DuDu365生物天地

背景:胃癌是世界上最常见、最具破坏性的恶性肿瘤之一,其发病率占全球癌症发病率的第5位,死亡率却高达第3位。胃癌是一组在生物学和遗传学上具有多样性的肿瘤类型,而且在其病因中有多种因素在起作用,包括环境因素和遗传因素。虽然内镜和影像技术提高了早期胃癌相关病变的检出率,但胃癌具有广泛的形态学异质性。单纯依靠形态学很容易忽视某些病例,大多数胃癌患者初诊时已处于中度或重度进展期;而生物标志物的应用可能会提高胃癌筛查的早期发现和诊断的准确性,以及包括癌症在内的各种疾病的预后和治疗。随着对胃癌发生发展的分子机制不断深入研究,到目前为止,针对少数胃癌患者的靶向治疗已经取代或补充了曲妥珠单抗和雷莫芦单抗,这两种单抗分别是HER-2或VEGFR2表达上调时治疗进展期胃癌的二线药物。PD-1抑制剂派姆单抗已被FDA批准为三线(或更高)治疗复发、局部进展期或转移性胃腺癌的药物。靶向治疗和免疫治疗为临床医生提供了一种治疗进展期胃癌患者的新方法,但多数靶向药物的临床效果仍不尽人意。因此,针对胃癌的个体化治疗迫切需要寻找在胃癌发生发展中敏感性和特异性较强的基因,并深入探索其发挥作用的分子机制,对胃癌的临床诊治及提供抗癌药物的研究靶点都具有重要的理论和实际意义。下一代测序(NeMC3临床试验xt Generation Sequencing,NGS)是阐明人类癌症发病机制和确定潜在治疗靶点的一项强大技术。根据输入材料的不同,NGS的主要应用包括DNA测序、RNA测序和染色质免疫沉淀测序。NGS最初的应用集中在对个体基因组或各种组织的转录本进行测序,最近NGS在癌症生物学研究中的应用在几个方面给癌症研究带来了革命性的变化。近年来,随着高通量核酸合成方法和下一代测序(NGS)平台的发展,利用大型慢病毒库进行功能基因组学筛选成为可能,旨在发现新的癌症治疗靶点。目的:本研究我们将利用一个最初构建的针对所有人类代谢基因组的shRNA慢病毒文库,对人类胃癌细胞系进行了基于NGS的功能基因组学筛选,旨在筛选出靶向胃癌细胞的关键基因。同时利用人胃癌细胞株实验探讨靶基因在胃癌细胞中的生物学功能及其分子机制。研究方法:1)利用一个针对所有2,096个人类代谢基因的6,399个shRNA文库,对人类胃癌细胞株MKN1和HGC-27进行了基于NGS的功能基因组学筛选,筛选出分别具有生长抑制和生长促进的shRNA表型及胃癌相关差异表达基因。通过Enriched Pathway进行功能富集分析,得到生长表型功能相同的候选基因。2)利用GEPIA和Kaplan-Meier plotter公共数据库,分析氨酰-t RNA合成酶(Aminoacyl-t RNA synthases,ARSs)家族中不同候选基因在胃癌组织样本与正常胃粘膜组织样本的表达差异,并分析不同胃癌组织分型中DARS基因表达与预后的关系。通过346例胃癌患者的内部组织微阵列分析DARS基因的组织蛋白表达水平与患者临床病理特征的相关性。并利用弥漫型胃癌的基因工程小鼠模型进行DARS蛋白表达水平的验证。3)选取人胃癌细胞株MKN1和HGC-27,利用shRNA转染技术构建敲低DARS细胞模型,通过RT-q PCR及Immunoblot对敲低后的DARS表达量进行验证分析;并通过CCK-8细胞增殖实验、克隆形成实验、Edu实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验及细胞迁移实验,验证敲低后的DARS对胃癌细胞的影响。4)我们建立了小鼠皮下荷瘤模型,进一步检测两种DARS基因敲低的胃癌细胞株在小鼠体内成瘤情况;并利用小鼠肿瘤进行HE染色及免疫组化分析。5)利用shRNA介导的DARS敲低后的胃癌细胞进行RNA高通量测序,分析DARS敲低后发挥抑制作用的分子通路机制。并利用Immunoblot的方法验证参与信号通路的下游关键转录因子的表达,以及DARS与Ca~(2+)/MAPK/CREB/ELK-1信号转导通路的调控关系。结果:1)通过对MKN1和HGC-27细胞株进行功能基因组筛选www.selleck.cn/products/LBH-589,共分别得到137个和204个shRNA表达可重复表型的生长抑制基因,以及38个和156个shRNA表达可重复表型的生长促进基因。两个细胞株中有38个共同的生长抑制表型基因,其中包含ARSs家Wang’s internal medicine族中的DARS、KARS、VARS三个基因。2)通过GEPIA和Kaplan-Meier plotter数据库对ARSs家族的三个基因进行验证,可见DARS和VARS基因在胃癌中的表达水平均明显高于正常胃组织,而KARS的表达水平无显著差异。高表达的DARS和KARS基因表现出较差的总体生存期,而VARS的表达量高低与胃癌患者总体生存期无关。346例胃癌患者的内部组织微阵列分析DARS基因的组织蛋白表达水平,蛋白表达水平较强的有243例,表达相对较弱的有103例。临床病理特征分析得出DARS的蛋白高表达与T分期和淋巴结转移有关,且这种差异性体现在胃癌组织病理分型的肠型和弥漫型中。在基因工程小鼠的免疫组化分析中,相对于早期黏膜内癌,DARS在弥漫型的浸润癌中蛋白表达水平更强。3)通过RT-q PCR及Immunoblot实验发现DARS敲低后的mRNA水平及蛋白质表达水平均明显降低。两个胃癌细胞株中敲低的DARS基因抑制胃癌细胞的增殖能力、抑制胃癌细胞的克隆形成能力和迁移能力,导致胃癌细胞的G0/G1期阻滞,促进胃癌细胞的凋亡。4)小鼠异种移植模型中,DARS敲低的胃癌细胞在小鼠体内的生长能力受到抑制,相较于对照组,敲低组的小鼠肿瘤体积和重量均明显下降。小鼠肿瘤切片的HE染色提示DARS敲低后,胃癌细胞的有丝分裂能力明显降低。5)根据RNA高通量测序结果得出在MKN1细胞株中下调基因有340个,HGC-27细胞株中下调基因有277个,两者共有的下调基因有90个,两者共有的上调基因有38个。通过Immunoblot实验结果提示敲低DARS基因可抑制p-ERK1/2、p-CREB及p-ELK-1的表达,提示DARS基因可能通过调控Ca~(2+)/MAPK/CREB/ELK-1信号通路影响胃癌的发生发展。小鼠肿瘤切片的免疫组化结果提示DARS和p-ERK1/2蛋白阳性表达水平在DARS基因敲低组细胞中明显降低。结论:1)DARS、KARS、VARS是本研究筛选出的治疗胃癌的候选靶基因。2)DARS在临床胃癌组织样本中的蛋白高表达水平与胃癌的T分期和淋巴结转移显著相关,且预后更差,尤其在弥漫型胃癌中。3)DARS基因敲低可抑制胃癌细胞的增殖、抑制胃癌细胞的克隆形成能力和迁移能力、阻滞胃癌细胞周期的G0/G1期、促进胃癌细胞的凋亡,并在异种移植肿瘤中抑制胃癌的生长和胃癌细胞的有丝分裂过程。4)DARS基因可能通过调控Ca~(2+)/MAPK/CREB/ELK-1信号通路影响胃癌的发生发展。

