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牛肠激酶轻链(enterokinase light chain,EKL)是一种高度专一性识别Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶,它能够在Lys的C端水解多肽,在蛋白生产和生物工程领域具有广泛的应用价值。目前市售EKL价格昂贵,提取分离成本较高,且天然的牛肠激酶来源有限,致使其应用受到限制。基于此,本研究利用基因工程方法,通过体外重组表达及其表达条件的优化Immunotoxic assay,获得了EPZ-6438较高产量且具有酶活性的EKL,从而为其开发应用提供了技术支撑。1牛肠激酶轻链基因的原核表达及其酶活性分析通过替换pET-28a(+)载体上的核糖体结合位点来提高EKL蛋白表达量。首次将EKL基因上游的 RBS1 序列(5′-TTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGA-3′)替换成 RBS2 序列(5′-AAAGAGGAGAAA-3′),并构建了重组表达质粒 pET-28a(+)-RBS1-EKL-His 和pET-28a(+)-RBS2-EKL-His。酶切鉴定和测序正确后,将其分别转化感受态E.coli ArcticExpress(DE3)。经 IPTG 诱导,SDS-PselleckchemAGE 和 Western-blot 结果显示,融合蛋白RBS1-EKL-His和RBS2-EKL-His均主要以包涵体的形式表达,并且RBS2-EKL-His的表达量相对较高。将包涵体进行复性,并通过亲和层析柱纯化结果显示,与RBS1-EKL-His相比,RBS2-EKL-His的蛋白产量提高了 55.20%。酶学活性结果显示,两者均能够特异性切割含有(Asp)4-Lys序列的底物蛋白。综上表明,将RBS1替换为RBS2后,提高了具有酶活性的EKL的表达量。2牛肠激酶轻链基因的真核表达及其酶活性分析根据牛EKL基因序列设计并合成引物,PCR扩增EKL基因,并将其克隆至真核表达载体pPIC9K的相应位点,构建重组表达质粒pPIC9K-His-EKL。酶切鉴定和序列分析正确后,将其转化至组氨酸缺陷型毕赤酵母宿主菌GS115中。经筛选,PCR鉴定结果表明,His-EKL基因成功整合到毕赤酵母的染色体中。通过诱导条件的优化,确定His-EKL在毕赤酵母中表达的最佳发酵条件为:诱导温度30℃,培养基初始pH 5.0,甲醇浓度1%,诱导时间72 h。利用亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE和Western-blot结果显示,融合蛋白His-EKL在毕赤酵母中成功获得分泌性表达,His-EKL纯度为98%,并且具有酶活性。本研究通过在两种蛋白表达系统中获得了 EKL,相较于大肠杆菌原核表达系统,通过优化毕赤酵母发酵条件,可以获得较高表达量和酶活力的分泌型表达产物EKL,更有利于实验室的推广应用,为降低蛋白生产的成本提供了生物原料。

研究目的:在中国老龄化进程逐步加快的社会背景下,十八大以来,我国继续推进”全民健身”的政策,并提出”全民健身”与”全民健康ABT-263配制“深度融合,越来越多的人群开始参与各类健身活动。与此同时,与老年人、伤病人群息息相关的”废用性肌萎缩”的研究显得尤为重要,废用性肌萎缩一种老年高发、运动损伤常常伴随的肌肉萎缩症。我们响应国家健康提倡的同时,更要做好科学健身知识的学习与普及,为此项重大举措提供更为先进的科学知识支撑,加强”全民健身”的医疗保障壁垒。废用性肌萎缩研究领域文献繁冗,近年来在全球范围内科研成果颇丰,但国内外研究都存在着存在一些不足,笔者认为有必要对国内外有关废用性肌萎缩研究文献进行科学总结,对比分析国内外研究差异,为我国今后的研究奠定理论基础,更好地为”健康中国”战略目标的实现而服务。科学知识图谱是以知识域为对象,显示科学知识的发展进程与结构关系的一种图像。它以科学知识为计量研究对象,属于科学计量学的范畴。