DuDu365生物天地

旨在研究饲喂高剂量(65%,75%)白酒糟对3月龄山羊瘤胃发酵、菌群结构及炎性基因的影响，试验选择15只日龄、体质量相近的健康本地山羊，随机分为对照组、65https://www.selleck.cn/products/byl719.html%白酒糟组和75%白酒糟组，5只/组。对照组饲喂基础饲粮，试验组分别饲喂添加65%,75%的白酒糟日粮，正试期90 d。采用气质联用法、ELISA法依次检测参试山羊瘤胃液VFA、组胺和LPS浓度，用Illumina Miseq PE300高通量测序平台进行瘤胃液16S rDNA测序，qRT-PCR法测定瘤胃组织中p65、COX2、VCAM1的表达量。结果表明：1)65%和75%白酒糟组山羊瘤胃液pH和总VFA显著低于对照组(P<0.05),75%白酒糟组山羊瘤胃液乙酸、丁酸及乙酸/丙酸比值显著低于对照组(P<0.05),75%白酒糟组山羊瘤胃液组胺和LPS浓度显著上升(P<0.01)。2)65%和75%白酒糟组山羊瘤胃微生物中的优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota),SAG浓度且占总门类的90%以上，丰度最高的科、属为普雷沃菌，且普雷沃菌丰度会随着白酒糟饲喂量的增多Congenital CMV infection呈上升趋势。3)65%和75%白酒糟组山羊瘤胃组织炎性基因p65、COX2、VCAM1 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。饲喂65%和75%白酒糟会降低山羊瘤胃的发酵功能，一定程度上使瘤胃菌群的多样性和丰度降低；瘤胃液LPS和组胺浓度升高，可通过NF-κB信号通路中的p65、COX2 2个途径引起瘤胃上皮的炎症。

目的:以孕中晚期孕妇为研究对象,通过膳食调查了解孕妇膳食维生素K的摄入情况、食物来源及其影响因素,同时检测孕妇血清维生素K水平,分析膳食维生素K摄入量和血清维生素K水平与妊娠并发症、新生儿结局的关联。这将为指导孕妇合理摄入维生素K以及制定其参考摄入量提供一定的参考。方法:采用横断面研究,于2021年4月至2022年12月招募中晚期孕妇,按照纳入排除标准在滨州市某三甲医院,共纳入研究对象831名。通过问卷调查收集研究对象的基本信息,采用半定量食物频率问卷(SFFQ)询问孕妇食物摄入情况;参照美国食物成分表中维生素K1含量数据以及中国疾病预防控制中心关于食物中MK-4和MK-7的含量计算孕妇每日维生素K摄入量。计算各维生素K亚型的主要食物来源,并分析膳食维生素K摄入量的影响因素。采用SPSS 26.0软件对数据资料进行统计分析,计量资料采用方差分析或者Kruskal-Wallis非参数检验进行组间比较,定性资料组间比较采用卡方检验。使用Spearman相关分析孕妇血清维生素K水平与膳食维生素K摄入量之间的相关性,采用Graphpad Prism 8.0和Excel绘图。采集孕妇静脉血,分离血清,采用LC/MS/MS(高效液相色谱-串联质谱法)检测血清维生素K1和MK-4水平。同时收集孕妇妊娠期糖Pexidartinib纯度尿病等并发症的发病情况及其新生儿的临床信息。采用多因素Logistics回归分析孕妇膳食维生素K摄入量和血清维生素K水平与妊娠并发症New Metabolite Biomarkers和新生儿结局的相关性。结果:共有831名孕妇完成膳食调查,结果显示,孕妇维生素K1摄入量的中位数(P25,P75)为192.8(132.5,250.1)μg/d,其中低于推荐摄入量(80 μg/d)者为33人(3.4%)。维生素K1摄入量占总维生素K摄入量的79.4%。MK-4摄入量的中位数(P25,P75)为31.2(22.8,34.4)μg/d,占总维生素K摄入量的11.8%。膳食MK-7中位数(P25,P75)为16.7(2.4,25.0)μg/d,占总维生素K摄入量的8.8%。本研究中孕妇的膳食维生素K1主要来源为蔬菜,MK-4主要来源为肉禽蛋类,MK-7主要来源为酸奶。