DuDu365生物天地

氯吡脲是一种人工合成的苯脲衍生细胞分裂素,广泛用作植物生长调节剂,主要用于增加猕猴桃和葡萄等水果的大小。农用化学品的频繁使用可能导致食品中存在残留物,我国政府部门明确规定了氯吡脲在不同果蔬中的残留量。为了确保监测系统在食品风险管理方面的有效性,目前针对氯吡脲残留检测以色谱为主的仪器分析方法。仪器检测结果比较可靠,但仪器昂贵、耗时,需要训练有素的专业人员实现检测。基于抗体和抗原特异性结合的免疫分析已成为用于测定痕量分析物的成熟技术,相比色谱分析具有操作简便、高通量、结果快的优点。免疫测定通常使用单克隆抗体,为了实现这一目标,生产具有灵敏度高、特异性好、稳定性强的抗体至关重要。因此,本课题旨在筛选可识别氯吡脲的单克隆抗体,同时基于单克隆抗体建立了对氯吡脲残留可追溯性的磁珠酶联免疫吸附分析(ELISA)量化方法。为了避免杂交瘤细胞的突变,研制了制备成本低、易获得的单链抗体。本论文所做的工作为氯吡脲残留的快速检测提供了新思路,具体研究内容如下:1.氯吡脲的单克隆抗体制备为了制备高灵敏度的抗氯吡脲单克隆抗体,利用异源包被筛选,选取氯吡脲偶联卵清蛋白的完全抗原(CPPU-OVA)作为免疫原,在杂交瘤细胞筛选以及ELISA实验分析均使用氯吡脲偶联牛血清蛋白的完全抗原(CPPU-BSA)作为包被原,进行了三轮亚克隆筛选得到两株稳定分泌抗体的细胞株(14G1、16B1)。通过间接竞争ELISA比较两株杂交瘤细胞产生在腹水的抗体灵敏度,最终选择14G1杂交瘤细胞株用于生产单克隆抗体。14G1杂交瘤细胞分泌的抗体亚型为Ig G1型,经辛酸-硫酸铵法纯化后的亲和常数(Ka)为4.74×10~(10)L/mol,为高亲和力抗体。经抗原包被浓度、工作缓冲液相关参数条件优化,最终优化的抗体的IC_(50)为0.0253 ng/m L,特异性好,线性范围(IC_(20)～IC_(80))为0.005～0.231 ng/m L,所制备的单克隆抗体为氯吡脲免疫分析方法的构建提供重要的生物材料。2.磁珠ELISA方法的建立及在猕猴桃和葡萄样品氯吡脲的检测应用研究使用磁珠纳米材料构建的免疫分析方法能够提高检测的灵敏度并且可以实现对实际样品残留的快速检Gene biomarker测。Berzosertib抑制剂以链霉亲和素磁珠偶联生物素化氯吡脲抗原的复合物作为包被抗原,HRP偶联的抗氯吡脲单克隆抗体作为一抗来构建直接竞争磁珠ELISA(MB-ELISA)反应体系。经过相关参数条件优化后的MB-ELISA的IC_(50)为0.0061 ng/m L,在35 min内完成检测,大大缩短分析时间,并且与其他类似物没有交叉反应。将常规ELISA、MB-ELISA和HPLC用于猕猴桃和葡萄样品中氯吡脲的添加回收实验。结果表明,常规ELISA和MB-ELISA的基质分别稀释200倍、100倍。三种分析方法的加标回收率分别为99.0%～117.4%、86.0%～120.0%和82.0%～116.5%,变异系数都小于14.3%。验证了免疫分析方法在猕猴桃和葡萄样品检测的实用性和准确性,可用于水果中氯吡脲残留的高通量筛选检测。3.氯吡脲单链抗体的制备及分子识别机理的初步研究基因工程抗体(单链抗体)可替代传统抗体的制备途径。从14G1杂交瘤细胞株提取m RNA并反转录成c DNA,以此为模板扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),其两个基因片段通过连接肽组装成单链抗体(sc Fv)基因,将sc Fv插入p ET32m和p ET32m-MBP载体上并在大肠杆菌里实现体外的重组蛋白表达。经过Ni柱纯化并建立了sc Fv-ELISA曲线,其对氯吡脲的IC_(50)为0.13ng/m L,仍然保留了原单克隆抗体的结合能力,可以作为氯吡脲单克隆抗体制备的替代方法,但是发现融合蛋白(MBP-sc Fv)失去了对氯吡脲小分子的结合能力。最后使用同源建模、分子对接等计算模拟,显示了sc Fv中的Asn30(CDR1)、Trp32(CDR1)、Ser99(CDR3)参与氢键相互作用,这为抗体进化、免疫结合机制提供了信息和理论基础。综上所述,本论文制备了高灵敏度、高特异性的抗氯吡脲单克隆抗体和单链抗体;基于单克隆抗体构建了磁珠ELISA实现了快速、高灵敏度的分析检测;ELISA、MB-ELISA分析方法均可满NSC 125973足在实际样品的检测需求。

