋白质，相对分子质量约为70 000，重组的Cgt1具备结合O-GalNAc修饰蛋白质的活selleck HPLC性；针对不同的标准糖蛋白，Cgt1只识别含有O-GalNAc修饰的黏蛋白（mucin）；对于复杂的细更多胞样品，Cgt1可以特异性识别细胞内的O-GalNAc修饰。该研究开发的识别O-GalNAc修饰工具，为进一步研究O-GalNAc修饰的功能奠定了基础。

目的 分析前列腺增生（BPH）患者术后自护能力及其SV2A immunofluorescence相关影响因素。方法 选取2020年6月至2022年6月于医院接受手术治疗的BPH患者85例为研究对象，于患者术后2～3 d进行自护能力评估，并采用基线资料调查问卷记录患者一般情况，并比较不同特征的BPH患者术后自护能力水平，找出确认细节影响BPH患者术后自护能力的相关因素。结果 85例BPH患者术后自护能力平均评分（116±16）分；不同文化水平、前列腺症状严重程度、社会支持、负性情绪的BPH患者术后自护能力评分比较，差异有统计学意义（P<0.05）；经多元线性回归分析结果显示，文化水平低、前列腺症状严重、中低社会支持、伴有负性情绪是影响BPH患者术后自护能力的危险因素（P<0.05）。结论 BPH患者术后自护能力处于中等RepSox分子式水平，可能受到患者自身文化水平、前列腺症状严重、中低社会支持、伴有负性情绪等因素的影响。

目的：基于网络药理学与动物实验，探讨温经汤治疗多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome， PCOS)的作用机制。方法：在TCMSP、BATMAN-TCM、Gene Cards、Dis Genet数据库分别检索温经汤的主要活性成分与靶点，PCOS疾病靶点，并将药物靶点与疾病靶点取交集。运用STRING数据库进行蛋白质相互作用分析，借助Metascape平台进行基因本体GO功能富集分析和京都基因与基因组百科全书KEGG通路富集分析。通过来曲唑联合高脂饲料诱导PCOS小鼠模型，给予不同剂量温经汤干预，观察各组小鼠体质量变化，空腹血糖水平及卵巢组织病理形态;采用ELISA法与免疫组化法检测小鼠血液与卵巢组织中核心靶点和核心通路的表达。结果：温经汤筛选出活性成分253个，主要包括苯代南蛇碱、甘草酚、芍药素酮、吴茱萸碱、等，与536个疾病靶点取交集后得到118个共同靶点，核心靶点包括AKT1、TP53、STAT3、TNF、VEGFA、IL6、EGFR、等；GO富集在BP中主要包括激素反应、多肽反应、促进蛋白质磷酸化、等；MF主要包括蛋白质同源二聚体活性、血红素结合蛋白、四吡咯结合、等；CC主要包括核膜、侧膜、膜筏、等；KEGG富集发现HIF-1、PI3K/AKT、TNF、等信号通路能在温经汤治疗PCOS中起关键作用。动物实验结果显示，与正常对照组比较，模型对照组体质量变化量显著增加（P<0.01），空腹血糖含量明显增加（P<0.05），血清中IL-6、TNF-α含量显著升高（P<0.01），卵巢组织中VEGFA表达显著上调，AKT、HIF-1α表达显著下调（P<0.01），卵巢组织中原始卵泡数量增多，卵泡颗粒细胞层数减少，卵巢指数显著降低（P<0.05）；Z-VAD-FMK IC50与模型对照组相比，温经汤10.14、20.28、40.56 g/kg组小鼠体质量变化量明显降低（P<0.05），血清中IL-6、TNF-α含量显psychiatric medication著降低（P<0.01），卵巢组织中VEGFA表达显著下调，AKT、HIF-1α表达显著上调（P<0.01或 P<0.05），卵泡颗粒细胞层厚度Y-27632生产商增加，黄体数量增多，可见各发育时期的卵泡。结论：温经汤可干预卵巢组织PI3K/AKT/ HIF-1α/VEGF信号通路相关蛋白表达，减轻机体炎性反应，可能是其治疗PCOS的作用机制之一。

