DuDu365生物天地

目的：探讨经皮电刺激(transcutaneous electrical stimulation，TES)对帕金森病(Parkinson disease，PD)患者功能性便秘的治疗作用。方法：选取2021年7-12月镇江市第四人民医院神经内科的PD患者76例，采用随机数字表法将患者分为对照组和试验组，每组38例。对照组给予常规治疗，试验组在对照组的基础上给予TES治疗，治疗时间为2周。比较两组每周完全自主排便(complete spontaneous bowel movements，CSBMs)次数；比较两组胃动素和胃泌素水平、胃窦运动指数及患者便秘状况评估问卷(patient assessment of constipation quality of life questionn购买CB-839aire，PAC-QOL)评分。结果：治疗后第2rehabilitation medicine周，试验组CSBMs次数多于对照组；治疗2周后，试验组胃动素水平高于对照组(P<0.05)，两组胃泌素水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗2周后，试验组胃窦运动指数高于对照组(P<0.05)；治疗2周后，试验组PAC-QOL评分低于对照组(P<0.0selleck AZD1152-HQPA5)。结论：TES治疗显著促进PD患者的胃肠动力，对PD患者功能性便秘的治疗有显著的效果。

目的 筛选影响纳武单抗和派姆单抗治疗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)疗效的差异基因，为免疫治疗药物的选择及获悉更多治疗预后提供参考。方法 通过GEO数据库搜索“Nivolumab”、“Pembrolizumab”找到目的芯片，下载免疫治疗相关表达芯片“GSE93157”,筛选NSCLC相关样本共35个，利用R语言数据包对样本进行表达差异基因进行聚类分析。对差异基因进行基因功能注释GO分析和KEGG通路分析，构建蛋白相互作用网络，筛选枢纽基因进行生存分析，确定影响不同抗程序性细胞死亡蛋白1药物治疗的Public Medical School Hospital关键基因。结果 筛选出影响纳武单抗治疗疗效差异基因共58个，其中免疫相关基因25个；影响派姆单抗治疗疗效差异基因231个，免疫相关基因82个。基于两种药物免疫相关差异基因的蛋白互作网络提示纳武单抗共得到2个子网络，主要模块共11个节点，51个边；派姆单抗共得到4个子网络，主要模块共24个节点，231个边。影响两种药物治疗疗效的前10位主要免疫相关基因生存分析，显示生存差异具有MK-1775作用统计学意义(P<0.05)的基因，与纳武单抗相关的免疫差异基因为CD5、CD22、CR2、CD40LG。与派姆单抗相关的免疫差异基因为CTLA4、SELL、IL7、CD40LG、CD2、IL7R。结论 纳武单抗治疗NSCLC患者的关键免疫相关差异基因CD5、CD22、CR2;派姆单抗治疗NSCLC的关键免疫相关差异基因为CTLA4、SELL、IL7、CD2、IL7R。两种药物共同免疫相关差异基因为CD40LG,有望成为抗PD-1抑制剂治疗NSCLC预后预测的潜在生物标志物及靶点。

目的 经微格教学后，将三明治教学法与案例教学法(case-based learning, CBL)相组合序贯用于临床医学八年制见习生，评估其在学生交流自信心提升中的作用。方法 以2013年就读于北京协和医学院临床医学八年制且进入外科见习的全部医学生为研究对象。分别在微格教学前、微格教学后、三明治+CBL教学后进行寻找更多匿名书面问卷调查，评估www.selleck.cn/products/LY294002见习生在4种预设场景中的交流自信心，并收集其对该教学模式的反馈。结果 共纳入28名临床医学八年制见习biosocial role theory生。与微格教学前比较，见习生经微格教学、三明治+CBL教学后在4种预设场景中的交流自信心评分均升高，其中以国际会议场景下交流自信心评分增加较为显著(P=0.009)。三明治+CBL教学后，92.9%(26/28)的见习生认为该教学法对提高自信心有帮助；认为多元化教学方式占教学总学时的最优比应为20%(14人选择),其次为10%(7人选择)、40%(7人选择)。结论 经微格教学后，序贯式三明治+CBL教学法可提高临床医学八年制见习生的沟通交流自信心。