孕妇膳食维生素K摄入量的影响因素分析结果显示:城镇的孕妇膳食维生素K总摄入量、维生素K1、MK-7摄入量显著高于农村的孕妇(P均<0.05);文化程度和月收入较高的孕妇,膳食维生素K总摄入量、维生素K1、MK-7摄入量较高;冬春季节的孕妇膳食维生素K总摄入量和维生素K1摄入量高于夏秋季节(P均<0.001);而MK-4摄入量低于夏秋季节(P=0.001);与胎次为一胎的孕妇相比,二胎及以上的孕妇MK-7摄入量较低(P=0.021)。相关性分析结果显示,血清维生素K1水平与膳食维生素K1摄入量GSK1349572 IC50呈正相关(r=0.130,P<0.001)。在校正潜在混杂因素后,与最低四分位数相比,第3四分位的维生素K总摄入量与增重过多存在负相关关系,其OR(95%CI)为0.53(0.30,0.94);最高四分位数的维生素K1摄入量与妊娠高血压(PIH)的风险呈负相关,其OR(95%CI)为0.46(0.24,0.88);第2四分位的MK-4摄入量与PIH的风险存在负相关关系,其OR(95%CI)为0.51(0.26,0.98);第3四分位的MK-4摄入量与妊娠糖尿病(GDM)和增重过多的风险存在正相关关系,其OR(95%CI)分别2.19(1.31,3.66)、1.83(1.05,3.16)。在校正潜在混杂因素后,孕妇血清维生素K总水平与PIH、GDM、增重过多的发生风险呈负相关;血清维生素K1水平与PIH、GDM的发生风险呈负相关;血清MK-4水平与PIH的发生风险呈负相关。除此之外,血清维生素K总水平和血清维生素K1水平与早产呈负相关,最高与最低四分位相比,其 OR(95%CI)分别为 0.25(0.14,0.43)、0.29(0.17,0.50);孕妇血清维生素K1水平与早产和新生儿胆红素血症的发生风险呈负相关,最高与最低四分位相比,其OR(95%CI)分别为0.29(0.17,0.50),0.45(0.27,0.76);与最低四分位相比,第2四分位孕妇血清维生素K1与巨大儿的发生风险呈负相关,其OR(95%CI)为0.29(0.10,0.83)。结论:1.孕妇维生素K1摄入量基本达到适宜摄入量。膳食维生素K摄入的影响因素包括孕妇文化程度、月收入、居住地和调查季节等。膳食维生素K1与血清维生素K1水平呈正相关。2.孕妇维生素K1摄入量与PIH的发生风险呈负相关,MK-4摄入量与GDM、增重过多发生呈正相关,血清维生素K总水平与PIH、GDM、早产的风险呈负相关,血清维生素K1与PIH、GDM、早产、新生儿胆红素血症、巨大儿的风险呈负相关,血清MK-4水平与PIH和早产的发生风险呈负相关。

目的:探讨儿童川崎病的危险因素，并构建川崎病患儿列线图模型。方法:回顾性选取2020年1月—2022年12月山西省儿童医院收治的135例发热患儿，其中诊断为川崎病97例，非川崎病38例。收集患儿一般资料，通过单因素回归分析和多因素LogSmoothened Agonist体外istic回归分析川崎病的危险因素，借助R软件对确定的风险因素构建相关列线图模型，并通过Bootstrap法对样本反复抽取1 000次Child immunisation，以对针对儿童川崎病所构建的列线图模型的精准度进行检验，通过受试者工作特征(ROC)曲线对列线图模型的预测能力进行评估。结果:多因素Logistic回归分析结果selleck GSK2118436显示，红细胞沉降率、大血小板百分比、C反应蛋白、淋巴细胞计数和血小板计数为川崎病的独立危险因素。川崎病患儿列线图模型校正曲线和理想曲线没有明显偏离，川崎病患儿列线图模型ROC曲线分析显示，建模组和验证组的曲线下面积(AUC)分别为0.969和0.915。结论:本研究建立的川崎病患儿列线图模型校正曲线和理想曲线精准度较好，可为临床儿童川崎病的预测及临床诊断有积极影响。

