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骨髓增生异常综合征（MDS）和急IACS-010759试剂性髓系白血病（AML）是临床常见的髓系肿瘤，约30%的高风险MDS最终将进展为AICI 46474ML，免疫微环境失调被认为是MDS和AML的关键致病因素。免疫检查点（IC）作为一类免疫抑制分子，在免疫细胞上表达，可以抑制免疫Biomass by-product细胞的激活。肿瘤细胞可能会利用这些检查点分子，逃脱机体的免疫监视与杀伤，发生免疫逃逸，加速肿瘤细胞转移。免疫检查点抑制剂可阻断IC与其配体结合，抑制肿瘤免疫逃逸作用，提高免疫系统对肿瘤细胞的杀伤力，从而达到治疗目的。程序性死亡受体1/细胞程序性死亡配体1、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4、淋巴细胞激活基因3、T淋巴细胞免疫球蛋白和黏蛋白3、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B及整合素相关蛋白抑制剂的开发为MDS/AML的治疗提供了新的思路，可以为MDS/AML的免疫治疗提供有意义的借鉴。

成纤维细胞生长因子(FibrabIACS-10759last growth factors, FGFs)是一组具有保守核心结构域(约120个氨基酸)的信号蛋白，包括6个亚家族成员。FGF21是FGF19亚家族中的一员，作为重要的代谢调控信号分子，FGF21作用于肝脏、胰岛和脂肪组织，在肥胖、非酒精性脂肪肝、Ⅱ型糖尿病等疾病的临床诊疗中极具潜力。研究发现人FGF21(hFGFNamed Data Networking21)在大肠杆菌中表达量低、半Ipatasertib IC50衰期短、稳定性差，严重制约其成药可能性。本研究通过生物学信息分析，利用密码子优化策略调整密码子偏好性，以pET-32a(+)-Fgf21表达载体为模板，采用定点突变，构建突变载体，在大肠杆菌中进行表达并纯化。结果显示，将FGF21的58位亮氨酸变为缬氨酸(L58V),以及108位谷氨酰胺变为精氨酸(Q108R),突变蛋白(mutFGF21_((L58V)),mutFGF21_((Q108R)))在大肠杆菌中可实现高效可溶表达。HepG2细胞糖吸收试验进一步显示，mutFGF21_((L58V))和mutFGF21_((Q108R))蛋白处理后的细胞对葡萄糖的摄取利用增加，培养基中残余葡萄糖量减少，与野生型相比，突变型蛋白促进糖吸收效果随着蛋白浓度增加更为明显。

目的 探究外周血降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）联合血小板参数检测在细菌性血流感染（BSI）中的应用价值。方法 选取就诊的80例细菌性BSI患者为观察组，同时选取同期体检健康者38例为对照组，比较两组外AZD1152-HQPA细胞培养周血PCT、CRP及血小板参数数[血小板计数（PLT）、血小板分布宽度（PDW）、血小板压积、血小板平均体积（MPV）]水平，不同病情程度患者外周血PCT、CRP及血小板参数水平，采用Spearman相关性检验分析外周血PCT、CRP及血小板参数水平与病情程度的相关性，采用受试者工作曲线（ROC）分析外周血PCT、CRP联合血小板参数水平在细菌性BSI诊断中的应用价值。