目的 分析三期动态增强MSCT联合AFP、TSGF及AFP-L3检测对原发性肝癌的诊断价值。方法 选取本院2017年4月至2019年4月收治的59例原发性肝癌患者作为研究对象,分析不同患者中血清AFP、TSGF及AFP-L3含量;以病理诊断为PD0325901说明书金标准,比较MSCT、血清AFP、TSGF及AFP-L3检测以及四者联合诊断原发性肝癌的准确性、敏感性、特异性。结果 肝癌组患者AFP、TSGF及AFP-L3含量显著高于对照组(P<0.05)。MSCT联合血清AFP、 TSGF及AFP-L3诊断原发性肝癌的诊断灵敏性、特异性和准确性分别为明显高于单一的血清Aimmune evasionFP、TSGF及AFP-L3及MSCT检测(P<0.05JQ1使用方法),单独检测时,其灵敏度均低于80%,而联合诊断时,其灵敏性、特异性和准确性均高于9 8%。结论 MSCT检查、血清AFP、TSGF及AFP-L3均可检出肝细胞肝癌,但是四者联合诊断准确率更高,更具有临床应用价值。

目的:研究在乳腺癌Trichostatin A保乳手术后采用放射治疗优化方案的临床应用效果。方法:选择本院2019年1月至2020年12月早期乳腺癌实施保乳手术后患者80例作为研究对象,按照数字随机表法分为对照组和研究组,每组各40例。对照组采用常规放疗方案,研究组采用放射治疗优化方案,观察两组患者的临床效果、不良反应情况以及放疗后美容效果分析,统计研究组和对照组患者局部复发与远处转移情况。结果:研究组与对照组的放疗反应对比来看,两组患者的晚期皮肤反应、急性皮肤反应、放射性肺炎、骨髓抑制、食管黏膜反应等方面均无显著差异(P>0Non-specific immunity.05);研究组整体满意度为97.50%;对照组整体满意度为95.0%,两组对于放疗后美容效果满意率无差异(P>0.05),但是研究组的放疗次数、selleck Lorlatinib放疗疗程、放疗费用等情况均明显低于对照组(P<0.05)。研究组总复发率为7.50%;对照组总复发率为25.0%;研究组患者复发率远低于对照组复发率(P<0.05)。结论:针对在乳腺癌保乳手术后采用放射治疗优化方案临床效果好,还可以缩短疗程,减轻患者经济负担,可以在临床推广和应用。

目的：探讨甘油三酯葡萄糖乘积（Ty G）指数、红细胞分布宽度（RDW）、血清尿酸（UVX-661试剂A）、降钙素原（PCT）与冠心病患者冠状动脉狭窄程度和短期预后的关系。方法：选取2017年1月至2021年12月我院收治的150例冠心病患者，均行冠状动脉造影并以Gensini积分系统评估冠状动脉狭窄程度，分为轻度组、中度组和重度组，比较各组的Ty G指数、RDW、UA、PCT水平，以Pearson相关系数分析上述指标与Gensini积分的相关性。患者出院后均随访6个月，根据有无发生主要心血管不良事件（MACE）分为预后良好组和预后不良组，以多因素Logisitc回归分析预后的影响因素，以受试者工作特征（ROC）曲线分析对预后的预测效能。结果：不同冠状动脉狭窄程度患者的Ty G指数、RDW、UA、PCT水平差异均表现为，从轻度到重度依Biodiesel-derived glycerol次升高（P<0.05）。Pearson相关性分析显示，冠心病患者的Ty G指数、RDW、UA、PCT水平与Gensini积分均呈正相关（P<0.05）。预后不良组的甘油三酯（TG）、Gensini积分、Ty G指数、RDW、UA、PCT水平均高于预后良好组（P<0.05）；多因素LogisAlpelisib小鼠tic回归分析显示，TG≥3.5 mmol/L、Gensini积分≥30分、Ty G指数≥5、RDW≥12.8%、UA≥380μmol/L、PCT≥35μg/L是冠心病患者预后不良的危险因素（P<0.05）。ROC曲线分析显示，Ty G指数、RDW、UA、PCT单独及联合预测冠心病患者预后不良的曲线下面积分别为0.786、0.793、0.794、0.789和0.948，联合预测效能明显更高。结论：冠心病患者的Ty G指数、RDW、血UA、PCT水平与冠状动脉狭窄程度呈正相关，其均为患者短期预后的影响因素，联合检测上述指标对患者短期预后有一定预测价值。