它的主要功能是可视化地描述人类在PORCN抑制剂一段历史时间内获取的知识资源及载体,绘制、挖掘、分析和显示科学技术知识以及它们之间的相互联系,在组织内创造知识共享的环境以促进科学技术研究的合作和深入。其描述的对象主要包括:从事科学技术活动和作为知识载体的人,显性或编码化的知识,以及过程或方法。本研究利用Web of Science数据库统计年发文量、年累计发文;借助CiteSpace软件进行国家、机构、作者分析,绘制关键词共现、关键词突现、文献共被引图谱、聚类网络并对其进行分析,从多方面探讨废用性肌萎缩相关研究进展及国际发展趋势与前沿热点。研究方法:Web of Science Core Collection(WOSCC)英文核心数据库是进行文献计量学分析常用的权威数据来源,以此可获取世界范围内该领域的研究进展。本次研究以该数据库为数据来源,检索时限从2003年1月1日至2022年8月8日。检索式为:TS=(“Disusemuscular atrophy”OR”Disuse muscle atrophy”OR”Disuse atrophy”OR”Disuse skeletal muscle atrophy”) AND LANGUAGE:(English) ANDDOCUMENT TYPES:(Article,Review)。使用美国Chaomei Chen教授研发的计量学分析软件CiteSpace6.1.R6对检索的文献进行归纳分类。具体如下:将检索文献以”全记录与引用参考文献、纯文本格式”导出并命名为”download_x-x.txt”文件,导入CiteSpace6.1.R6软件。剔除重复文献,将剩余文献进行人工浏览删除无关文献,得到744篇文献,包括研究论文631篇(84.8%)和综述113篇(15.2%),软件参数设置如下:”时间”设置为”2003.1-2022.12″;”年切片”设置为”1″;节点选择阈值为:g-index,k=25;网络剪裁方式为”Pathfinder””Pruning the merged network”和”Pruning the sliced networks”。研究结果:(1)全球关于废用性肌萎缩的研究文献在2003至2022年间呈波动上升的趋势。(2)发文量前五的国家分别是美国、日本、加拿大、英国、中国,其中我国的主要科研机构为西北大学,近年来与西北工业大学合作较为紧密。(3)该领域高产作者为Powers SK、Van Loon L、Wall BT,各作者间偏向独立发文,缺乏合作。(4)通过对关键词分析得出18项聚类,归纳出”致病因素””患病表征””病理机理””干预实验”是该领域研究四大主题。最新的文献共被引聚类有”骨骼肌蛋白””废用性肌萎缩””机械疗法”。(5)关键词突现分析中,”骨骼肌萎缩””咀嚼肌””炎症”作为持续突现到2022年的关键词,有望成为该领域下一阶段的研究焦点。我国今后的科研力量可以较多着眼于此。研究结论:(1)国家发文量方面,美国作为医学发达国家累计发文量排名第一且遥遥领先,另外日本、加拿大与英国也是其主要发文国家,且国家间合作紧密,学术交流氛围浓厚,国际影响力巨大。中国的发文量虽排名第五,但与他国的合作较少,且国际影响力较弱。(2)美国的佛罗里达大学在世界各国机构中处于领先地位,我国的西北大学、中国航天员训练中心和香港理工大学虽也有一定量发文,但是合作较为稀疏。(3)作者Powers SK、Wall BT以高发文量及高被引频次在领域内具有巨大影响力,我国作者有一定发文,但被medicines optimisation引频次远远落后,领域内影响力不足其原因可能与现阶段国内科研论文质量普遍不高有关,我国科研人员未来要注重文章质量而不应仅仅聚焦于文献产出数量,逐渐提高我国学术界诚信度。总之,我国今后需加大合作研究,营造浓厚的学术交流氛围,产出更多高质量文献,增加科研成果的可信度,提升在该领域的国际影响力。(4)近五年研究热点有蛋白质合成代谢抵抗、线粒体功能障碍、氧化应激与废用性肌萎缩中的物种差异,预计也会成为持续性的焦点话题。(5)当代废用性肌萎缩三大研究主题可概括为:废用性肌萎缩的生理病理机制、动物与人类差异性、临床治疗手段。生理病理机制主要围绕蛋白质合成与水解、线粒体功能障碍、氧化应激、基因表达及炎症展开研究;动物与人类差异性方面的研究体现在对于废用性肌萎缩具体差异化表现,包括实验动物如鼠类与人类之间的物种差异,以及不同年龄、性别人类之间的差异;当今临床治疗手段使用较多的是进行抗阻运动,以减少”肌肉废用”这一主要原始致病因素,此外还有神经肌肉电刺激疗法(NMES)、机械疗法如按摩、营养补充干预及抗氧化和抗炎药物疗法等。

