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结核病(tuberculosis, TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,Mtb)所致的人畜共患的慢性、消耗性传染病。先天免疫细胞与Mtb的相互作用通过自噬、细胞凋亡及炎症反应等途径影响结核病的发生与发展。旨在探究减毒牛分枝杆菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin, BCG)感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7后，能否发生自噬与细胞凋亡。试验以BCG不同感染复数与感染时间感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过Western blot法检测自噬及凋亡相Ferrostatin-1纯度关蛋白LC3B-II、BecliLY2157299n1、Bcl-2和Caspase3的表达水平，MTT法检测细胞存活率，透射电镜观察感染BCG的巨噬细胞形态学变化，探究BCG感染RAW264.7是否会发生自噬和凋亡，进而确定BCG感染巨噬细胞的最佳浓度与时间。通过对巨噬细胞的分子水平和形态学检测发现，BCG以感染复数为10,感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7时间为12 h时，感染组自噬有关蛋白Beclin1、LC3B-II,促凋亡蛋白Caspase3的相对表达水平极显著高于对照组(P<0.01),抑凋亡蛋白Bcl-2的相对表达水平极显著低于对照组(P<0.01);透射电镜观察结果显示，小鼠巨噬细胞系RAW264.7内出现明显的自噬体、自噬溶酶体和细胞核固缩等现象。gastrointestinal infection研究结果表明，BCG感染巨噬细胞系RAW264.7能够发生自噬与细胞凋亡，且具有一定的感染复数和感染时间依赖性，最佳感染复数为10,最佳感染时间为12 h。

药物从研发到临床应用需要耗费较长的时间，研发期间的投入成本可高达十几selleckchem亿元。而随着医药研发与人工智能的结合以及生物信息学的飞速发展，Antineoplastic and I抑制剂药物活性相关数据急剧增加，传统的实验手段进行药物活性预测已经难以满足药物研发的需求。借助算法来辅助药物研发，解决药物研发中的各种问题能够大大推动药物研发进程。传统机器学习方法尤其是随机森林、支持向量机和人工神经网络在药物活性方面能够达到较高的预测精度。深度学习由于具有多层神经网络，模型可以接收高维的输入变量且不需要人工限定数据输入特征，可以拟合较为复杂的函数模型，应用于药物研发可以进一步提高各个环节的效率。在药物活性预测中应用较为广泛的深度学习模型主要是深度神经网络（deep neural networks,DNN）、循环神经网络（recurrent neural networks,RNN）和自编码器（auto encoder,AE），而生成对抗网络（generative adversarial networksAggregated media,GAN）由于其生成数据的能力常常被用来和其他模型结合进行数据增强。近年来深度学习在药物分子活性预测方面的研究和应用综述表明，深度学习模型的准确度和效率均高于传统实验方法和传统机器学习方法。因此，深度学习模型有望成为药物研发领域未来十年最重要的辅助计算模型。

CCS(Copper chaperone for superoxide dismutase)和COX17(Cytochrome c oxidase copper chaperone 17)蛋白是两种常见的铜(Cu)伴侣蛋白,在Cu稳态调控中具有重要作用。为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco Cu稳态调控机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得了810和192 bp的ccs (Pfccs)和cox17 (Pfcox17)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-Pfccs和pET32a(+)-Pfcox17重组表达载体;转化重组质粒到E. coli Rosetta (DE3)感受态细胞中,以IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达,发现PfCCS蛋白主要在沉淀中表达, PfCOX17蛋白主要在上清中表达;分别采用包涵体和亲和层析纯化的方法得到了纯度较高的重组PfCCS和PfCOX17蛋白;以纯化得到的PfCCS和PfCOX17蛋白免疫Balb/C小鼠三次,制备多克隆抗体。通过Western Blot鉴定了PfCCSEuropean Medical Information Framework和PfCOX17抗血清可以分别特异性识别重组PfCCS确认细节和PfCOX17蛋白,也可以分别特异性识别黄颡鱼内源性CCS和COX17蛋白。通过Western Blot对黄颡鱼CCS和COX17蛋白在鳃、心脏和肝脏中的分布情况进行检测,发现黄颡鱼CCS和COX17蛋白在肝脏中具有较高的表达水平, CCS蛋白在鳃中的表达水平最低,而COX17蛋白在鳃和心脏中的表达水平都很低。综上所述,本研究成功制备了黄颡鱼CCS和COX17蛋白的多克隆抗体,为深Panobinostat使用方法入研究CCS和COX17蛋白在Cu转运中的作用以及黄颡鱼Cu稳态调控机制奠定基础。