目的：探讨两种不同的化疗方案对蒽环和紫杉类药物治疗后复发的三阴性乳腺癌（TNBC）患者的效果。方法：选取河北中石油中心医院收治的60例蒽环和紫杉类药物治疗后复发的TNBC患者，采用前瞻性研究方式，应用随机数字表将其分为GP组（吉西他滨联合顺铂）Paramedian approach和NP组（长春瑞滨联合顺SAG体内铂）各30例。比较两组的疗效、预后及血清miR-21、miR-200a、miR-200b水平。结果：治疗后，两组患者的血清miR-21、miR-200a水平较本组治疗前均显著降低（P<0.05），两组患者的血清miR-200b水平较本组治疗前均显著升高（P<0.05）;NP组患者在化疗过程中的白细胞降低、血红蛋白降低程度较Gselleck HPLCP组更严重，差异有统计学意义（P<0.05）;GP组患者的肿瘤无进展生存中位时间为34.0个月，长于NP组的28.0个月（P<0.05）。结论：吉西他滨联合顺铂与长春瑞滨联合顺铂方案治疗对蒽环和紫杉类药物耐药复发的TNBC患者效果差异不大，但吉西他滨联合顺铂方案的毒副反应较少，可有效延长患者的肿瘤无进展生存时间。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)具有快速灵敏、分辨率高和通量高等LY2835219分子量优点,被广泛用于生物安全领域细菌、病毒及生物毒素的检测与鉴定。本研究以MALDIMS-275核磁-TOF MS为核心,建立了高灵敏检测人类冠状病毒(Human Coronavirus,HCoV)与肉毒神经毒素(Botulinum neurotoxin,BoNT)的方法,实现了质谱技术在生物安全领域的集成应用。目前感染人的CoV共7种,其中HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63和HCoV-HKU1只会引起普通的感冒,症状轻可自愈,不会对公众造成巨大威胁,而严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征病毒(MERS-CoV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)会导致人传人的急性呼吸道传染病,传染性、致死性及死亡率较高。HCoV感染初期症状相似,但治疗方法具有很大差异。快速准确地检测HCoVs不仅有利于在感染初期及时诊断、对症下药,对于防控急性呼吸道传染病大规模流行也具有重要意义。本研究将多重PCR(Multiplex PCR,m PCR)与MALDI-TOF MS相结合,基于单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计引物和探针,构建了一种能够同时检测7种HCoVs的方法,命名为HCoV-MS。选择N和Rd Rp作为HCoV-229E、HCoV-NL63、HCoV-OC43和HCoV-HKU1的检测靶标,N、E和ORF1b作为SARS-CoV的检测靶标,N、Rd Rp、E和ORF1b作为MERS-CoV的检测靶标,N1、N2、ORF1b、S和S(D614G)作为SARS-CoV-2的检测靶标设计引物与探针,完成体系的构建。通过质粒及m PCR循环数与其他常见呼吸道病毒验证HCoV-MS的特异性,利用梯度浓度的质粒验证HCoV-MS的灵敏度,检出限为1～5拷贝/反应。将HCoV-MS应用于2020年德国罗伯?特科赫研究所组织的联合国秘书长调查机制(United Nations secretary-general’s investigative mechanism,UNSGM)实验室外部质量评估活动(External quality assurance exercises,EQAE)(EQAE-CoV-2020),实现了考核样本中(包括高难度样本)所有HCoVs的准确鉴定。此外,对151份临床样本进行检测,检测结果与实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q PCR)全部一致,共检出42个D614G突变株。通过对26份梯度稀释的阳性样本检测对比了HCoV-MS与q PCR的灵敏度和特异性,发现HCoV-MS方法的特异性和灵敏度与q PCR基本一致。另外,HCoV-MS检测体系小,所需样本量很少,只需1μL样品即可进行反应,并且其通量高,30min内可完成384个样品的检测,在微量样本及大规模检测中具有优势,有望成为q PCR技术的补充,也可能为其他病毒的鉴定与突变株的进一步分型提供思路。BoNT是目前已知毒性最强的生物毒素,主要由肉毒梭菌(Clostridium botulinum)产生,目前有A～H和X共9个血清型。与人类中毒相关的血清型有A、B、E和F,其中以A型和B型为主。常见的中毒类型有食源性、医源性、创伤性及婴儿肉毒中毒。近年来,各类加工食品相继开发,食品质量良莠不齐,外食人口剧增使肉毒梭菌食物中毒事件频发。此外,由于BoNT致死量极低且相对容易制备,被一些国际恐怖势力和极端组织用来制造恐慌,对人类和平与安全构成巨大威胁。因此,针对BoNT建立快速准确的鉴定与分型方法是优化治疗、降低死亡率的必要条件,同时对维护国家生物安全也具有重要意义。BoNT的轻链是Zn~(2+)依赖的蛋白酶,能够特异性切割神经信号传递所需的特定蛋白质。我们利用BoNT的酶活性,采用MALDI-NLRP3-mediated pyroptosisTOF MS构建了一种对BoNT/A和BoNT/B鉴定与分型的方法,命名为BoNT-MS。通过磁珠偶联抗体富集毒素酶切底物肽段并采用同位素标记内标法实现鉴定与分型。通过优化BoNT-MS各反应成分,最终确定最佳的反应体系为p H7.2的Hepes缓冲液含有50μM Zn Cl_2,10m M DTT,1mg/m L HSA,100μM底物肽段。同时还探索了不同复杂基质样本的检测,最终得到PBS基质样本中BoNT/A-MS与BoNT/B-MS的最低检出量分别为2×LD_(50)与40×LD_(50),血浆基质样本中BoNT/A-MS与BoNT/B-MS的最低检出量分别为2×LD_(50)与4×LD_(50),牛奶基质样本中BoNT/A-MS与BoNT/B-MS的最低检出量分别为2×LD_(50)与4×LD_(50),沙土基质样本中BoNT/A-MS与BoNT/B-MS的最低检出量分别为2×LD_(50)与80×LD_(50)。利用BoNT-MS参加2021年德国罗伯特科赫研究所组织的UNSGM实验室外部质量评估活动(EQAE-Biotoxins-2021),实现了对考核中多个复杂基质样本(血清、牛奶、沙土)中BoNT的鉴定。综上,本研究所建立的BoNT-MS方法可以对BoNT/A和BoNT/B进行快速鉴定与分型,该方法有望成为小鼠生物学试验的补充。综上所述,MALDI-TOF MS已日益成为一种不可或缺的检测鉴定手段,在HCoVs与BoNT/A和BoNT/B的检测与鉴定中发挥着重要的作用,适用于样本的大规模筛查检测,对国家和军队生物安全建设具有重要意义。