结果 观察组外周血PCT、CRP、PDW、血小板压积及MPV水平显著高于对照确认细节组（P<0.05）,PLT水平显著低于对照组（P<0.05）；重症组外周血PCT、CRP、PDW、血小板压积及MPV水平显著高于非重症组（P<0.05）,PLT水平显著低于非重症组（P<0.05）;SpearmanBest medical therapy相关性分析结果显示，细菌性BSI患者外周血PCT、CRP、PDW、血小板压积及MPV水平与病情程度均呈正相关（r=0.635、0.622、0.598、0.626、0.531,P<0.05）,PLT水平与病情程度呈负相关（r=-0.607,P<0.05）;ROC曲线结果显示，外周血PCT、CRP联合血小板参数水平诊断细菌性BSI的AUC为0.821(P<0.05)，高于PCT、CRP、PLT、PDW、血小板压积及MPV单独检测的0.634、0.640、0.697、0.594、0.599、0.674(P均<0.05)，联合检测诊断价值更高。结论 外周血PCT、CRP联合血小板参数检测有助于提高细菌性BSI的诊断价值，利于早期治疗工作开展。

目的:主要探讨妊娠相关重症肌无力(myasthenia gravis,MG)孕产期复发的危险因素,并建立Nomogram预测复发概率模型,进一步指导育龄期MG女性合理计划妊娠。方法:本研究纳入了从复旦大学附属华山医院和内蒙古医科大学赤峰临床医学院2015年1月至2021年10月登记的妊娠相关MG患者113例,均为孕前发病。设计统一的调查表收集患者人口学、临床特征等基线数据,并进行回顾性分析。根据MG患者孕产期间1年内MG日常生活量表(activities of daily living,ADL)评分变化分为复发组和未复发组。所有MG患者为孕前达到MG-ADL≤2的稳定状态,复发组52例患者孕产期出现MG症状恶化,且ADL增加≥1分;未复发组61例患者孕产期MG症状稳定或改善,且ADL减低≥1分。将孕前、孕产1年内分为七个阶段:孕前(BP)、孕0~3月(DP1)、孕4~6月(DP2)和孕7~9月(DP3)以及分娩/流产后0~3月(PP1)、产后4~6月(PP 2)和产后7~12月(PP3+4)。1Ipatasertib.记录复发组患者在DP1、DP2、DP3、PP1、PP2、PP3+4期间发病次数。2.比较复发组组内DP1、DP2、DP3、PP1、PP2、PP3+4与BP的MG-ADL、MG QOL-15平均评分,并进行差异性分析。3.比较两组人口学及临床特征,对可能导致孕产期病情复发的危险因素进行分析。通过SPSS26.0软件进行数据统计,将P<0.05的研究指标纳入logistic回归进行多因素分析,并筛选出影响MG病情复发的危险因素。使用R软件(版本4.2.0)绘制Nomogram预测复发概率模型,妊娠相关MG患者孕产期间复发概率预测情况及其相关危险因素可视化,并通过一致性指数(C-index)、受试者工作特征曲线(ROC)endocrine autoimmune disorders下面积来selleck NMR检验模型预测水平,P<0.05存在统计学意义。结果:本研究共入组妊娠相关MG患者113例,其中复发组52例(46%)患者孕产期病情恶化;未复发组61例(54%)患者,其中孕产期43例(38%)病情稳定,18例(16%)病情改善。1.复发组患者在各个孕产时期共发病58次,DP1期20次(34.5%),DP2期3次(5.2%),DP3期2次(3.4%),PP1期28次(48.3%),PP2期2次(3.4%),PP3+4期3次(5.2%)。2.复发组组内:与BP比较,DP1、PP1阶段患者MG-ADL、MG-QOL15平均评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.本研究患者发病年龄为15~35(26.08±2.39)岁,在首次发病年龄、首次发病时MGFA分型、MG抗体类型、确诊MG类型、甲状腺异常、孕前发生肌无力危象、血糖异常、血压异常、生产结局、妊娠前6月治疗情况两组间无统计学差异(P>0.05)。单因素分析有意义的变量包括:分娩/流产年龄(P=0.021)、孕前病情稳定时间(P=0.001)、孕产期间治疗情况(P=0.001)、孕前合并胸腺增生(P=0.001)、合并胸腺瘤(P=0.046)、胸腺切除术(P=0.024)两组间有统计学差异。