目的:探索高氧对LPS刺激肺泡上皮细胞损伤的影响,以及铁死亡在高氧加重LPS刺激肺泡上皮细胞损伤中的作用及调控机制。方法:1.使用LPS和细胞高氧装置刺激A549构建脓毒症肺损伤(ALI)不同高氧治疗时间体外模型,A549分别予以LPS,LPS+O4h,LPS+O8h,LPS+O12h,O16h,LPS+O16h处理,通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18和IL-1β、铁死亡标志物ACSL4和GPX4的m RNA表达水平;使用Western Blot检测ACSL4和GPX4的蛋白表达情况。2.联合使用Ferrostatin-1(Fer-1),给予A549 LPS+O16h、LPS+O16h+Fer-1处理,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测GSH和MDA水平;采用荧光显微镜观察活性氧(ROS)生成情况;通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18Protein Gel Electrophoresis和IL-1β、铁死亡标志物ACSL4和GPX4的m RNA表达水平;采用Western Blot检测ACSL4和GPX4的蛋白表达情况。3.通过生信分析筛选得到脓毒症ALI时表达下调的铁死亡分子PEBP1,分别予A549 LPS、LPS+O16h、LPS+O16h+Fer-1处理,通过q RT-PCR和Western Blot检测PEBP1表达情况;4.转染PEBP1的si RNA至A549内,予A549 LPS+O16h、NC-LPS+O16h、si-PEBP1-LPS+O16h刺激,通过ELISA检测MDA和GSH水平;采用荧光显微镜观察ROS生成情况;通过q RT-PCR检测炎症细胞因子IL-18和IL-1β、铁死亡标志物ACSL4和GPX4的m RNA表达水平;使用Western Blot检测ACSL4和GPX4的蛋白表达情况。结果:1.与CON组相比,LPS组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平上调(P<0.01)。与LPS组相比,LPS+O4h组和LPS+O8h组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平下调(P<0.05),LPS+O12h组和LPS+O16h组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平上调(P<0.05)。2.与CON组相比,LPS+O16h组A549内GPX4的m RNA和蛋白表达水平、GSH水平下调,ACSL4的m RNA和蛋白表达水平、MDA水平上调(P<0.05)。与LPS+O16h组相比,LPS+O16h+Fer-1组A549炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平下降,GPX4的m RNA和蛋白表达水平、GSH水平上调,ACSL4的m RNA和蛋白表达水平、MDA水平下调(P<0.05)。荧光显微镜下见LPS+O16h组A549的ROS生成较CON组显著增多,LPS+O16h+Fer-1组ROS水平较LPS+O16h组显著减少。3.与CON组相比,LPS组A549内PEBP1的m RNA和蛋白表达水平均下调(P<0.05),LPS+O16h组A549内PEBP1的m RNA和蛋白表达水平均获悉更多上调(P<0.001)。与LPS+O16h组相比,LPS+O16h+Fer-1组A549内PEBP1的m RNA和蛋白表达水平均下调(P<0.001)。4.与NC-LPS+O16h组相比,si-PEBP1-LPS+O16h组A549内炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达水平下调(P<0.05),GPX4的m RNA和蛋白表达水平、GSH水平上调,ACSL4的m RNA和蛋白表达水平、MDA水平下调(P<0.05)。荧光显微镜下见si-PEBP1-LPS+O16h组A549的ROS较NCLPS+O16h组显著减少。结论:高氧通过铁死亡加重LPS刺激的肺泡上皮细胞损伤,沉默PPR-171体内实验剂量EBP1抑制铁死亡减轻高氧加重LPS刺激肺泡上皮细胞损伤。