目的:观察赋能教育在乳腺癌植入式静脉输液港病人健康教育中的应用效果。方法:通过便利抽样法选取医院2020年7月—2021年6月收治的80例乳腺癌化疗病人作为研究对象，根据病人入院时间将病人分为对照组(2020年7月—2020年12月)、观察组(2021年1月—2021年6月),每组40例selleck产品。对照组应用常规健康教育，观察组应用赋能教育模式的健康教育，干预前后采用自我护理能力测定量表(SECA)、一般自我效NSC125066化学结构能感量表(GSES)对两组病Endodontic disinfection人的自我护理能力、自我效能感进行评价，比较两组病人自我护理能力、自我效能感、输液港相关知识掌握程度以及并发症发生率。结果:干预后观察组病人SECA各维度得分及总分均明显高于对照组(P<0.05);干预后观察组病人GSES各维度得分及总分均明显高于对照组(P<0.05);观察组输液港相关知识掌握程度明显优于对照组(P<0.05);观察组并发症发生率为10.00%,明显低于对照组的30.00%(P<0.05)。结论:赋能教育模式的健康教育能够提高乳腺癌植入式静脉输液港病人自我效能感、自我护理能力以及输液港相关知识掌握程度，降低并发症发生率。

为科学评估柳州市规模化养殖环境下肉鸭的高致病性禽流感（H5和H7亚型）免疫抗体水平和疫情发Nirogacestat配制生风险，采用血凝抑制试验（HI）和荧光PCR方法，对2021年全市各县区肉鸭规模养殖场采集血清样品、喉头/泄殖腔棉拭子分别进行抗体和病原检测，并对检测结果进行不同血清型、不同县区、不同季度的统计对比分析。结果显示：H5亚型免疫抗体总合格率为76.48%(3 472/4 540)，平均滴度为5.52log2,H7亚型免疫抗体总合格率为68.00%(3 087/4 540)，平均滴度为4.20log2；经卡方检验，H5亚型免疫抗体总合格率显著高于H7此网站亚型（P <0.01）。所有病原样translation-targeting antibiotics品中均未检测到H5和H7亚型高致病性禽流感病毒。禽流感免疫抗体合格率在不同区域间存在一定差异，其中县级地区的免疫抗体总合格率显著高于城区（P <0.01）。不同季度的禽流感抗体总体合格率依次为第四季度>第二季度>第一季度>第三季度。结果表明：柳州市规模肉鸭养殖场的H5、H7亚型禽流感免疫效果整体良好，发生高致病性禽流感的风险较低；但仍需全年持续加强禽流感免疫监测和风险评估，部分城区应着重做好补免和加强免疫工作，从而构筑有效的免疫屏障，防止禽流感疫情发生，保障养禽业健康发展。