多因素分析结果:将单因素分析有意义的变量进行多元logistic分析,结果是分娩/流产年龄(20~35岁)(OR值=4.746,P=0.008)、孕前病情稳定时间(<2年)(OR值=4.359,P=0.003)、孕产期间治疗不足(OR值=3.363,P=0.042)、胸腺增生(OR值=3.258,P=0.014)、孕前未行胸腺切除术(OR值=7.912,P=0.007)两组间有统计学差异。结论:1.MG复发多见于女性孕0~3月和分娩/流产后0~3月两个阶段。2.妊娠相关MG患者孕产期病情复发的危险因素探索:(1)分娩/流产年龄在20-35岁期间,孕产期间病情容易复发;(2)孕前病情稳定时间小于2年,孕产期间病情容易复发;(3)孕产期间治疗不足,孕产期间病情容易复发;(4)胸腺增生可能会增加孕产期MG复发风险;(5)伴有胸腺增生/胸腺瘤的患者,孕前未行胸腺切除术可能会在孕产期间MG病情复发。3.Nomogram预测模型的建立:(1)列线图在临床用于预测妊娠相关MG患者孕产期的复发概率,总分越高,复发风险越高;(2)该预测模型具备一定的预测能力,可为MG女性合理妊娠提供一定的参考。

目的 探讨血小板源性转化生长因子β_1(TGFβ_1)对胃腺癌细胞增殖和迁移的影响。方法 使用胃腺癌AGS和MKN-45两种细胞株，分别与健康人血小板、胃腺癌血小板、胃腺癌血小板+NCsiRNA、胃腺癌血小板+TGFβR1siRNA351共培养，进行CCK细胞增殖实验和划痕实验。另有一组未加入血小板为未处理组。结LY2835219供应商果 CCK增殖实验发现两株细胞的未处理组与健康人血小板组的OD值无差别（P> 0.05），胃腺癌血小板组的OD值均明显低于未处理组与健康人血小板组（P <0.05）。划痕实验表明两株selleckchem细胞的未处理组、健康人血小板组、胃腺癌血小板+TGFβR1siRNA351组划痕面积无差异（P> 0.05），胃腺癌血小板组、胃腺癌血小板+NCsiRNA组划痕内面积均明显小于其他组（P <0.05）。结论 胃腺癌患者的血小板源Polyglandular autoimmune syndrome性TGFβ_1在体外可以抑制胃腺癌细胞的增殖和促进胃腺癌细胞的迁移。

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与培美曲塞联合卡铂治疗晚期肺腺癌患者临床疗效的关系。方法 前瞻性选取2017年9月至2021年9月在眉山市人民医院接受治疗的肺腺癌患者120例，均接受培美曲塞联合卡铂治疗，采用测序法检测EGFR基因突变情况，并根据结果将120例患者分为EGFR野生型组VX-445核磁69例和EGFR突变型组51例。比较两组患者客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)、总不良反应发生率、1年无进展生存率及总生存率。结果 EGFR突变型组患者病灶个数多发及远处转移器官≥2个占比分别为41.18%、15.69%,均分别低于EGFR野生型组(68.12%、42.03%),差异均有统计学standard cleaning and disinfection意义(P<0.05)。EGFR突变型组患者ORR为43.14%,DCR为90.20%,分别明显高于EGFR野生型组(24.64%、75.36%),差异均有统计学意义(P<0.05)。EGFR突变型组患者总不良反应发生率(49.02%)与EGFR野生型组(56.52%)相比，差异无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier曲线显示，EGFR突变型组患者1年无进展生存率(47.06%)明显高于EGFR野生型组(21.74%),差异有统计学意义(P<0.05);1年总生存率(60.78%)明显高于EGFR野生型组(34.78%),差异有统计学意义(P<0.05)。COX回归分析显示，EGFR基因型及疾病控制情况是影响肺腺癌患者无进展生存和总生存的独立危险因素(P<0.05)。结论 EGFR基因突变的肺腺癌患者对培美曲塞联合卡铂的治疗更敏感，临床疗效、1年无进展生存率及总生存率均Bcl-2抑制剂相对较高。