目的 探讨超微血管显像(SMI)技术联合自动乳腺全容积成像(ABVS)、彩色多普勒血流显像(CDFI)对乳腺癌早期的诊断价值，为患者的临床诊疗提供相关指导。方法 回顾性分析2018年3月至2021年3月于我院经手术病理证实的107例早期乳腺癌患者的影像学资料，以病理诊断为“金标准”。对比SMI、ABVS、CDFI及三者联合对乳腺癌早期的诊断符合率及对微钙化的检出率，并分析其对乳腺癌早期的诊断价值。结果 三者联合对乳腺癌早期的诊断符合率为97.20%，明显高于SMI、ABVS、CDFI单独诊断的78.50%、87.85%、70.09%，差异有统计学意义(P<0.05)；三者联合对微钙化的检www.selleck.cn/products/dorsomorphin-2hcl出率为72.90%，明显高于SMI、ABVS、CDFI的52.34%、57.94%、44.86%，差异有统计学意义(P<0.05)；三者联合对乳腺癌早期的诊断敏感度、特异度及准确度分别为98.13%、96.26%、97.20%，均明显高于SMI、ABVS、CDFIDolutegravir分子式单独诊断的(80.37%、folding intermediate74.77%、78.50%)、(88.24%、85.05%、87.85%)、(72.90%、66.36%、70.09%)，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SMI技术联合ABVS、CDFI对乳腺癌早期的诊断价值较高，三者联合能有效提高乳腺癌早期的诊断符合率及微钙化的检出率，且显著提高诊断早期乳腺癌的敏感度、特异度及准确度，值得推广。

目的 研究早期乳腺癌中雄激素受体(AR)表达与分子分型及多种临床病理参数的关系，比较AR阳性与阴性患者无病生存期(DFS),探讨AR表达与预后的关系。方法 选取2015-01-01-2020-12-31山东省肿瘤医院确诊并行手术治疗的442例早期女性乳腺癌患者，均经免疫组化检测AR,采用χ~2检验分析AR表达与临床病理特征及分子分型的关系，采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，Cox回归模型分析影响预后的因素。结果 共纳入早期乳腺癌患者442例，AR阳性表达率为76.9%(340/442);AR阳性表达率在LuminalA、LuminalB(HER-2阴性)、LuminalB(HER-2阳性)、HER-2过表达及三阴性乳腺癌(TNBC)亚型中分别为83.9%、78.2%、82.8%、77.5%和46.8%,不同分子分型间AR表达率的差异有统计学意义，χ~2=28.533,P<0.001。AR表达与患者年龄、月经状态、组织学分级相关联，均P<0.05;与病理类型、分期、肿瘤直径、淋巴结转移、有无癌栓和神经侵犯等无统计学意义关联；AR表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)、表皮生长因子受体(EGFR)相关联(均P<0TGF-beta/Smad抑制剂.001),与Ki-67、HER-2和p53无统计学意义关联(均P>0.05)。AR阳性与阴性Elexacaftor乳腺癌患者3年DFS率分别为90.1%和genetic syndrome79.6%,5年DFS率分别为83.6%和70.8%,AR阳性患者较阴性患者预后较好，χ~2=5.986,P=0.014。Cox单因素分析结果显示，DFS率与肿瘤大小(P<0.001)、淋巴结转移状态(P<0.001)、分期(P<0.001)和AR表达(P=0.017)相关联；多因素分析结果提示，AR表达(HR=3.074,95%CI:1.540～6.138,P=0.001)、肿瘤大小为T_4期(HR=7.657,95%CI:1.821～32.203,P=0.005)、淋巴结转移状态为N_2(HR=4.132,95%CI:1.599～10.681,P=0.003)和N_3(HR=6.092,95%CI:2.029～18.292,P=0.001)为影响乳腺癌患者无病生存的独立预后因素。结论 AR在乳腺癌中高度表达，在不同的分子分型中其表达具有较大差异；AR表达与患者年龄、月经状态、组织学分级、ER、PR、CK5/6、EGFR相关联，是乳腺癌患者预后良好的指标。

目的 研究原花青素对中波紫外线(UVB)诱导皮肤成纤维细胞凋亡和氧化损伤的影响。方法 分离培养人皮肤成纤维细胞，分成对照组(不做处理),UVB组selleckchem(UVB照射),原花青素低、中、高剂量组(20、40、80μg/mL原花epigenetic biomarkers青素处理，UVB照射),原花青素中剂量+XAV939组(40μg/mL原花青素+1μmol/L XAV939处理，UVB照射)。CCK-8实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡能力，黄嘌呤氧化法检测细胞SOD活性，硫代巴比妥酸法检测MDA水平，比色法检测GSH-Px活性，ELISA法检测培养液上清MMP-1、MMP-9水平，Western blot法检测Bax、Bcl-2、Wnt1、β-catenin蛋白表达。结果 与对照组比较，UVB组细胞存活率，SOD、GSH-Px活性，Bcl-2、Wnt1、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率，Bax蛋白表达，MDA、MMP-1、MMP-9水平升高(P<0.05);与UVB组比较，原花青素各剂量组细胞上述指标均有改善(P<0.05),并呈剂量依赖性；XAV939则逆转了原花青素对UVB诱导皮肤成纤维细胞的保护作用(P<0.05)。结论 原花青素通过激活Wnt/β-cate确认细节nin信号通路抑制UVB诱导皮肤成纤维细胞凋亡和氧化损伤。