目的:基于网络药理学的方法探讨了治疗川崎病的常用药对牡丹皮-赤芍发挥作用的潜在机理。方法:用TCMSP数据库对牡丹皮-赤芍药对的有效成分和相关靶点进行检索筛选，基于GeneCards和OMIM数据库搜索川崎病有关靶点，通过Venny工具分析牡丹皮-赤芍药对治疗川崎病的交集靶点。共有靶点经STRING数据库与CytoscaLBH589 NMRpe3.7.2软件构建PPI网络图，使用R语言分析GO功能和KEGG富集情况，经分子对接技术评价关键靶点与主要成分的结合力。结果:筛出牡丹皮-赤芍药对36个活性成分，243个潜在靶点，川崎病相关靶点1619个，活性成分-疾病共同靶点100个。PPI网络中核心靶点Schools Medical主要涉及MYC、HIF1A、AKT1、JUN等。GO功能分析获取GOBP条目1883条，GOCC条目40条，GOMF条目147条；KEGG富集得到168条信号通路，靶点集中在AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路和TNF信号通路等。分子对接结果中，槲皮Captisol NMR素、山柰酚与JUN、AKT1、CASP3具有较好的结合能力。结论:牡丹皮-赤芍药对通过细胞氧化应激反应和血管内皮生长因子等生物过程，经多成分、多靶标、多通路作用于川崎病进行治疗。

目的 探讨幽门螺杆菌感染者服药依从性及对病原菌耐药影响。方法 以2020年7月至2022点击此处年12月在海口市中医医院做胃镜检查并确诊为Hp阳性的患者作为研究对象，采用自编问卷收集患者一般人口学资料，在完成抗幽门螺杆菌感染治疗疗程后应用Morisky用药依从性问卷进行调查，并采集患者治疗前的胃粘膜样本用于幽门螺杆菌耐药分析，采用描述性分析法分析幽门螺杆菌感染者服药依从性和幽门螺杆菌耐药情况，单、多因素分析幽门螺杆菌感染者服药依从性对病原菌耐药影响。结果 共纳入2 112例Hp患者，其中1 509例用药依从性良好，占71.44%。2 112例幽门螺杆菌感染者获得2 112株幽门螺杆菌，其中均敏感126株，占5.97%，单一耐药763株，占36.13%，双重耐药559株，占26.47%，多重耐药664株，占31.43%。Hp对甲硝唑和克拉霉素的耐药率最高，分别为51.18%、20.26%。多分类有序logistic回归分析结果显示使用抗生素种类≥4种（CH-223191分子量OR=1.881）、复治（OR=1.702）、服药依从性不足（OR=2.787）、既往3个月内使用左氧氟沙星（OR=1.179）、既往3个月内使用阿莫西林（OR=1.754）、既往3个月内使用头孢呋辛（OR=1.991）是Hp耐药的独立危sandwich immunoassay险因素。结论 幽门螺杆菌感染者存在用药依从性差情况，且患者的耐药现状较严峻，需加强Hp感染患者服药依从性的管理和耐药性的监测，针对耐药性监测结果合理用药。

人参皂苷（GS）是人参的主要药理活性成分，主要由糖和非糖化合物的半缩醛羟基组成，是一种多糖衍生物。目前已被分离和鉴定出的人参皂苷有100多种，按化学结构可分为原人参三醇（PPT）:Rg1,Re,Rg2,Rh1和Rf；原人参二醇（PPD）:Rb1,Rb2,Rd,selleck产品Rg3和Rh2；齐墩果酸衍生物：Ro。国内外研究发现，GS具有多种药理活性，包括抗炎、抗癌、治疗创伤愈合、心血管保护和神经保护等。缺血性脑卒中主要是由脑血管局灶性堵塞引起的，从而引起严重的神经损伤，是世界范围内死亡和残疾的主要原因之一。脑卒中发病机制复杂，具有复发率高、致残率高、致死率高等特点。GS对缺血性脑卒中的保护作用比较确切，本文主要从其作用机制进行综述。