目的:口腔癌是发生在头颈部的一种常见的恶性肿瘤,传统的治疗方法并不能有效的降低其死亡率、减少术后复发率,本研究旨在探讨毛兰素(Erianin)对口腔癌细胞生长、迁移及侵袭的影响,并进一步探索其潜在的机制,为口腔癌的治疗提供新的思路和前景药物。方法:CCK-8实验、细胞克隆实验、细胞划痕实验和Transwell实验用于检测不同浓度Erianin对口腔癌KB细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。荧光探针用于检测活human medicine细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和铁离子的变化。此外测定了细胞内丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的水平。免疫印迹法检测不同浓度Erianin及铁抑素-1(Ferrostatin-1,Fer-1)处理后细胞内铁死亡相关蛋白 NF-E2 相关因子 2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)、铁蛋白重链 1(Ferritin heavy chain 1,FTH1)、血红素加氧酶1(Heme oxygenase 1,HO-1)及谷胱甘肽过氧BI 10773供应商化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达。结果:1.CCK-8及细胞克隆实验显示:Erianin以浓度依赖的方式抑制KB细胞的增殖(P<0.001),与对照组相比较,KB细胞的菌落数量显著减少(P<0.001),说明Erianin抑制了 口腔癌KB细胞的增殖。2.细胞迁移和侵袭实验结果显示:与对照组相比,不同浓度的Erianin处理24小时后,KB细胞的迁移减少(P<0.05),并且,Erianin显著抑制KB细胞的侵袭(P<0.001),表明Erianin抑制了 口腔癌KB细胞的侵袭及迁移。3.细胞内GSH、MDA的含量及ROS和铁离子水平的检测结果显示:Erianin处理的KB细胞内GSH水平显著降低(P<0.001),MDA水平显著升高(P<0.001)。采用荧光探针检测KB细胞中ROS含量,发现Erianin显著增加了 ROS水平且呈剂量依赖(P<0.001)。此外,KB细胞内观察到Fe2+荧光强度显著升高,并且其荧光强度含量随Erinain浓度的增加而增强。提示Erianin对口腔癌KB细胞的抑制作用可能与铁死亡相关。4.Fer-1和Erianin联合应用的结果表明:采用Fer-1和Erianin联合孵育KB细胞,Fer-1逆转了 Erianin造成的细胞损伤(P<0.001)。此外,经Fer-1处理后,Erianin诱导的细胞内MDA、ROS和GSH含量变化明显逆转(P<0.01),说明Erianin诱导口腔癌KB细胞发生铁死亡。5.免疫印迹法检测给予Erianin后细胞内铁死亡相关蛋白的含量变化:结果显示KB细胞中 Nrf2(P=0.001)、GPX4(P=0.027)、HO-1(P=0.017)、FTH1(P=0.031)的表达下调。当Fer-1和Erianin联合处理后逆转了细胞内Nrf2(P=0.006)、HO-1(P=0.035)和GPX4(P=0.049)的表达水平,表明Erianin通过Nrf2/HO-1/GPX4途径诱导KB细胞发生铁死亡。结论:1.Erianin抑制口腔癌细胞的增殖、迁移和Crizotinib抑制剂侵袭。2.Erianin可能通过抑制Nrf2/HO-1/GPX4通路诱导口腔癌细胞发生铁死亡从而发挥抗肿瘤作用。