番茄匍柄霉菌(Stemphylium lycopersici,S.lycopersici)引起番茄灰叶斑病,是具有重要研究价值的病原真菌。然而,由于缺乏对番茄匍柄霉菌的功能基因组学研究,其致病因子和致病机理尚不清楚。已有研究表明NLP(necrosis-and ethylene-inducing peptide 1-like protein)蛋白是一类病原相关分子模式。在这项研究中,我们首次在番茄匍柄霉菌进行了真菌转化和靶向基因替换,并且在此基础上研究了番茄匍柄霉菌中NLP基因的功能。主要研究结果如下:1.番茄匍柄霉菌在侵染番茄的过程中强烈诱导NLP基因转录表达。我们GSI-IX试剂在番茄匍柄霉菌中鉴定到一个NLP基因,且全基因组范围内只有一个拷贝。RT-qPCR数据显示,番茄匍柄霉菌侵染番茄叶片后病原物中NLP基因的表达受到显著诱导。这表明NLP蛋白参与了番茄匍柄霉菌的致病过程。2.NLP影响番茄匍柄霉菌分生孢子的产生,但不影响其营养生长。我们创制了NLP基因的敲除突变体(?)nlp和基因过表达菌株pACTIN:NLP。结果显示与对照菌株相比,(?)nlp的分生孢子的数目显著减少,而菌丝体生长不受影响。表明NLP影响真菌无性生殖,但是不影响营养生长。3.NLP影响番茄匍柄霉菌的渗透胁迫和氧化胁迫应激反应。真菌对渗透胁迫、氧化胁迫的应激反应可以作为病原体毒力的指标。研究结果显示,与对照菌株相比在渗透胁迫和氧化胁迫条件下,(?)nlp突变体表现出更强的生长抑制,而pACTIN:NLP菌株对胁迫的响应与对照菌株类似。表明NLP调节了番茄匍柄霉菌的渗透胁迫、氧化胁迫的应激反应。4.NLP是番茄匍柄霉菌的一个重要毒力因子。用对照菌株、(?)nlp突变体和pACTIN:NLP菌株接种番茄后,(?)nlp突变体造成的病症减弱,而pACTIN:NLP的致病能力显著高于对In Situ Hybridization照菌株。此外与对照菌株相比,接种部位的(?)nlp突变体菌丝更短。结果表明NLP缺失降低了番茄匍柄霉菌的毒力。5.NLP抑制番茄匍柄霉菌感染番茄叶片所诱导ROS的产生。RT-qPCR结果显示,与野生型菌株侵染相比,番茄受到(?)nlp突变体感染后植株ROS合成基因RbohA和RbohB的转录水平更高,而pACTIN:NLP菌株引起RbohA和RbohB的转录水平降低。同时ROS染色试验结果显示,与野生型菌株相比(?)nlp突变体诱导植物体内积累更多的ROS,而pACTIN:NLP菌株侵染番茄诱导的ROS积累显水平著下降。6.番茄匍柄霉菌NLP触发植物免疫反应和并抑制植物生长。人工合成的nlp20多肽处理番VX-661化学结构茄叶片能够诱导细胞死亡,并导致免疫响应基因表达。同时在番茄中过表达番茄匍柄霉菌NLP基因导致植株组成型表达免疫响应基因。与对照植物相比,过表达材料p35S:NLP-GFP,生长缓慢,株型变矮,并且主根和下胚轴长度显著变短。表明番茄匍柄霉菌NLP是一个毒力因子。综上,我们首次在番茄匍柄霉菌中通过遗传转化方法构建敲除和过表达菌株并对NLP进行了功能研究。NLP可能通过抑制番茄中病原诱导的活性氧积累促进病害发生。通过基因操作,我们展示了NLP在番茄匍柄霉菌致病力、无性生殖、生长发育和环境胁迫响应中的作用。这项工作为非模式真菌病原体的功能基因组学研究提供了一个范例。研究获得的转基因菌株和转基因番茄是研究番茄与匍柄霉属真菌互作的重要遗传材料。