目的:应用代谢组学技术筛选PCOS患者与正常人群血清差异代谢物及可能涉及的代谢通路,比较两组糖脂代谢、炎症因子、氧化应激因子与铁超载相关SF水平,基于PCOS患者代谢特征初步探讨铁超载在PCOS代谢障碍中的可能的发病机制及中药补肾化痰方的干预点。方法:选取2020年10月1日至2022年10月1日于南京中医药大学附属医院确诊为PCOS患者30例,另纳入正常健康女性30例作为对照组,(1)运用GC-MS方法检测血清样本,运用PCA、PLS-DA对样本进行信息比对分析,将数据集导入PASW Statistics18,进一步行相关性矩阵分析和热图筛选出PCOS组与正常组的差异代谢物及可能涉及的代谢通路。(2)通过放射免疫法测量血清中的FBG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、HDL和LDL 水平,ELISA 法检测血清中 IL-6、IL-1β、TNF-α、GPX4、MDA、SOD、Sintestinal dysbiosisF 的水平,进一步分析铁超载相关SF水平与代谢、炎症之间的相关性。(3)以补肾化痰方连续治疗痰湿证PCOS组患者6个月,比较其治疗前后的铁超载SF水平、氧化应激、糖脂代谢相关指标及炎症因子水平变化情况。结果:(1)在代谢组学方面,相较于正常健康女性,PCOS组女性的谷氨酸代谢、半胱氨酸代谢、尿素循环氨回收等通路发生明显改变,PCOS组女性的油酸、硬脂酸、棕榈酸、花生四烯酸含量显著升高,主要集中在多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)代谢产物,在其他方面,相较于正常健康女性,PCOS组女性BMI、WHR、LH、T、DHEAS、FAI、FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL、TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、SF水平较高,FSH、SHBG、SOD与GPX4水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),E2、FBG、HDL水平无明显差异(P>0.05)。(2)进一步分析SF与糖脂代谢指标、炎症指标相关性,发现SF与FINS、TC、TNF-α呈正相关,有统计学意义(P<0.05)。(3)予以补肾化痰方干预6个月后的痰湿证PCOS组BMI指数、WHR、LH、T、DHEAS、FAI、FBG、FINS、HOMA-IR、TC、LDL、TNF-α、IL-6、IL-1β 与 MDA 水平显著下降,HDL、SHBG、SOAdezmapimod纯度D与GPX4明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),TG水平无明显差异(P>0.05)。结论:(1)GC-MS技术证实PCOS的PUFA含Metabolism抑制剂量显著升高,可能进一步诱导铁超载。(2)补肾化痰方可有效改善痰湿证PCOS患者的中医症候、糖脂代谢紊乱、炎症,降低痰湿证PCOS患者铁超载相关SF水平,推测补肾化痰方可能通过减少PCOS患者的代谢中PUFA含量,调整PCOS患者代谢通路,减轻铁超载现象,从而改善PCOS患者的代谢障碍及炎症状态。

寄生虫通过多种复杂的机制来调节宿主免疫反应,确保其成功寄生并在宿主体内长期生存,其强大的免疫调节作用已使寄生虫感染治疗自身免疫性疾病成为可能。旋毛虫与其他寄生线虫的不同之处在于其不同发育时期(肠道期、移行期、肌肉期)均可在同一宿主体内寄生,且各发育时期在宿主体内存留时间有重叠。将旋毛虫感染性幼虫雌雄分离分别感染宿主,则无法交配产生新生幼虫,亦无法移行至肌肉形成包囊建立完整的生活史,此方法可使旋毛虫只保留肠道期感染阶段,在肠道内停留两周左右后可自行排出,避免对宿主造成实质性损伤和感染。同时,为了比较旋毛虫单一性别感染和混合性别感染的免疫调节效果,我们又采用了新生幼虫尾静脉注射的方法来排除新生幼虫对宿主造成的免疫调节作用。