(1)抑制钙超载：GS通过抑制NMDAR1和CREB，进而抑制钙超载，修selleck复脑损伤；(2)抗氧化应激：GS能够促进Nrf2信号通路，激活HO-1，减少ROS，发挥抗氧化应激的作用；(3)抗炎：GS通过下调TLR4/NF-κB信号通路，抑制TNF-α,IL-1β和ICAM-1的表达减少神经炎症；(4)抗焦亡：GS通过激活Nrf2/HO-1信号通路，使胱天蛋白酶1等的表达受到抑制，此外还可通过降低GSDMD的表达抑制细胞凋亡；(5)抗凋亡：GS下调Bax、胱天蛋白酶3，抑制细胞凋亡；(6)修复血脑屏障：GS通过PI3K/Akt信号通路，激活Nrf2来减少TJ进而达到修复血脑屏障的作用；(7)促进血管新生：GS通过PI3K/Akt信号通路来促进VEGF的表达，促进血管新生；(8)调节肠道菌群：GS通过抑制脑缺血再灌注损伤，时使其导致的肠道菌群减少。综上所述，GS可通过抑制钙超载、抗氧化应激、抗炎、抗焦亡、抗凋亡、修复血脑屏障、促进血管新生及调节肠道菌群等methylomic biomarker治疗缺血性脑卒中。本文对GS在治疗缺血性脑卒中作用及机制进行综述，以期为其临床应用及研究提供参考。

目的 探讨盐酸伏诺拉生联合阿莫西林在胃食管反流病伴幽门PR-171分子式螺杆菌（Hp）感染治疗中的应用效果。方法 选取某院2021年7月～2022年2月收治的60例胃食管反流病伴Hp感染患者，随机分为观察和对照两组，各30例。观察组患者采用盐酸伏诺拉生联合阿莫西林抗生素治疗，对照组患者常规PPI抑酸四联疗法根除幽门螺杆菌。比较两组患者治疗1个月后临床疗效、治疗前后症状积分、Hp根除率及复发情况、不良反应发生情况。结果 观察组治疗后显效16例、有效13例、无效1例，临床总有效率为96.67%，对照组治疗后显效7例、有效15例、无效8例，临床总有效率为73.33%，观察组显著高于对照组（P <0.05）；治疗后观察组临床症状积分为（0.32±0.43）分，对照组临床症状积分为（0.92±0.87）分，两组患者临床症状积分同治疗前比较均降低，且观察组低于对照组（P <0.05）；Spinal biomechanics观察组患者Hp根除根除率为93.33%，显著高于对照组70.00%(P <0.05)，随访3个月观察组疾病复发率为10.00%，显著低于对照组46.67%(P<0.05)；观察组治疗后发生头昏1例、便秘1例、恶心1例，总发生率为10.00%，对照组发生头昏1例、腹泻1例、恶心2例，总发生率为13.33%，两组患者不良反应总发生率比较，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 盐酸伏诺拉生联合阿莫西林治疗胃CCRG 81045体外食管反流病伴Hp感染效果确切、减轻患者临床症状、提高Hp根除率，具有一定的安全性，但由于盐酸伏诺拉生在我国应用时间短，值得深入探索。

支气管哮喘（简称哮喘）prostatic biopsy puncture是一种临床常见的呼吸系统疾病，以气道出现慢性炎症反应为主要特征，发病机制繁杂，治疗Caspase抑制剂周期漫长，缠绵难愈，且无特效药。氧化应激是哮喘发病机制研究中的新热点，也是其治疗的潜在关键靶标。生理状况下，体内氧化与抗氧化系统处于动态平衡，两者相互拮抗共同维持机体正常生命活动。哮喘发病阶段，活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）等氧化产物过量产生，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）等抗氧化剂含量降低，氧化程度超出氧化物的清除，使氧化应激水平大幅提高。另外，ROS的过量生成，会激活氧化应激相关信号通路，产生促炎因子，加剧炎症反应。从而导致哮喘患者肺部和气道组织损伤。近年来，中医药在哮喘治疗中的优势得到国内外专家学者的关注，尤其在调节氧化还原平衡缓解哮喘患者氧化应激、减少炎症反应等方面已取得显著成效。中医药一方面通过抑制丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）、核转录因子-kappa B（NF-κB）相关信号通路，从源头上降低氧化产物和促炎因子的含量；另一方面通过激活核因子E_(2)相关因子2（Nrf2）相关信号通路，上调抗氧化酶的水平，增强抗氧化系统以中和过量堆积的氧化产物。因此，以中医药调节氧化平衡状态作为诊疗思路，可能是未来防治哮喘的新手段、新方向。文章对氧化应激相关通路参与哮喘发病机制进行系统阐述，同时对中药提取物、中药复方调控氧化应激相关通路治疗哮获悉更多喘的最新研究进行梳理，以期为中医药防治哮喘临床和基础研究的开展提供更充分、更坚实、更科学的理论依据。