目的 探讨黄芪多糖(Astragaluspolysaccharide，APS)对心肌肥厚小鼠心肌组织中自噬水平及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法8-10周的雄性C57BL/6小鼠36只，体重控制在24-26g，经主动脉缩窄(AB)术构建心肌肥厚模型，随机分为模型组（AB）、黄芪多糖（APS）低剂量（L-APS）和高剂量(H-APS)组Puromycin细胞培养，另设（sham）组，为12只C57BL/6小鼠行假手术。术后1周开始分别予灭菌蒸馏水、APS每天灌胃给药，连用8周。8w后采用此网站经胸超声心动图评估大鼠的心功能，测定各组大鼠心肌重量/体重比（HW/BW）、左室重量/体重比（LVW/BW）及肺/体重比（LW/BW）等心肌指标；苏木精伊红（HE）染色观察心肌组织形态学改变。Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3B、beclin-1、p62及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达量。结果 与sham组相比，AB组心功能显著降低，HW/BW、LVW/BW及LW/BW明显增加(P<0.01)，HE染色显示心肌纤维增粗、结构紊乱，LC3B、beclin-1、p62表达水平明显升高(P<0.01)，而p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR表达明显下降(P<0.01)。与AB组相比，APS组心功能得到一定改善，HW/BW、LVW/Biomaterials based scaffoldsBW及LW/BW显著降低(P<0.01)；HE染色可见心肌细胞肥大程度较AB组减轻，心肌结构损伤减轻；提示APS组心肌损伤得到了改善，APS两组相比，以L-APS组明显。APS组LC3Ⅱ/GAPDH、beclin-1、p62表达水平均有不同程度下降（P<0.01)，而p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR表达增加(P<0.01)。结论黄芪多糖在小鼠压力超负荷心肌肥厚中起保护作用，其作用机制可能与通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制自噬表达有关。

[目的]探讨开放性胫骨缺损富血小板血浆复合游离骨块回植的手术技术和初步临床效果。[方法]对15例开放性胫骨骨缺损患者采用富血小板血浆复合游离骨块回植治疗E-616452。一期急症行清创手术，取出较大的游离骨块，用外固定架固定胫骨骨折，骨缺损处用抗生素骨水泥填充，将取出的游离骨块寄养于同侧大腿中段股直肌与股外侧肌之间，术后抗感染对症治疗。创面愈合且无明显感染迹象后行二期手术，去除外固定架，改用钢MG132抑制剂板固定骨折，将寄养骨块取出后用咬骨钳咬碎成微粒状后与富血小板血浆（platelet-rich plasma, PRP）混合回植于骨缺损处。[Recipient-derived Immune Effector Cells结果] 15例患者均获得随访。随访时间12～24个月，术后无感染病例，骨折均顺利骨性愈合，愈合时间10～15个月。[结论]开放性胫骨缺损富血小板血浆复合游离骨块回植，具有操作简单，疗效可靠等优点，是治疗开放性骨缺损的一种简便有效方法。

目的 分析质子泵抑制剂在心血管住院患者中的应用情况以及应用合理性。方法 通过医院信息系统对2020年云梦县人民医院心血管住院患者的用药情况进行分析，统计应用金额、用药频次、科室分布等信息，并随机抽取院内2020年某1月份心内、外科的应用质子泵抑制剂后出院的100例患者病历资料，评价患者的适应证、药物选择、给药时机、应用疗程等合理性。结果 住院患者质子泵抑制剂的使用金额为1 248.65万元，住院药房中共5种质子泵抑制剂，共10个品规，包括4种注射剂，6种口服制剂，其中雷贝拉唑钠肠溶胶囊的应用金额占首位，注射剂中注射用泮托拉唑的金额占首位;住院患者中应用质子泵抑制剂金额selleck Mirdametinib的前五位科室分别为:心内科、心外科、重症监护室、普外科以及消化内科;心内科属于住院患者中质子泵抑制剂金额构成比最大的科室，雷贝拉唑钠肠溶胶囊属于心内科中使用次数最多且金额构成比最高的质子泵抑制剂;心外科质子泵抑制剂的销售金额位列第二，其中注射用拉索拉唑属于心外科销售金额构成比最高的质子泵抑制剂; 100例患者中，8例患者无应激性溃疡(SU)危险因素，表示无指征用药，92例患者存在1～4个危险因素; 38例患者应用一种质子泵抑制剂，50例患者使用两种Captisol小鼠质子泵抑制剂，12例患者使用三种质子泵抑制剂; 92例患者存在用药指证，其中3例患者在手术前使用质子泵抑制剂，87例患者在术后使用质子泵抑制剂，预防SU疗程为1～18(4.03±1.16) d,47例患者在危险因素消除以后仍然使用质子泵抑制剂，7例患者从术后到出院期间持续应用质子泵抑制剂。结论 院Laboratory medicine内心内科质子泵抑制剂的应用合理性较高，心外科应用质子泵抑制剂的不合理性较高，临床中应该规范应用质子泵抑制剂，同时做好用药干预，避免过度应用质子泵抑制剂。