透明质酸(HA)是一种广泛存在于生物体细胞外基质中的大分子粘性多糖,具有多种重要的生物活性,参与到炎症反应、免疫应答、以及伤口愈合等多种生理过程的调控中。随着分子量的变化,HA的活性与功能也可能产生相应的变化,其影响机制值得进一步研究。特应性皮炎(AD)等皮肤炎症对患者的生活质量及健康状况存在着严重的影响,目前常用的皮质类固醇等治疗药物在长期使用的情况下存在较为严重的副作用,为此,需要开发副作用较小的新型治疗手段。本课题对五种不同分子量HA(2.3～2000 k Da)的抗炎活性从体外化学水平、细胞内水平、动物体内水平三个层面开展实验,对HA的抗炎活性及其作用机理进行研究,同时对低分子量HA的安全性进行评价。具体的主要研究内容如下:(1)依据对DPPH自由基清Biomolecules除效果及NO抑制率,从体外化学水平对HA的抗氧化及抗炎活性进行测试,结果表明仅HA-P样品在2.5 mg/m L的浓度下对DPPH自由基有35.68±5.59%的清除率,而其余HA样品清除率均低于10%,同样地,不同分子量HA样品对NO的抑制率均低于10%。结果表明HA样品在体外化学水平下难以表现出良好的活性,而必须参与到生命代谢过程中。(2)在细胞层面上,首先对HA样品在Ha Ca T与RAW264.7细胞中的细胞毒性进行测试,结果仅HA-L在测试浓度下表现出细胞毒性,对于两种细胞HA-L的临界浓度分别为2000μg/m L及500μg/m L,其余HA样品在所测浓度下均无细胞毒性。采用25μg/m L SDS刺激Ha Ca T细胞建立炎症模型,经过1000～2000μg/m L HA处理后,细胞活力显著提升,表明不同分子量HA作用对SDS诱导的细胞炎症产生保护效果。采用1μg/m L LPS刺激RAW264.7细胞建立炎症模型。采用ELISA法对细胞中的NO、IL-6和TNF-α水平进行测定,结果表明500μg/m L的不同分子量HA样品均可以抑制NO和IL-6的过量分泌,其中,分子量越低的HA抑制效果越好;而只有分子量最高的HA-P显著降低了TNF-α的分泌。进一步采用实时荧光定量PCR对炎症相关基因IL-6、i NOS、TNF-α及HA受体CD44的m RNA表达量进行测定,结果表明不同分子量HA均可以抑制炎症相关m RNA的表达,从而抑制细胞中炎症因子的产生。(3)采用蛋白印迹分析对HA的抗炎作用机理进行研究,结果表明,HA-O可以通过抑制AKT1及JAK2蛋白的表达,调控炎症相关的PI3K/Akt及JAK/STAT信号通路,起到抗炎效果,而其余HA样品对这两种信号通路相关蛋白的表达情况无显著影响。进一步地,采用蛋白质组学对HA-O在RAW264.7细胞中的作用进行研究,在HA-Mirdametinib说明书O的作用下,AKT1,PAK4,FCGR2,NAL10等炎症相关蛋白发生差异表达,证明HA-O可以通过对上述蛋白进行调控从而参与到抑制炎症的作用中。(4)在动物体内,首先采用2,4-二硝基氟苯在小鼠背部诱导建立AD模型,研究不同分子量HA对AD的治疗效果。与模型组小鼠相比,经不同分子量HA治疗后的小鼠皮损症状、皮炎评分、搔抓情况、脾脏指数均有所缓解,根据组织切片病理分析,背部皮肤的表皮增厚、角质层脱落、棘层肥厚等现象有所改善,肥大细胞浸润情况减少,血清中Ig E及皮肤中diABZI STING agonist核磁IFN-γ、IL-4等炎症指标水平下降,表明不同分子量HA均能够缓解AD症状。对皮肤组织匀浆处理后对其中蛋白表达情况进行测定,结果表明AKT1、PI3K、JAK2蛋白表达量均显著降低,表明不同分子量HA均可以通过PI3K/Akt及JAK/STAT信号通路对炎症起到调控作用。此外,采用SLS刺激斑马鱼建立炎症模型,通过对中性粒细胞进行计数,证明除HA-M外,其余HA样品在斑马鱼体内均可以抑制SLS诱导的炎症反应。(5)根据相关行业标准及规范,对低分子HA及HA寡聚糖的安全性进行评价。采用直接多肽反应实验对其致敏性进行测试,采用鸡胚尿囊膜实验对刺激性进行测试,采用Ames实验对致突变性进行测试,采用斑贴试验对人体安全性进行测试,结果表明低分子HA与HA寡聚糖无明显的致敏性、刺激性、致突变性,对人体安全。