因此,本课题通过旋毛虫雌雄分离灌胃的方法和新生幼虫尾静脉注射的方法感染小鼠,研究旋毛虫不同发育时期及不同性别对宿主的免疫调节作用,为旋毛虫治疗自身免疫性疾病提供新思路。首先,我们通过盐磁力搅拌消化法和自然沉降法分离获得不同发育时期的旋毛虫,并通过灌胃和尾静脉注射的方法感染小鼠。单一性别感染模型以旋毛虫肌幼虫雌雄分离分别感染小鼠(100条/只),同时以空白(未感染组)和混合性别感染(自然感染,100条/只)为对照;新生幼虫感染模型以3000https://www.selleck.cn/products/ly2157299.html0/只新生幼虫尾静脉注射感染小鼠,并以空白(未感染组)和混合性别感染(自然感染,1LEE011分子量00条/只)为对照。结果显示,各不同发育时期旋毛虫均活力良好,雌虫、雄虫感染组小鼠在感染的35 d处死,膈肌压片镜检无肌幼虫包囊;新生幼虫尾静脉注射感染组在感染的28 d处死,收集的肌幼虫数量与自然感染无显著差异,结果表明:已成功获得可用于实验的不同发育时期及不同性别的虫体;且感染的小鼠均造模成功,可以用于后续研究。其次,通过Luminex技术和ELISA对造模小鼠血清细胞因子的表达水平进行检测。结果发现:雌虫感染组与雄虫感染组各细胞因子水平均无显著差异(其后统称为单一性别感染组);在肠道期早期,与空白对照比,混合性别感染组小鼠的Th1(IL-1β、IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ)、Thbiofuel cell2和Treg(IL-5、IL-10、TGF-β)血清含量显著升高,并且TGF-β血清含量升高最早。IL-2血清含量明显降低;与混合性别组相比,单一性别感染组小鼠在Th1(IL-1β、IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ)等细胞因子相对较低。总体上看,两组(混合性别感染组和单一性别感染组)免疫抑制型细胞因子处于持续升高,Th1型细胞因子先升高后降低(除IL-2),这说明无论肠道中只有成虫还是成虫和新生幼虫同时存在时,肠道期早期(感染前11 d)处于免疫抑制状态,混合性别感染组的免疫抑制更显著。肠道期后期(感染11～17 d),混合性别感染组小鼠10种细胞因子均升高,但在单一性别感染组没有观察到相同情况。在新生幼虫感染组中10种细胞因子含量均增加,且在模拟的对应时间点上(尾静脉注射感染后的1 d相当于混合性别感染后的5 d)与混合性别感染组相比,其变化情况基本一致。结果表明单一性别感染组与混合性别感染组细胞因子表达的差异是由于新生幼虫的存在导致的;单一性别虫体有较好的免疫调节作用。最后我们用旋毛虫雄虫感染炎症性肠病小鼠,发现旋毛虫雄虫感染不仅可以降低炎症性肠病小鼠的INF-γ表达水平和升高IL-4、IL-10、TGF-β的表达水平,还可以改善炎症性肠病小鼠结肠的免疫病理,这归因于旋毛虫感染上调了炎症性肠病小鼠的Th2(IL-4)和Treg(IL-10、TGF-β)细胞因子,一定程度上恢复了肠道稳态。总结:新生幼虫在移行期和入侵肌肉是会引起宿主较高的炎症反应。旋毛虫成虫(单一性别)对宿主的免疫调节能力较强,在一定程度上可以缓解炎症性肠病。

目的 分析血液炎性指标和非小细胞肺癌(NSCLC)患者生存状况的相关性。方法 选取黄骅市人民医院2018年7月～2019年2月收治的118例NSCLC患者作为研究对象，根据随访3年的生存情况，其中61例死亡为死亡组，其余57例为存活组。多因素logistic回归分析NSCLC患者死亡的危险因素，ROC曲线分析血小板与淋巴细胞比值(PLR)联合C反应蛋白(CRP)/白蛋白(Alb)对NSCLC患者死亡的预测效果。结果 死亡组肿瘤直径≥3 cm、术后无辅助治疗、PLR>269.BLZ945核磁85、全身免疫炎症指数>822.39、乳酸脱氢酶>255 U/L、纤维蛋白原>3.94 g/L、D-二聚体>1 513.19 ng/mL、CRP/Alb>7.0的比FUT-175溶解度例高于存活组，差异均有统计学意义(P<0.05)。以此为自变量，建立非条件logistic回归模型，结果显示，PLR>269.85、CRP/Alb>7.0为影响NSCLC患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。PLR联合CRP/Alb的ROC曲线下面积高于其他tethered spinal cord单项预测结果。结论 PLR、CRP/Alb均为NSCLC患者死亡的危险因素，且两者联合应用对NSCLC患者死亡有较佳的预测价值。