目的 探讨凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)对酒精性心肌病（ACM）大鼠心功能的影响及其机制。方法将25只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（5只）、ACM组（10只）和ACM+sh-LOX-1组（10只）。正常对照组大鼠正常喂养16周；ACM组大鼠用乙醇处理建立ACM此网站模型；ACM+sh-LOX-1组大鼠在乙醇处理的基础上静脉注射腺相关病毒下调LOX-1的表达。对大鼠进行超声心动图检查以评价心功能。光镜和透视电intima media thickness镜下观察大鼠心肌组织。采用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测LOX-1、Beclin-1、自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ（LC3-Ⅱ）在3组大鼠心肌组织中的表达水平，并进行比较，同时进行相关分析。结果 乙醇摄入可显著增加大鼠心肌组织中LOX-1和LC3-Ⅱ的表达水平，并降低Beclin-1的表达水平，而对LOX-1进行抑表达处理后，能显著降低LC3-Ⅱ的表达水平，并上调Beclin-1的表达。Pearson相关分析结果显示，大鼠心肌组织LOX-1与LC3-Ⅱ的表达呈正相关（r=0.895,P <0.01），与Beclin-1的表达则呈负相关（r=-0.817,P <0.01）。乙醇摄入可引起大鼠心肌细胞肥大、纤维化和自噬小体增多改变，并且心功Baf-A1研究购买能下降；下调LOX-1后能减弱乙醇对心脏结构和功能的损害。结论 抑制LOX-1能通过降低LC3-Ⅱ和增加Beclin-1的表达，从而减少细胞自噬，并改善ACM心功能。

目的 分析奥美拉唑联合阿托品治疗急性胃炎，对患者胃泌素（GAS）、胃GW4869细胞培养动素（MTL）及炎症因子水平的影响。方法 以随机数字表法将湖北经济学院医院2020年7月至2022年7月收治的88例急性胃炎患者分为对照组（采用奥美拉唑red cell allo-immunization+山莨菪碱治疗）与研究组（采用奥美拉唑+阿托品治疗），各44例，均治疗7 d。对比两组患者临床症状（恶心、呕吐、腹痛及腹泻）消失时间，治疗后胃肠激素（GAS、MTL）与炎症因子水平，以及治疗期间不良反应发生情况MS-275体外。结果 研究组患者恶心、呕吐、腹痛及腹泻消失时间均显著短于对照组；治疗后两组患者各项胃肠激素（GAS、MTL）与炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平显著低于治疗前，与对照组比，研究组显著降低（均P<0.05）；两组患者口干、头痛、心悸总发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 急性胃炎患者在服用奥美拉唑治疗的同时，加用阿托品可有效缩短患者恶心、呕吐、腹痛及腹泻症状消失时间，抑制患者体内促炎因子的释放，调节胃肠道激素水平，安全性良好。