目的 建立艰难梭菌感染结肠类器官模型，对艰难梭菌毒素B(TcdB)损伤小鼠结肠上皮的作用及可能机制进行初步研究。方法 处死6～8周龄C57BL/6小鼠，取结肠标本,分离、收集结肠隐窝，以基质胶包埋后加入培养基，显微镜下观察记录生长情况；在巨大芽孢杆菌中表达重组艰难梭菌毒素B(rTcdB)蛋白，经镍柱纯化后加入结肠类器官体系继续培养，观察类器官生长情况并检测干host-microbiome interactions性基因表达量变化，转录组测序分析。结果 5pmol/L rTcdB作用12 h即可致结肠类器官生长缓慢及部分死亡，干性基因Lgr5、Axin2、Bmi1表达较对照组显著上调。RNA-seq测序结果显示毒素作用组较对照组差异基因有3 140个，其中上调基因有1 936个，下调基因有1 204个。Gene Ontology富集分析显示损伤组差异基因主要富集的生物过程通路分别有低氧应答和对β干扰素、γCL13900细胞培养干扰素的细胞应答。同时蛋白质互作网络（Protein-Protein Interaction Networks, PPI）筛选出9个关键基因，其中的IFIT3、IFIT1、GBP3和GBP2的编码基因也参与了α/β干扰素、γ干扰素的细胞应答通路。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析结果表明有47条通路差异显著富集，包括花生四烯酸代谢通路和Wnt信号通路等。结论 TcdB可能通过Pidnarulex分子式调节干性基因表达，增强低氧应答通路，减弱α/β干扰素、γ干扰素的细胞应答通路，调节花生四烯酸代谢通路和Wnt信号通路等介导损伤结肠上皮细胞。

目的探讨乳腺腺病与乳腺癌磁共振影Medial meniscus像学特点。方法回顾性分析30例经手术病理证实为乳腺腺病的患者,20例乳腺癌患者核磁共振成像(MRI)资料,所有患者术前均行乳腺DWI、DCE-MRI扫描。分析两组患者MRI表现特点并加以鉴别。结果www.selleck.cn/products/gdc-0068 24例腺病表现为非肿块样强化;6例表现为肿块样强化。21例TIC曲线表现为Ⅰ型,8例表现为Ⅱ型,1例表现为Ⅲ型,DWI图像轻度或无扩散受限。乳腺癌MRI表现为肿块样强化共18例,均表现为类圆形或不规则形肿块,部分边缘清楚,部分边缘可见毛刺;13例TIC曲线表现为Ⅱ型曲线,3例表现为Ⅲ型。非肿块样强化病变2例,TIC曲线为Ⅱ型,DWI序列多数明显扩散受限。结论乳腺腺https://www.selleck.cn/products/smoothened-agonist-sag-hcl.html病的MRI表现具有一定的特征性,部分腺病的形态学和动态增强表现与乳腺癌存在重叠,易误诊,动态增强及DWI相结合在鉴别诊断两者时存在较高的利用价值。

目的 探究miR-326通过调控EphB3的表达,抑制乳腺癌侵袭转移的分子机制。方法 RTFQ-PCR用于检测miR-326在正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达情况及miR-326过表达质粒的转染效率。EdUoncology staff细胞增殖实验、Transwell实验用于检测不同分组细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。双荧光素酶实验用于验证miR-326与EphB3是否存在结合位点。Western blot法检测过表达miR-326后乳腺癌细胞中EphB3的表达AY-22989价格情况。结果 RTFQ-PCR结果显示,miR-326在乳腺癌细胞中低表达,且转染成功(P<0.05)。EdU增殖实验和Transwell实验结果表明,过表达miR-326能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-326可以与EphB3的3′-UTR相互结合(P<0.05)。Western blot和Transwell实验结果显示,miR-326可以负向调控EphB3抑制乳腺癌细胞的侵袭转移(P<0.05)。结论 miR-326在乳腺癌的发生发展过程中起着抑癌基因的作用,并通Berzosertib使用方法过调控EphB3的表达抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。