黑木耳作为一种兼具药用价值和食用价值的大型胶质真菌,已经有上千年的历史。近年来,随着人3-Methyladenine试剂民生活水平的大幅度提高,越来越多的人逐渐重视饮食健康,而黑木耳作为药食同源的一种好气性腐生真菌,不仅能够满足人们对美食的需求,同时又可以预防高血压和高血脂等常见病。湿度胁迫作为逆境胁迫最主要的胁迫因素之一,对黑木耳生理活性的影响巨大。因此为了解湿度胁迫对黑木耳子实体生长发育带来的不利影响,本文探究了在不同空气湿度下黑木耳子实体的抗氧化作用,对不同空气湿度下的黑木耳Mn149的丙二醛及酶促和非酶促抗氧化系统的抗氧能力进行了测定,为深入研究木耳子实体抗氧化能力响应空气湿度的机制提供了理论参考,也为PR-171细胞培养未来对黑木耳子实体抗逆的研究奠定了基础。本文在空气相对湿度分别为95%、90%、80%、70%、60%、50%,分别采集黑木耳子实体,并测定了丙二醛(MDA)、6种酶类抗氧化剂和3种非酶类抗氧化剂,结论如下:(1)空气相对湿度低于90%,MDA含量升高,黑木耳子实体细胞膜体系中出现膜质过氧化现象,黑木耳子实体遭受了湿度胁迫。(2)空气相对湿度低于90%,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)酶活力升高,构成黑木耳子实体抵抗湿度胁迫的第一道防线。(3)抗坏血酸(ASA)含量仅在空气相对湿度80%较高,构成黑木耳子实体Maternal immune activation抵抗湿度胁迫的第一道防线。(4)空气相对湿度低于80%,谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活力和谷胱甘肽(GSH)含量较高,构成黑木耳子实体抵抗湿度胁迫的第二道防线。(5)黑色素含量仅在空气相对湿度70%较高,构成黑木耳子实体抵抗湿度胁迫的第二道防线。(6)抗坏血酸过氧化物酶(APX)不能协助黑木耳子实体抵抗湿度胁迫。

视网膜血管生成(Angiogenesis)是从已有的毛细血管通过血管内皮细胞的出芽、增殖、迁移、修剪及成熟等复杂的步骤形成新生血管的过程,受到细胞内外多种信号精细调控,其中任何一环节出现异常,都可能导致视网膜血管异常性眼病。家族性渗出性玻璃体视网膜病变(familial exudative vitreoretinopathy,FEVR)是其中一种遗传性致盲眼病,其主要特征是视网膜周边血管发育不完全,视力进行性下降,甚至失明,患病率可达4.6‰。疾病早期可使用激光光凝治疗渗漏,而疾病晚期缺乏有效的治疗方法。FEVR具有临床和遗传异质性,目前已报道的FEVR相关基因突变仅能解释约50%临床病例,因此确定新的致病相关基因并挖掘已知基因的新突变对于该病的分子诊断至关重要。Wnt信号通路是调控多种组织以及器官发育的重要通路之一,在selleckchem维持组织稳态、促进血管生成、调控炎症免疫反应及损伤修复等生理与病理过程中都发挥重要作用,该通路在视网膜血管生成及发育中也至关重要。本研究利用全外显子测序,筛选FEVR的致病候选基因及突变,并通过构建小鼠模型及体内外功能研究探究候选基因的致病机制,完善FEVR的致病基因突变谱,从而为深入探究该病的诊疗提供方向。本论文的主要研究内容如下:1.收取FEVR家系基因组DNA,利用全外显子测序技术及生物信息学分析筛选FEVR的候选致病基因及突变,通过SBiomimetic scaffoldanger测序验证并结合临床资料分析,考察相关基因突变位点的物种保守性,并进行突变的致病性预测。我们筛查到FEVR的致病基因P120基因及其3个突变、EMC1基因及其1个突变以及已知FEVR致病基因LRP5的4个突变、TSAPN12的6个突变、NDP的3个突变。2.P120基因在视网膜血管生成中的研究。本研究构建P120血管内皮特异性敲除小鼠模型,研究表明P120敲除后,小鼠视网膜出现血管生长迟缓、周围血管密度增大、内部血管密度降低、渗漏、动静脉交叉等FEVR样表型。利用体内外实验结合蛋白组学及挽救实验,发现P120缺失导致cadherin/catenin复合物的破坏和Wnt信号通路的抑制。并构建了P120i ECKO/+Ctnnb1i ECKO/+和P120i ECKO/+Ctnna1i ECKO/+双杂小鼠模型,发现P120和Ctnnb1、Ctnna1可能存在遗传学上的相互作用,进一步证明P120缺失引起的血管生成缺陷可能主要是由于Wnt信号受损,重复了Wnt相关FEVR小鼠模型(FVX-765zd4-/-,Lrp5-/-,Tspan12-/-,Ndp-/-,Ctnnb1i ECKO/i ECKO)典型表型。