【目的】制备出广谱型购买GNE-140鸡传染性支气管炎病毒（IBV）N蛋白单克隆抗体，为后续N蛋白保守区域表位鉴定及IBV通用型快速检测方法的建立打下基础。【方法寻找更多】通过原核表达IBV广西优势血清型代表株GX-YL5的N蛋白，纯化后免疫BALB/c小鼠，选取血清效价在104以上的免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，经间接ELISA筛选后通过小鼠腹水诱生法制备单克隆抗体，采用Western blotting、IFA及间接ELISA等进行效价、亚型、反应特异性、交叉反应谱鉴定，并将制备获得的单克隆抗体应用于免疫组化检测，检测SPF鸡人工感染4株IBV代表变异株（GX-NN130048、GX-NN160421、GX-QZ171023和GX-QZ170728）后不同时段内气管和肾脏中的带毒情况。【结果】制备获得的单克隆抗体N2D5效价大于217，其亚型为IgG2b;Western blotting和IFA鉴定结果表明单克隆抗体N2D5只与IBV发生阳性反应，与新城疫病毒（NDV）、传染性喉气管炎（ILTV）、禽偏肺病毒（a MPV）、传染性法氏囊病（IBDV）、禽白血病病毒（ALV）及马立克氏病毒（MDV）的反应结果均呈阴性；单克隆抗体N2D5能与国内流行的多种基因型及广西目前流行的7种血清型IBV发生交叉mouse bioassay反应，包括常用标准株、疫苗株和野毒株。将制备获得的单克隆抗体N2D5应用于免疫组化检测，结果发现在3株鸡源IBV代表性变异株及1株鸭源分离株人工感染SPF鸡后不同时段内的气管和肾脏中均能检测到病毒信号，进一步证明其广谱性。【结论】基于杂交瘤技术制备获得的IBV单克隆抗体N2D5属于IgG2b亚型，具有特异性高、反应谱广的特点，且与IBV的结合能力强，可作为特异性诊断抗体应用于IBV临床诊断及病毒分布规律研究。

目的 探讨苦参碱对缺氧/复氧(H/R)小鼠海马神经元HT22细胞活力、凋亡及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)信号通路的影响。方法 将处于对数生长期的HT22细胞分为对照组、H/R组及苦参碱低、中、高浓度组。对照组HT22细胞用无血清DMEM培养基在正常环境下培养28 h; H/R组HT22细胞在缺氧培养箱中维持4 h后在常氧条件下培养24 h;苦参碱低、中、高浓度组的H/R处理同H/R组，同时给予浓度分别为10、20、30μmol/L的苦参碱进行干预，培养LY2835219抑制剂24 h。检测HT22细胞活力、凋亡情况及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)]和BDNF/TrkB信号通路蛋白水平。结果 与对照组比较，H/R组HT22细胞吸光度值、存活率、Bcl-2、BDNF、TrkB蛋白水平降低，细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白水平升高，差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较，苦参碱低、中、高浓度组HT22细胞吸光度值、存活率、Bhttps://www.selleck.cn/products/MDV3100.htmlcl-2、BDNF、TrkB蛋白水平依次升高，细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白水平依次降低，差异有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖性。medial elbow结论 苦参碱能减轻H/R导致的神经元HT22细胞活力的降低，抑制HT22细胞凋亡，其机制可能与激活BDNF/TrkB信号通路有关。

细胞自噬是一种重要且保守的细胞内降解过程，通过形成双层膜的自噬体包裹细胞内容物进行降解。内质网来源的COPⅡ囊泡被认为是饥IACS-10759溶解度饿诱导的应激过程中自噬体的膜源。探究了COPⅡ囊泡衣被蛋白SEC24A在巨自噬通路中的作用。利用siRNA干扰技术敲低SEC24A的表达，EBSS饥饿处理对照组和SEC24A敲低组HeLa细胞2 h诱导自噬发生，经Western blot和免疫荧光实验检测自噬底物蛋白p62和自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的蛋白水平变化，以确定SEC24A是否参与自噬。通过RFP-GFP-LC3串联荧光检测自噬体和自噬溶酶体的数目，利用蛋白酶K保护实验验证自噬缺陷发生在自噬体闭合之前或者之后，利用免疫荧光实验检测敲低SEC24A对自噬通路上ATG复合物的影响，以确定SEC24A调控自噬通路的位点。通过免疫共沉淀实验验证SEC24A与自噬相关蛋白ATG9A是否存在相互作用。蛋白检测实验发现，饥饿条件下与对照细胞相比，敲低SEC24A细胞内自噬底物蛋白p62积累，而标志蛋白LC3-Ⅱ减少。RFP-GFP-LC3串联荧光实验显示，敲低SEC24A后自噬体及自噬溶酶体的数目均减少。蛋白酶K保护实验显示，SEC24A敲低细胞中受膜结构保护的p62和GFP-LC3均减少,提示SEC24A作用位点在自噬体闭合之Navitoclax分子量前。免疫荧光实验显示，敲低SEC24A的表达后ATG14L、ATG16L1点状结构减少，而ATG9A点状结构的数量没有明显变化，提示SEC24A作用于ATG14L、ATG16L1上游。免疫共沉淀实验显示SEC24A与ATG9A存在相互作用。研究结果preimplnatation genetic screening不仅有助于深化对自噬体形成过程和分子机制的了解，也为全面解读COPⅡ囊泡及其衣被蛋白在自噬中的重要作用提供了信息。