目的 探讨吡咯替尼联合维生素B_6对HER-2阳性乳腺癌患者疗效及手足综合征的影响。方法 选取2018年5月～2021年4月收治的HE购买LGK-974R-2阳性乳腺癌患者，随机将其分为观察组（n=35）和对照组（n=35）。对照组采用常规化疗，观察组采用吡咯替尼联合维生素B_6进行治疗，观察两组患者3个月后的治疗效果和血清肿瘤标志物[血清癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA153）、组织多肽特异抗原（TPS）]指标以及手足综合征发生率。结果 观察组的客观缓解率和疾病控制率明显高于对照组（P <health resort medical rehabilitation0.05）。治疗前两组患者血清癌胚抗原、糖类抗原以及组织多肽特异抗原水平对比无明显差异（P> 0.05），治疗后观察组患者的血清癌胚抗原、糖类抗原以及组织多肽特异抗原水平明显低于对照组（P <0.05）。治疗后观察组的手足综合征发生率明显低于对照组（P <0.05）。结论 吡咯替尼联合维生素B_6能够提高对HER-2阳性乳腺癌患者的治疗效果，降低HER-2阳性乳腺癌患者的血清癌胚抗原、糖类抗原以及组织多肽特异抗原水平，还MG132临床试验可以减少HER-2阳性乳腺癌患者手足综合征的发病率。