目的 评价血清17-羟孕酮(17-OHP)和促肾上腺皮质激素(ACTH)两种指标联合检测在新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)早期诊断中的应用价值。方法 选取2019年1月至2022年6月该院收治的CAH 38例作为观察组，同期单纯新生儿高胆红素血症38例作为对照组。收集临床资料，并对临床常用血清指标孕酮(PROGⅢ)、17-OHP、ACTH、睾酮(TESTO)单指标和两项指标联合检测对新生儿CAH的早期诊断效能进行分析。结果 血清PROGⅢ、17-OHP、ACTH、TESTO的水平在两组间比较，差异均有统计学意义(P<0.001);多因素logistic回归分析显示PROGⅢ、17-OHP、ACTH是新生儿CAH患病的独立影响因素(P<0.05)。单指标和两项指标联合检测的受试者工作特征曲线(ROC曲Stem cell toxicology线)分析表明17-OHP+ACTH联合检测的曲线下面积(AUC)最高为0.954(95%CI 0.SBE-β-CD化学结构906～1.000),灵敏度为89.5%,特异度为94.7%。结论 CAH患儿PROGⅢ、17-OHP、ACTHFUT-175、TESTO水平显著增高，17-OHP和ACTH两项指标联合检测对新生儿CAH有较高的早期诊断效能。

糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)又称粘多糖,是由已糖醛酸和N-乙酰基葡萄糖胺或N-乙酰基半乳糖胺的重复二糖单元组成的一种长线形杂多糖。根据单糖残基种类,糖苷键类型以及硫酸基的数目与分布,糖胺聚糖可分为:透明质酸(hyaluronic acid,HA)、硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)、硫酸皮肤素(dermatan sulfate,DS)、硫酸角质素(keratin sulfate,KS)、硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)和肝素(heparin,HP)。糖胺聚糖与生长因子、趋化因子等生物信号分子相互作用,在抗肿瘤、抗凝血、抗炎症和抗衰老等方面有着广泛的临床应用。糖胺聚糖合酶(glycosaminoglycan polymerase)是催化GAGs生物合成的糖基转移酶的统称。在细胞内,糖胺聚糖合酶通过将单糖从单糖供体上转移到糖链末端,合成各类GAGs骨架。糖胺聚糖合酶作为糖工程中重要的工具酶分子,已广泛应用于肝素、软骨素和透明质酸的体外酶法合成及细胞工厂的构建等。然而目前被发掘且完成了催化特性表征的糖胺聚糖合酶数量非常有限(仅有大约40余种),加之天然酶分子严格的底物特异性,较低的催化活性和异源表达水平表达,使得发掘新来源的糖胺聚糖合酶元件,或通过改造现有的酶分子获得可以高效合成特定结构的低聚糖的糖胺聚糖合酶具有深刻的意义。蛋白质定向进化是指利用人工驱动的进化来改造蛋白质的功能和性质的方法。通过构建突变蛋白质库,结合高通量筛选技术,可以在较短时间内获得新功能的蛋白质。更“聪明”的突变文库及更高效的活性筛选方法,是提升定向进化成功率的两个关键因素。筛选获得理想表型的突变蛋白在大多数情况下是一个随机过程,突变文库丰度的提升可以增加获得理想表型的机率,但也增加了筛选的难度和成本。