目的 探讨不同剂量替格瑞洛对老年急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗预后的影响。方法 选取2020年2月至2021年4月本院收治的老年急性心肌梗死患者90例，随机分为替格瑞洛低剂量组、替格hepatic haemangioma瑞洛常规剂量组，每组45例。两组患者行经皮冠状动脉介入治疗前均口服负荷剂量的阿司匹林肠溶片300 mg和替格瑞洛180 mg。治疗后口服阿司匹林肠溶片100 mg序贯此网站治疗，替格瑞洛低剂量组口服替格瑞洛60 mg,每日2次；替格瑞洛常规剂量组口服替格瑞洛90 mg,每日2次；两组均双抗治疗1年。分别于经皮冠状动脉介入治疗前、治疗1年后门诊随访时测定两组血小板最大聚集率、二磷酸腺苷抑制率、最大血凝块强度，记录随访1年期间两组不良心血管事件发生情况和出血事件发生情况。结果 治疗后，两组患者血小板最大聚集率、最大血凝块强度明显低于治疗前，二磷酸腺苷抑制率明显高于治疗前，差异均有统计学意义(均P<0.01)。治疗前后，血小板最大聚集率、二磷酸腺苷抑制率、最大血凝块强度在两组患者间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。心绞痛、血运重建、支架内血栓、心源性死亡发生率在两组患者之间比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。替格瑞洛常规剂量组患者PF-6463922配制随访期间出血事件发生率明显高于替格瑞洛低剂量组，差异有统计学意义(P<0.01);替格瑞洛常规剂量组患者随访期间小出血发生率明显高于替格瑞洛低剂量组，差异有统计学意义(P<0.05);随访期间大出血发生率在替格瑞洛低剂量组与替格瑞洛常规剂量组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 老年急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗后口服低剂量替格瑞洛能够有效抑制血小板聚集，效果与常规剂量无明显差异，同时能够降低出血事件发生率。

目的 探讨补阳还五汤减轻脑缺血再灌注损伤是否通过增强GPX4的表达抑Predisposición genética a la enfermedad制铁死亡的机制。方法 选取健康雄性SD大鼠48只，随机分为4组：假手术组（Sham组）、模型组（MCAO/R组）、补阳还五汤组（BYHWD组）、阳性对照药组（DFO组）。所有实验动物均建MCAO/R模型（假手术组仅剥离）。BYHWD组给予补阳还五汤灌胃处理，DFO组给予DFO腹腔注射处理，其余组予以生理盐水灌胃处理。再灌注72 h进行指标评定及取材。神经功能评分检测神经功能；TTC染色测定脑梗死面积；尼氏染色观察脑组织形态结构；生化试剂检测血清GSH、丙二醛（MDA）、脑组织铁含量；免疫荧光和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达。结果 与假手术组相比，模型组大鼠神经功能损伤明显，脑梗死体积增多，脑组织病理学损伤明显，尼氏体数量减少，脑组织铁含量、血清MDA含量明显增加，血清GSH含量、脑组织GPX4的蛋白表达显著降低（P<0.05）；与模型组相比，补阳还五汤组大鼠神经功能明显好转，脑梗死体积降低，脑组织病理学损伤LGX818使用方法减轻，脑组织铁含量selleck PD-0332991、血清MDA含量降低，血清GSH含量，脑组织GPX4的蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论 补阳还五汤抑制脑缺血再灌注损伤可能通过增强GPX4的表达抑制铁死亡而发挥作用。