目的：探讨分析温阳益气活血汤联合西药治疗culture media对冠心病心绞痛患者的治疗效果，及对血流动力学及心功能的影响。方法：选择2018年4月—2019年7月我院收治的86例冠心病心绞痛患者，随机分为观察组和对照组，各43例。对照组给予常规西药治疗，观察组在对照组基础上给予温阳益气活血汤，比较两组临床治疗疗效，CB-839供应商血流动力学变化及心功能变化情况。结果：观察组临床治疗总有效率高于对照组（P<0.05）。治疗后两组全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度以及红细胞压积指数均较治疗前明显降低（P<0.05），同时治疗后观察组血流动力学各指标均显著低于对照组（P<0.05）。治疗后观察组心绞痛发作次数以及www.selleck.cn/products/Y-27632心绞痛持续时间显著低于对照组（P<0.05）。结论：温阳益气活血汤联合西药治疗冠心病心绞痛临床疗效显著，可有效改善患者心功能、血流动力学指标，改善心绞痛发作症状，值得推广。

目的 观察对比射干生品及米泔水炮制品对正常大鼠一般状态、淀粉酶及胃泌素的影响，以进一步探讨经米泔水炮制后的射干是否具有健脾降燥作用。方法 选取SPF级SD大鼠39只，随机分为3组(空白组及2个提取物组),药1为生品提取物，药2为米泔水制品提取物。药1和药2组分别给予各自提取物，折合成射干生Tofacitinib molecular weight药量为20g/kg, 1次/d,共21d;空白组则给予等量生理盐水。每日称重、观察进食量及大鼠一般状态。计算脾指数，用ELISA法分别测定各组SD大鼠血清中淀粉酶及胃泌素的含量，并进行比较。结果 药1组大鼠14d开始出现如萎靡倦怠、摄食量减少、体重降低、便软不成形等表现，药2组变化不明显；体重方面与空白组比较药1组selleck产品有下降趋势，药2组则明显上升。此外，药1组脾脏指数低于空白组而药secondary endodontic infection2组高于空白组。药2组血清淀粉酶含量高于空白组和药1组，与药1组比较差异有统计学意义；药1组与药2组胃泌素含量差异有统计学意义。结论 射干经米泔水炮制后可能通过增加健脾降燥作用缓解了药物毒性。

目的 探讨并分析孕晚期无乳链球菌(GBS)感染的血清型耐药性及分子遗传背景特征。方法 前瞻性选取收治的孕晚期(35～37周)孕妇为研究对象，采集阴道分泌物，采用荧光定量PCR法和显色培养加鉴定法筛查GBS,GBS阳性患者设为观察组(n=50),GBS阴性患者设为对照组(n=50)。分析荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)法和显色培养加鉴定法阳性检出率，同时对观察组患者的GBS定植菌株进行血清型耐药性及分子遗传背景特征分析，分析GBS定植菌株的流行病学特点，分析血清型与抗菌药物耐药、血清型与Bafilomycin A1体内实验剂量毒力基因、血清型与耐药基因的相关性。结果 观察组阴道分娩人数低于对照组，剖宫产人数、胎儿窘迫、胎膜早破、羊水污染发生率高于对照组(P>0.05)。观察组早产人数以及Apgar评分均明显高于对照组(P<0.05)。GBS阳性患者的耐药情况：GBS对青霉素、万古霉素、氨苄西林、头孢曲松敏感，对左氧氟沙星(48.00%)、克林霉素(38.00%)、红霉素(72.00%)、四环素(86.00%)均表现出不同程度的耐药性。50例GBS阳性孕妇阴道定植的GBS共发现5个血清型，其中Ⅲ型有27株，占比54.00%、Ⅰb型有9株，占比18.00%、Ⅰa有5株，占比10.00%、Ⅴ型有5株，占比10.00%、Ⅱ型有4株，占比8.00%。50株GBS抗生素敏感性检测结果显示，不同血清型菌株对青霉素、万古霉素、氨苄西林、头孢曲松敏感。比较不同血清型对抗生素的敏感性发现：血清Ⅲ型菌株对左氧氟沙星的耐药率明显高于其他菌株。血清Ⅲ、Ⅰa型菌株对克林霉素的耐药率明显高于其他菌株。血清Ⅰb、Ⅰa型菌株对红霉素的耐药率明显高于其他菌株。血清Ⅰb、Ⅰa型菌株对四环素的耐药率明显高于其他菌株。GBS阳性孕产妇主要的耐药模式为：红霉素-克林霉素-四环素、红霉素-克林霉素-氯霉素、红霉素-克林霉素-四环素-氯霉素、红霉素-克林霉素-四环素-左氧氟沙星4种。其中Ⅲ型血清对抗生素耐药性阳性率最高，耐药阳性对比红霉素>四环素>左氧氟沙星>克林霉素。耐药基因中，tetM、mefA/E、tetO/ermB基因阳性率排名前三，tetM基因在血清Ⅰb型菌株的阳性率最高，mefA/E基因在血清Ⅲ型菌株的阳性率最高，tetO基因在血清Ⅰa型菌株的阳性率最高，ermB基因在血清Ⅱ型菌株的阳性率最高。毒力基因中，epsilon基因阳性率最高，epsilon基因在血清型Ⅰb的菌株阳性率最高。结论 孕晚期GBS感染的血清分型以Ⅲ型、Ⅰb型、Ⅰa型、Ⅴ型、Ⅱ型常见，GBS对青霉素、万古霉素、氨苄HbeAg-positive chronic infection西林、头孢曲松敏感，对红霉素、四环素耐药程度高。其中Ⅲ型血selleckchem清对抗生素耐药性阳性率最高，tetM、mefA/E、tetO/ermB基因阳性率排名前三，毒力基因中，epsilon基因阳性率最高。