此外,还发现P120敲除可造成视网膜血管内皮细胞间的连接破坏并导致严重的渗漏及免疫反应,影响血管生长,这与传统Wnt相关的FEVR小鼠模型(Fzd4-/-,Lrp5-/-,Tspan12-/-,Ndp-/-,Ctnnb1i ECKO/i ECKO)有所不同。论文进而对FEVR家系中筛选的3个突变(Arg317Cys、Lys623Ter、Arg700Gln)进行体外功能验证,证实突变通过破坏cadherin/catenin复合物和抑制Wnt信号通路导致FEVR。本论文揭示P120通过破坏cadherin/catenin复合物和抑制Wnt信号通路导致FEVR的致病机制,为FEVR的治疗提供新靶点。3.EMC1在视网膜血管生成中的机制研究。本研究构建Emc1血管内皮特异性敲除小鼠模型,发现该小鼠出现典型的视网膜血管生长发育迟缓、渗漏的FEVR小鼠模型的表型,揭示了Emc1在小鼠视网膜血管发育中的重要作用。利用体内外实验结合转录组学分析及挽救实验,发现EMC1缺失通过影响FZD4受体的表达,异常调控Wnt/β-catenin信号通路,使血管内皮细胞增殖减缓,最终导致FEVR的发生。此外,本论文在FEVR家系中鉴定了1个EMC1的突变Ile762Val,该突变可导致Wnt/β-catenin通路活性降低。本研究揭示了EMC1通过影响FZD4蛋白表达而调控Wnt信号通路参与视网膜血管发育,其异常或可导致FEVR的发生。4.对LRP5基因的4个突变:c.1801G>T(p.Gly601Ter)、c.1965del C(p.His656Thrfs Ter41)、c.4445del C(p.Ser1482Cysfs Ter17)和c.4482del C(p.Pro1495Argfs Ter4)),TSAPN12基因的6个突变:(c.193C>G(p.Pro65Ala)、c.242G>C(p.Gly81Ala)、c.251G>A(p.Gly84Glu)、c.375G>A(p.Trp125Ter)、c.575_576del AG(p.Gln192Argfs Ter8)、c.689T>C(p.Ile230Thr),以及NDP基因的3个突变:c.124C>A(p.His42Asn)、c.329G>A(p.Cys110Tyr)、c.334_349del(p.Gly112Leufs Ter145)进行体外实验功能分析探究其致病机制。双荧光素酶报告基因实验表明该13个突变均导致Norrin/β-catenin信号通路活性下降。蛋白免疫印迹实验发现移码突变及无义突变可导致其基因编码蛋白的表达水平降低,所有突变均可造成Wnt通路相关靶基因下调。利用结构及功能分析,发现TSPAN12的4个错义突变造成TSPAN12蛋白膜定位受损;NDP的突变破坏了Norrin和FZD4或LRP5相互作用,利用过表达的TSPAN12蛋白可在一定程度上挽救NDP突变所造成的蛋白相互作用的破坏及Norrin/β-catenin信号通路活性的降低,为FEVR的治疗提供新方向。综上,本研究阐明了P120基因、EMC1基因在视网膜血管生成发育中的重要功能,同时探讨了LRP5、TSPAN12、NDP突变的致病机制,拓宽了家族性渗出性玻璃体视网膜病变致病基因和突变谱,为其诊疗提供了新的理论依据。

随着我国经济的快速发展,大量工业废水和生活污水等排入水中,导致水体受到污染。光催化半导体技术因其利用清洁可再生的太阳能,在处理水体污染中具有广阔的应用前景。随着近些年对半导体材料的不断探索,铋系光催化材料因其合适的带隙和优异的物理化学性能而受到越来越广泛的关注。本文以固相法制备的Bi_3O_4Cl为基础,通过与其他铋系半导体材料构建异质结提高光催化性能。该方式可以提高太阳光利用率,提高光生载流子的分离和迁移效率,进而更好地降解水溶液中的有机污染物。本文主要研究内容如下:(1)Bi_3O_4Cl/Bi_4Nb O_8Cl Z型异质结的构建及光催化降解有机污染物性能的研究:分别用固相法制备Bi_3O_4Cl和Bi_4Nb O_8Cl,通过将不同比例Bi_3O_4Cl和Bi_4Nb O_8Cl研磨和煅烧处理得到Bi_3O_4Cl/Bi_4Nb O_8Cl异质结催化剂。