目的 研究芪苓益肾通络方含药血清对肾小球系膜细胞环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶(PK)G信号通路的作用机制。方法 30只SD大鼠随机分为健康组(selleckchem健康大鼠)、通络方组(芪苓益肾通络方干预)、西药组[西药盐酸苯钠普利片(洛汀新)及格列喹酮比(糖适平干预)],每组10只，制备含药血清。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡。将HMCs细胞分为空白组(5.6 mmol/L低糖+10%健康大鼠血清)、肾病组(30 mmol/L高糖+10%健康大鼠血清)、低剂量组(30 mmol/L高糖+5%通络方组大鼠血清+5%的健康大鼠血清)、高剂量组(30 mmol/L高糖+10%通络方组大鼠血清)及对照组(30 mmol/L更多高糖+10%西药组大鼠血清)。MTT检测HMCs细胞OD值；流式细胞仪检测HMCs细胞凋亡率；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HMCs细胞中核转录因子(NF)-κB、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1水平；黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA);Western印迹测HMCs细胞中cGMP、PKG蛋白表达。结果 与空白组相比，肾病组细胞OD值升高，NF-κB、MCP-1、MDA增加，SOD、cGMP、PKG降低，差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率无明显差异(P>0.05);与肾病组相比，低剂量组细胞OD值及NF-κB、MCP-1、MDA水平降低，SOD、cGMP、PKG增加，细胞凋亡率升高，差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组相比，高剂量组与对照组细胞OD值及NF-κB、MCP-1、MDA水平降低、细胞凋亡率升高，SOD、cGMP、PKG水平增加，差异有统计学意义(P<0Neuroscience Equipment.05);与高剂量组相比，对照组细胞增殖、凋亡、NF-κB、MCP-1、MDA、SOD水平比较无明显差异(P>0.05),cGMP、PKG蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论 芪苓益肾通络方通过刺激cGMP的表达，进而激活PKG,改善炎性及氧化应激水平，调控高糖诱导的肾小球系膜细胞的生物学行为，对肾功能起到保护作用。

目的:本试验拟采用脏腑推拿治疗术,进行代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并情绪障碍的干预试验,旨在为脏腑推拿疗法治疗代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并随情绪障碍的应用推广提供实证证据。方法:依据纳入标准收录72例于长春中医药大学附属医院推拿科就诊的代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并情绪障碍患者,随机分为治疗组与对照组,两组各36例。对照组予以常规治疗方式干预,包括MS对应各组分药物干预与健康生活方式宣教,治疗组在常规治疗方式干预的基础上,予以脏腑推拿治疗日1次,连续6天,休息1天,为1个疗程,治疗周期共4个疗程。