目的 探讨心电图ST-T段改变及颈动脉斑Ferrostatin-1细胞培养块发生在外科患者冠心病中的诊断价值。方法 选取自2017年12月至2020年12月于武汉大学中南医院住院的疑似冠心病且在住院期间均接受了静息心电图、颈动脉超声和冠状动脉造影检查等相关检查的111例疑似冠心病外科患者为研究对象。根据冠状动脉造影结果，将疑似冠心病的外科患者分为冠心病组(n=28)与非冠心病组83例(n=83)。回顾性分析患者的冠状动脉造影、心电图、颈动脉超声和基本临床资料，并利用灵敏度、特异度、阳性似然比和阴性似然比评估危险因素对冠心病的诊断价值。结果 冠心病组患者的年龄、血清肌钙蛋白I、血清氨基末端脑钠肽前体水平，以及ST-T改变和颈动脉斑块发生率均高于非冠心病组，差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示，男性、ST-T改变及颈动脉斑块是外科患者冠心病的独立危险因素(P<0.05)。以冠状动脉造影结果为诊断冠心病的“金标准”Alpelisib分子量,ST-T改变诊断外科患者冠心病的灵敏度为67.9%,特rishirilide biosynthesis异度为56.6%,阳性似然比为1.56,阴性似然比为0.57;颈动脉斑块诊断外科患者冠心病的灵敏度为89.3%,特异度为65.1%,阳性似然比为2.56,阴性似然比为0.16;联合ST-T改变及颈动脉斑块结果诊断外科患者冠心病的灵敏度为96.4%,特异度为35.0%,阳性似然比为1.48,阴性似然比为0.10。结论 ST-T改变和颈动脉斑块可作为外科患者冠心病的诊断指标，并且二者结合能更有效地预测冠心病。

目的 探讨WWP的selleck GDC-0973E3泛素连接酶2(ww domain-containing protein 2,WWP2)沉默对肝癌细胞系黏附、侵袭和迁移的影响作用。方法 通过RNA沉默技术降低肝癌细胞系的WWP2水平，用Transwell法检测细胞迁移和侵袭，CCK-Y-276328法检测细胞的增殖情况，Western blot法检测caspase7、caspase8、Bcl-2、Bax、PTEN、p-Akt及Akt的蛋白水平。结果 沉默WWP2后，肝癌细胞BEL-7404和Huh7的WWP2mRNA和蛋白的表达水平Hepatocelluar carcinoma明显下降(P<0.001),BEL-7404细胞和Huh7细胞的凋亡相关标志物caspase7、caspase8及Bax的蛋白水平表达都显著升高(P<0.01)、PTEN的蛋白水平升高(P<0.01),Bcl-2、p-Akt的蛋白水平显著下降(P<0.01),肝癌细胞BEL-7404和Huh7的细胞活力、黏附能力、侵袭能力和迁移能力都明显减弱(P<0.001)。结论 沉默WWP2可抑制肝癌BEL-7404细胞和Huh7细胞增殖、黏附、侵袭和迁移，并促进细胞凋亡，其作用机制可能与PTEN/Akt信号通路相关。