通过X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)等测试表征材料的形貌及物相,证明异质结复合材料的形成。以环丙沙星(CIP)和双酚A(BPA)为目标降解物进行光催化实验,结果表明Bi_3O_4Cl/Bi_4Nb O_8Cl光催化剂的降解性能大幅提高。通过紫外可见漫反射光谱(DRS)和光电化学等方法对复合体系进行表征,结果BMS-907351配制表明复合材料的带隙变窄且载流子迁移速率更快。Bi_4Nb O_8Cl的引入使Bi_3O_4Cl和Bi_4Nb O_8Cl之间形成Z型异质结,抑制复合材料载流子的复合并且保留了更多的空穴和超氧自由基参与降解过程。(2)Bi/Bi OCl/Bi_3O_4Cl异质结构的原Proteomics Tools位构建及光催化性能研究:本章在固相法制备的Bi_3O_4Cl的基础上,通过简单的溶剂热法合成Bi/Bi OCl/Bi_3O_4Cl三元异质结光催化剂。通过调控铋源,制备出不同比例的Bi/Bi OCl/Bi_3O_4Cl异质结光催化剂,并以罗丹明B(Rh B)和环丙沙星(CIP)为目标降解物研究Bi/Bi OCl/Bi_3O_4BemcentinibCl催化性能。X射线光电子能谱(XPS)表明Bi金属颗粒的引入使光催化材料的化学状态发生改变。通过透射电子显微镜(TEM)和氮气吸附脱附测试发现大量Bi OCl薄片和Bi纳米颗粒的负载在Bi_3O_4Cl上,使复合材料的比表面积增大,并且7%Bi/Bi OCl/Bi_3O_4Cl有更多的微孔。通过光致发光(PL)和电化学实验等测试表明Bi/Bi OCl/Bi_3O_4Cl中载流子转移速率提高且复合率降低。原位转化生成的Bi/Bi OCl/Bi_3O_4Cl异质结光催化剂由于异质结构和Bi纳米颗粒的协同作用而展示出良好的光催化活性。

背景:宫颈癌是一个全球性的健康问题,给社会带来相当大的经济和医疗负担。因此,有必要共同努力改善宫颈癌的治疗。尽管目前有多种治疗方案可用于治疗宫颈癌,如放化疗和新辅助化疗或辅助化疗,但局部复发和远处转移的比例不断增加,且晚期不能手术的宫颈癌治疗仍然是一个具有挑战性的问题。此外,不适合根治性治疗的复发性宫颈癌以及新发转移性宫颈癌被认为无法治愈,预后不佳。近年来,天然植物中药提取物的有效成分由于具有多渠道、多环节、多靶点、毒性小等诸多优势,已成为新化疗药物开发研究的热点。同时中药治疗肿瘤的机理是身心调理、通过扶正祛邪来提高机体的免疫力、抑制肿瘤的快速发展,达到人体和肿瘤的共生状态。基于我们前期的研究发现,从天然植物中药白芷中提取的单体Laduviglusib别欧前胡素具有一定的抗癌活性。在此研究背景下,进一步探索别欧前胡素的抗癌机理,为宫颈癌新化疗药物的开发研究奠定基础。目的:(1)验证别欧前胡素在体内和体外的抗癌活性;(2)探索别欧前胡素通过线粒体和死亡受体通路对宫颈癌He La和Si Ha细胞凋亡的影响;Bioactive metabolites(3)探索别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞发生氧化应激,以及活性氧与细胞死亡的关系;(4)研究别欧前胡素通过氧化应激调控内质网应激以及GRP78/PERK/DDIT3通路诱导宫颈癌Wnt-C59半抑制浓度He La和Si Ha细胞发生自噬;(5)通过生物信息学进一步揭示内质网应激蛋白GRP78的编码基因HSPA5在宫颈癌中的生物学功能、预后、免疫学价值。