因此,开发高通量的筛选方法不但可以大大提高定向进化的成功率,而且直接决定了从大型突变库中获取理想表型的效率,减少时间和成本。但是囿于与糖苷键的形成相关的荧光和吸光度没有显著变化,导致高通量分析糖胺聚糖骨架合成过程中转糖基的反应极具挑战性,严重阻碍了利用定向进化提升相关糖基转移酶催化活性,拓宽其底物范围等相关研究。因此开发高通量的糖胺聚糖合成酶活性分析方法并应用于糖链合成关键酶的发掘与定向进化具有重要的应用价值。本论文基于以上背景展开,研究内容包括:1.基于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168,B.subtilis 168)的软骨素合酶活性快速分析方法的建立及其在软骨素合酶发掘中的应用。(1)基于枯草芽孢杆菌的软骨素合酶活性快速分析方法的建立:课题组前期通过代谢工程改造,已构建完成可利用培养基中叠氮单糖合成携带叠氮软骨素骨架的工程枯草芽孢杆菌:BS168SSAC。该菌株经诱导表达双功能软骨素合酶(E.coli K4 capsular polysaccharide polymerase,KfoC)后,利用外源的 N-(4-戊炔基)-叠氮乙酰氨基半乳糖(N-(4-pentynoyl)-azidoacetyl-galactosamine,Ac4GalNAz)合成叠氮基团修饰的软骨素骨架多糖。利用叠氮基团易与炔基基团发生点击化学反应的特点,可以实现含炔基的荧光标记物与细菌携带的叠氮荚膜多糖共价结合。本论文以该工程菌株出发,经过一系列尝试,成功将软骨素合酶的酶活与叠氮软骨素的荧光强度相关联,建立了基于枯草芽孢杆菌的软骨素合酶活性快速分析方法。(2)基于枯草芽孢杆菌的软骨素合酶活性快速分析方法的优化:本论文在探究了筛选过程中的最适诱导PF-03084014抑制剂时间及非天然可点击标记单糖Ac4GalNAz的浓度后,对宿主细胞内软骨素骨架合成路径进行了优化。在最优筛选条件下,携带叠氮多糖菌体的荧光数据分析与对照菌株比较表现出更显著的统计学差异。(3)基于枯草芽孢杆菌的软骨素合酶活性快速分析方法在新型软骨素合酶发掘中的应用:绘制软骨素合酶的蛋白序列进化树,根据其中亲缘关系的远近,建立软骨素合酶筛选文库(10种与软骨素合酶编码基因相似度较高的基因)。利用优化完成的活性快速分析方法对文库进行高效筛选,确定6个疑似软骨素合酶编码基因。随后,借助大肠杆菌表达系统表征这些重组酶分子的确具有软骨素合酶活性。至此,我们利用代谢工程改造的枯草芽孢杆菌,通过点击化学反应标记非天然基团的多糖,建立了一种高效的软骨素合酶筛选方法,并筛选获得6个软骨AZD2281素合酶家族新成员。2.基于大肠杆菌(Escherichia coli O10:K5(L):H4,E.coli K5)的肝素合酶活性高通量筛选方法的建立及其在肝素合酶定向进化中的应用。(1)基于大肠杆菌的肝素合酶活性高通量筛选方法的建立:基于枯草芽孢杆菌的软骨素合酶活性快速分析方法成功发掘6个新型软骨素合酶后,我们尝试基于类似原理进一步提高筛选效率以适应更高样本量突变文库,进而实现肝素合酶的随机定向进化。课题组通过一系列代谢工程改造已构建完成可利用培养基中叠氮单糖合成携带叠氮肝素骨架的工程E.coli K5,并命名为K5SSAH。该菌株在诱导表达巴斯德氏杆菌双功能肝素合酶2(Pasteurella multocida heparosan synthases 2,PmHS2)后,利用外源的N-(4-戊炔基)叠氮基乙酰基氨基葡萄糖(N-(4-pentynoyl)-azidoacetyl-glucosamine,Ac4GlcNAz)可产生叠氮基团修饰的肝素骨架,炔基荧光标记物可与细菌携带的叠氮肝素多糖共价结合。本论文以该工程菌株出发,经过一系列尝试,成功将肝素合酶活性与菌体荧光强度相关联,建立了基于大肠杆菌的肝素合酶活性高通量筛选方法。