[目的]探讨miR-149-5p靶向双皮质素样激酶1(DCLK1)基因对乳腺癌细胞MCF-7/DDP顺铂耐药的影响。[方法]构建DDP耐药乳腺癌MCF-7细胞，然后按细胞转染质粒的不同分入对照组(不转染质粒)、空载组(转染空载质粒3.1)Fer-1试剂、miRNA-149-5p组Impoverishment by medical expenses(转染miRNA-149-5p-AH质粒)。采用CCK-8法检测细胞存活率，划痕实验检测细胞迁移力，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR检测细胞miRNA-149-5p和DCLK1 mRNA水平，Western Bloting检测细胞DCLK1蛋白表达水平。[结果] miRNA-149-5p组乳腺癌MCF-7/DDP细胞miRNA-149-5p水平、细胞凋亡率显著高于对照组和空载组，DCLK1 mRNA和蛋白水平、细胞存活率和细胞迁移率显著低于对照组和空载组，差异均有统计学意义(P <0.05)。空载组和对照组miRNA-149-5p水平、细胞凋亡率、DCLK1 mRNA和蛋白表达、细胞存活率和细胞迁移率比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。[结论]过表达miRNA-149-5pselleck产品可减弱乳腺癌MCF-7/DDP细胞的顺铂耐药性，使乳腺癌细胞增殖和迁移率降低，凋亡增加，其机制可能与靶向抑制DCLK1的表达有关。

目的 探讨强心止痛汤对冠心病心绞痛并心力衰竭患者的临床疗效。方法 选取2020年2月至2022年2月郑州市第一人民医院收治的80例冠心病心绞痛并心力衰竭患者，按照随机数字表法分为两组，研究组(40例)接受常规治疗及强心止痛汤，对MK-4827体外照组(40例)接受常规治疗。对比两组心功能指标、中医证候评分、临床疗效、不良反应。结果 治疗前两组左心室舒张末期内径host response biomarkers(LVEGW4869研究购买DD)、左室射血分数(LVEF)比较，差异无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组LVEDD低于对照组，LVEF高于对照组(P<0.05);治疗前两组胸闷、胸痛、咳嗽、心悸、心绞痛评分对比差异无统计学意义(P>0.05),治疗后研究组评分低于对照组(P<0.05);研究组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 强心止痛汤可改善冠心病心绞痛并心力衰竭患者心功能，改善临床症状，临床效果显著且用药安全性高。

目的·探究乳腺癌脑转移患者的临床病理特征、预后情况及可能的影响因素。方法·选择2007年1月—2021年12月于上海交通大学医学院附属仁selleck激酶抑制剂济医院收治的女性乳腺癌脑转移患者75例。通过临床电子病历收集患者的临床病理特征，并于随访期间收集患者的脑转移后总生存期（overall survival after brain metastases,OSBM）。采用受试者操作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC curve,ROC曲线）评估各项生化指标对OSBM的预测效能。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同临床病理特征与患者OSBM的相关性，并在此基础上对具有统计学意义的因素进一步行Cox比例风险回归分析，以确定独立影响因素MK-1775配制。结果·75例患者的OSBM为11.0 (5.0,24.0)个月。ROC曲线的结果显示，糖类抗原125(carbohydrate antigen125,CA125)对OSBM具有较好的预测效果，其最佳截断值为22.3 U/mL。Kaplan-Meier生存分析的结果显示，初发转移为脑转移（P=0.046）、脑转移治疗期间颅外病灶发生进展（P=0.042）、脑转移灶仅累及小脑幕一侧（P=0.013）、 CA125水平<22.3 U/mL (P=0.000)、接受过局部治疗（P=0.034）改良分级预后评估（modified Graded Prognostic Assessment,mGPA）>1分（P=0.001）的患者的OSBM更长。Cox比例风险回归分析显示，脑转移灶同时累及小脑幕两侧或累及脑膜（P=0.029）、CA125水平≥22.3 U/Biomass burningmL (P=0.005)为OSBM的危险因素，mGPA>1分（P=0.033）为其保护因素。结论·乳腺癌脑转移灶的位置、确诊脑转移时患者的CA125水平以及mGPA评分是影响预后的重要因素。