方法:(1)CCK-8细胞毒性实验检测不同浓度下别欧前胡素对宫颈癌细胞系He La、Si Ha、MS-751、Caski和正常宫颈Hcer Epic细胞增殖的影响;高内涵高通量动态检测系统、3D微球细胞模型建立、平板克隆实验检测不同浓度的别欧前胡素对宫颈癌He La和Si Ha细胞增殖能力的影响;(2)流式细胞技术检测别欧前胡素对宫颈癌He La和Si Ha细胞周期和凋亡的影响;(3)细胞划痕实验、高通量动态拍摄系统检测别欧前胡素对宫颈癌He La和Si Ha细胞迁移能力的影响;(4)Western Blot检测别欧前胡素对He La和Si Ha细胞周期蛋白Cyclin B和CDC2以及基质金属蛋白MMP-2、MMP-9的表达的影响;(5)建立BALB/c裸鼠宫颈癌He La细胞荷瘤模型,验证别欧前胡素对宫颈癌He La细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和裸鼠的生存状态;免疫组化、Western Blot验证别欧前胡素对瘤体组织中凋亡蛋白Caspase-3、-8和自噬蛋白LC3、p62的影响;(6)JC-10荧光探针在高内涵高通量成像系统下检测别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞凋亡和线粒体势能膜电位的变化;透射电镜检测别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞凋亡结构(即凋亡小体)改变;实时荧光定量PCR和Western Blot验证凋亡通路上核心蛋白和m RNA的表达;(7)DCFH-DA活性氧荧光探针结合激光共聚焦检测别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞中活性氧(ROS)的产生;免疫荧光显微镜检测别欧前胡素对宫颈癌He La和Si Ha细胞中LC3自噬荧光的产生;构建m RFP-GFP-LC3慢病毒稳转宫颈癌He La和Si Ha细胞株,通过激光共聚焦检测别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞自噬流的产生;透视电镜检测别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞自噬结构的改变(自噬小体);Western Blot检测别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞中自噬蛋白LC3、p62、ATG5、ATG12和内质网应激蛋白GRP78、PERK和e IF2α、DDIT3的表达;通过si RNA GRP78转染实验,验证别欧前胡素通过GRP78/PERK/DDIT3通路在He La和Si Ha细胞中调控的自噬诱导;(8)通过生物信息学分析了GRP78的编码基因HSPA5基因注释文件,从Gene Cards?数据库获得HSPA5基因的详细信息;从HPA数据库获得HSPA5基因在细胞中的位置信息;通过TCGA数据库分析HSPA5基因在泛癌中的表达,证实HSPA5基因在宫颈癌中的高表达;(9)通过在线数据库免疫组织化学、q-PCR、Western Blot验证了HSPA5基因在宫颈癌中的表达以及参与的细胞生物学行为、肿瘤免疫浸润、免疫检查点调控、敏感性靶点药物和临床预后。结果:(1)与对照组相比发现,别欧前胡素在不同浓度下抑制了宫颈癌He La、Si Ha、MS-751、Caski细胞的增殖,但对He La和Si Ha细胞的抑制作用最明显,对正常宫颈上皮Hcer Epic细胞无明显抑制作用,同时有效抑制了宫颈癌He La细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,对裸鼠的生存状态无明显影响;(2)与对照组相比,我们发现别欧前胡素抑制了He La和Si Ha细胞的迁移、阻滞了细胞周期、抑制了基质金属蛋白MMP-2、MMP-9和细胞周期蛋白Cyclin B、CDC2的表达;(3)别欧前胡素降低了宫颈癌He La和Si Ha细胞线粒体膜电位、诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞凋亡荧光的产生;透视电镜结果证明,别欧前胡素诱导He La和Si Ha细胞凋亡结构(凋亡小体)的改变;实时荧光定量PCR和Western Blot结果发现,别欧前胡素诱导了内源性凋亡通路蛋白Caspase-8、-9、Bax及Cyt-c和外源性凋亡通路蛋白Fas、FADD和Caspase-3的表达,下调Bc