比较两组治疗前后:腰围(WC)、腰臀比(WHR)、身体质量指数(BMI)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、简明健康状况调查量表(SF-36)及中医证候积分量表,进Canagliflozin核磁行统计分析,客观评价。结果:试验结束后,治疗组失访4例,对照组失访3例,最终有效病例为65例,试验结果如下:(1)试验前患者资料差异性分析:比较两组患者性别、年龄、BMI、WC、WHR、HAMD、HAMA、SF-36(生理功能、生理职能、躯体疼痛、总体健康、活力、社会功能、情感职能、精神健康)、中医证候积分差异性,结果显PUN30119使用方法示治疗前各指标组间比较差异无统drug-medical device计学意义(P>0.05),具有可比性。(2)治疗结果:治疗后两组患者BMI、WC、HAMA评分、HAMD评分、中医证候积分较治疗前降低,生理职能、活力、精神健康均较治疗前升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组躯体疼痛、社会功能评分有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组WHR较治疗前有所降低,生理功能、总体健康、活力、情感职能评分较治疗前有所升高,差异有统计学意义(P<0.05);躯体疼痛、社会功能评分较治疗前升高,但其差异无统计学意义(P>0.05)。对照组WHR较前有所下降,生理功能、躯体疼痛、总体健康、社会功能、情感职能评分较前有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。组间比较显示,治疗组在降WC、HAMA评分、HAMD评分、中医证候积分,提升总体健康方面优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗组HAMD总有效率为46.88%,对照组总有效率为27.27%,组间比较P<0.05;治疗组HAMA总有效率为71.88%,对照组HAMA总有效率为39.39%,组间比较P<0.05;治疗组中医证候积分总有效率为75.00%,对照组总有效率为66.66%,组间比较P<0.05。提示治疗组相较于对照组在抑郁障碍、焦虑障碍及中医证候三方面均疗效更优,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)在治疗过程中及疗程结束后患者无不适症状及不良反应,生命体征无异常。结论:(1)脏腑推拿手法是代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并情绪障碍的有效治疗方法,能够有效改善患者情绪焦虑状态与代谢水平,提高生活质量。(2)本组病例经推拿治疗后,未发现有明显的副作用不良反应,具有较高的安全性,是一种有广泛应用前景的治疗方式。

目的 分析过敏性紫癜(HSP)患儿幽门螺MK-1775分子式杆菌(Hp)感染对补体系统及炎症指标的影响。方法 选取2017年4月-2020年4月中国医科大学附属盛京医院收治的82例HSP患儿为研究对象，根据~(14)C-尿素呼气试验结果分为Hp阳性组57例，H获悉更多p阴性组25例，分析两组患儿血清低半乳糖化IgA1(Gd-IgA1),补体片段C3a、C4a、C5a和Bb,以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素18(IL-18)水平。结果 Hp阳性组出现腹痛、呕血/便血患儿的比例显著高于Hp阴性组(P<0.05),两组出现皮肤紫癜、关节肿痛、尿蛋白阳性、血尿患儿的比例均差异无统计学意义；Hp阳性组患儿血清Gd-IgA1水平显著高于Hp阴性组(P<0.05); Hp阳性组患儿的血清补体片段C3a、C5a和BBiochemistry and Proteomic Servicesb水平显著高于Hp阴性组(P<0.05),而两组血清C4a水平比较差异无统计学意义；Hp阳性组患儿血清IL-18、MCP-1水平均高于Hp阴性组(P<0.05)。结论 Hp感染可能通过增加Gd-IgA1水平，激活补体旁路途径而促进IL-8和MCP-1的产生，进而促进过敏性紫癜的发生。