(2)基于大肠杆菌的肝素合酶活性高通量筛选方法的优化:本论文探究了筛选ATP bioluminescence过程中的最适诱导时间及非天然可点击标记单糖AC4GlcNAz浓度,以提高携带叠氮多糖菌株与对照菌株之间的荧光数据差异。(3)基于大肠杆菌的肝素合酶活性高通量筛选方法在肝素合酶定向进化中的应用:以PmHS2为定向进化出发蛋白,通过多序列比对、丙氨酸扫描并结合PmHS2的高级结构,建立肝素合酶筛选文库(8000种不同氨基酸组合的PmHS2突变序列)。利用优化完成的活性高通量筛选方法对文库进行高通量筛选。通过荧光激活细胞分选技术(fluorescence activated cell sorting technology,FACS)富集相对荧光强度较高的细胞,完成初筛;通过酶标仪分析富集后的重组细胞的荧光强度完成复筛。成功筛选获得2个疑似活性提高的肝素合酶突变基因。随后,借助大肠杆菌表达系统,分别重组表达该疑似基因,表征这些突变酶分子确定其GlcNAc转移酶活性较野生型PmHS2分别提升了 4.48倍和2.63倍。随后,设计和构建了其组合突变体中对应的单位点突变体以确定单个位点突变后对于PmHS2活性提高的贡献程度。至此,我们利用代谢工程改造的E.coli K5,通过点击化学反应标记非天然基团的多糖,建立了一种高通量的肝素合酶筛选方法,筛选获得2个活性提高的肝素合酶突变体并发现影响PmHS2活性的关键氨基酸位点。上述高活性突变体的获得,证明了我们建立的筛选方法有效应用于肝素合酶高通量筛选的潜力。

甜味是食物摄入的重要驱动因素，是最受欢迎的味觉之一。目前，甜味信号的传导通路与影响甜味感觉的机制已有初步了解，人体甜味感觉至少由两类信号通路表达，一类由味觉受体第一家族成员二(Taste receptor family 1 member 2，T1R2)和味觉受体第一家族成员三(Infant gut microbiotaTaste receptor family 1 member 3，T1R3)形成的异源二聚体Pevonedistat IC50介导；另一类由钠-葡萄糖共转运蛋白(Sodium-glucose co-transporters，SGLT)与葡萄NSC125066纯度糖转运蛋白(Glucose transporters，GLUT)介导。本文综述了T1R2/T1R3异源二聚体结构以及甜味信号传导机制，探讨了苦味、酸味、鲜味、抗甜物质、芳香化合物、唾液、肥胖、年龄等体内、外因素对甜味感知的影响；并指出了当前研究的不足之处：目前使用的非卡路里甜味剂(Noncaloric sweeteners，NCSs)在减少肥胖和糖尿病方面收效甚微、其他四味对甜味感觉的交叉互作研究较少、抗甜物质的调节机制在受体水平上的分子基础仍不清楚和甜味味觉研究中使用啮齿动物代替人类具有一定的局限性。本文旨在理解甜味物质如何从复杂的基质中发挥作用，为今后NCSs食品的开发与应用提供理论支持与思路借鉴。

针对肿瘤部位低pH值、高葡萄糖浓度的微环境特点,设计并制备了pH/葡萄糖双响应载药胶束对葡聚糖进行改性,先通过酯化反应与苯硼酸结合,再通过葡萄糖响应的苯硼酸酯键与具有二醇结构的维生素B_2偶联,形成两亲性聚合物,该聚合物在水溶液中能够自组装形成胶束,Tissue Slides包封疏水药物阿霉素.用核磁共振氢谱和动态光散射等对该载药胶束进行表征,并模拟人体生理环境进行药物体外释放行Pexidartinib纯度为研究.结果表明,阿霉素在载药胶束内能够持续释放,且能降低环境pH值、增大葡萄糖浓度,从而加快药物释放速度.由于肿瘤部位的pH值低于正常组织、葡萄糖浓度高于正常组织,而具有四面体结构的苯硼酸可以与顺式二醇化合物(如葡selleck NMR萄糖)形成稳定的苯硼酸酯,使平衡向亲水形式增加、疏水形式减少的方向改变.因此,以苯硼酸为基底的材料具有葡萄糖响应性,使其成为治疗肿瘤相关疾病的理想材料.