L-2、PARP、Pro-caspase-3、Pro-caspase-8、Pro-caspase-9的表达;(4)裸鼠瘤体免疫组化结果证实,别欧前胡素诱导瘤体组织中凋亡蛋白Caspase-3、-8的表达;(5)别欧前胡素诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞氧化应激的发生,促进了活性氧(ROS)的产生;(6)与对照组比较,别欧前胡素诱导了宫颈癌He La和Si Ha细胞LC3自噬荧光的产生;m RFP-GFP-LC3慢病毒转染实验结果证实,别欧前胡素诱导了He La和Si Ha细胞自噬流的产生;(7)透视电镜结果证明,别欧前胡素诱导He La和Si Ha细胞自噬结构(自噬小体)出现;(8)Western Blot结果证实,别欧前胡素诱导自噬蛋白LC3、ATG5、ATG12的表达,降低了p62蛋白的表达;别欧前胡素诱导了内质网应激的发生,伴随着内质网应激蛋白GRP78、PERK、e IF2α、DDIT3蛋白的表达升高,加入活性氧抑制剂(NAC)后,LC3、ATG5、ATG12和GRP78蛋白的表达降低,而p62蛋白的表达升高,说明氧化应激参与调控了内质网应激诱导的自噬;(9)si RNA转染实验结果,我们发现He La和Si Ha细胞转染si RNAGRP78后,GRP78的表达较对照组显著降低,同时别欧前胡素处理组中的PERK、DDIT、LC3的表达也降低,说明GRP89/PERK/DDIT3通路参与了别欧前胡素调控的自噬;(10)免疫组化结果表明,别欧前胡素诱导瘤体组织中自噬蛋白LC3的表达,降低了p62蛋白的表达;(11)生物信息学分析结果证实,HSPA5基因编码的蛋白质是热休克蛋白70(HSP70)家族的成员,该蛋白定位于内质网内腔,位于染色体9q33.3;HSPA5基因在细胞中主要位于细胞质内;(12)HSPA5基因在宫颈癌中高表达,参与调控宫颈癌的生物学功能;(13)HSPA5基因在宫颈癌中与患者的预后和总生存期呈负相关;参与调控多个免疫检查点和多种免疫细胞浸润;(14)HSPA5基因的表达量与cg14190817位点甲基化程度显著负相关;HSAP5基因与参与调控6种敏感化疗靶向药物。结论:(1)别欧前胡素通过线粒体和死亡受体通路诱导宫颈癌He La和Si Ha细胞凋亡从而发挥抗癌作用,在体内也显示出了抗癌活性;(2)别欧前胡素通过氧化应激调控内质网应激及GRP78/PERK/DDIT3通路调控宫颈癌He La和Si Ha自噬的发生;(3)GRP78的编码基因HSPA5参与了宫颈癌的预后、免疫相关检查点、细胞免疫浸润和宫颈癌的甲基化,是宫颈癌的一种潜在临床诊断标志物。

为了探析甜瓜（Cucumis melo L.）响应涝害胁迫的分子机制，采用转录组和蛋白组学方法研究了甜瓜耐涝型材料L45和涝敏感型材料L39在正常培养和涝害胁迫处理条件下的差异表达基因和蛋白。结果表明，L39-W vs L39-C的差异表达基因数为3 532个，差异表达蛋白数为105个；L45-W vs L45-C的差异表达基因数为1 842个，差异表达蛋白数为38个。转录组与蛋白组联合分析发现，L39-W vs L39-C中38个基因在mRNA和蛋白质水平上联合上调表达，12个基因联合下调表达；L45-W vs L45-C中7个基因联合上调表达，3个基因联合下调表达。KEGG显著性富集分析结果发现，L39-W vs L39-C中联合上调表达的基因显著更多富更多集在类黄酮生物合成、苯丙烷生物合成、苯丙氨酸代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢等；而L45-W vs L45-C中联合上调表达的基因Bio digester feedstock显著富集在α-亚麻酸代谢、类黄酮生物合成、苯丙烷生物合成、亚油酸代谢等。本研究联合转录组与蛋白组数据进行了差异表达基因与蛋白分析，为进一步挖掘甜瓜响应涝害胁迫的关键基因及通路奠定了一定基础。