研究目的:在4例CEBPA双突变AML患者中首次发现了重现性DPF2突变,其突变位点为PHD2结构域上的349位氨基酸由天冬氨酸突变为天冬酰胺(D349N)。本课题拟揭示DPF2突变在CEBPA双突变急性髓系白血病发病中的作用及机制。研究方法:建立D349N突变DPF2(DPF2D349N)及野生型DPF2(DPF2WT)表达载体,用荧光共定位研究突变对DPF在细胞内定位的影响,荧光共定位及免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)研究DPF2突变型蛋白与野生型蛋白相互结合的情况。用Co-IP研究突变对DPF2结合乙酰化组蛋白及组装形成SWI/SNF复合物能力的影响。构建表达DPF2WT、DPF2D349N及敲降DPF2白血病细胞系模型,检测DPF2突变对白血病细胞系增殖的影响。用荧光共定位和Co-IP研究DPF2与CEBPA的结合情况。构建DPF2和CEBPA共表达白血病细胞系模型,研究DPF2对表达CEBPA白血病细胞系增殖的影响,在分子和细胞水平阐明DPF2与CEBPA的相互作用。研究结果:通过荧光显微镜观察,我们发现与绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Proteins,GFP)融合表达的DPF2wt与Hoechst33342染色的细胞核位置重合,与红色荧光蛋白(Red Fluorescent Proteins,RFP)融合表达的 DPF2D349N也与Hoechst33342染色的细胞核位置重合,提示DPF2WT DPF2D349N均定位于细胞核。同时,我们发现DPF2D349N与DPF2WT荧光位置重合。进一步通过Co-IP证实DPF2WT可结合DPF2D349N。细胞经过组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠处理后,我们通过Co-IP发现野生型DPF2可以与乙酰化组蛋白相结合。与野生型DPF2相比,突变DPF2与乙酰化组蛋白的结合能力下降。SMARCC1是SWI/SNF复合物的重要亚基,通过Co-IP,我们发现DPF2D349N和DPF2WT都可以和SMARCC1相结合,且两者的结合能力没有明显差异。这些结果提示DPF2D349N可以与DPF2WT竞争结合形成SWI/SNF复合物,但DPF2D349N结合乙酰化组蛋白的能力下降,影响SWI/SNF 合物的功能,对DPF2WT具有负显性抑制作用。构建表达DPF2WT或DPF2D349N白血病细胞系模型,我们发现K562细胞中表达DPF2WT组72h 450nmOD值扩增初始的3.27倍,与vector组(3.13倍)相仿(P=0.426),表达DPF2D349N组扩增至初始的3.19倍,也与vector组相仿(P=0.725)。MOLM-13 细胞中,表达 DPF2WT组72h 450nmOD 值扩增至初始的 4.53倍,与vector组(4.88倍)相仿(P=0.077),表达DPF2D349N组扩增至初始的4确认细节.44倍,也与vector组相仿(P=0.083)。以上结果提示表达DPF2WT和DPF2D349N均不影响白血病细胞系增殖。构建DPF2敲降细胞系模型,发现K562细胞中短发夹RNA1敲降DPF2组(简写作DPF2sh1)72h selleck GSKJ4450nmOD值扩增至初始的2。66倍,明显低于scramble shRNA(简写作SCR)组(7.80倍)(P=0.018),短发夹RNA2敲降DPF2组(简写作DPF2sh2)扩增2.10倍,也明显低于SCR组(P=0.019)。MOLM-13细胞中,DPF2sh1组72h 450nmOD值扩增至初始0.74倍,明显低于SCR组(4.88倍)(P<0.001);sh2敲降组扩增0.73倍,也明显低于SCR组(P<0.001)。以上实验提示DPF2敲降减慢细胞增殖。构建DPF2敲降挽救K562细胞模型,发现DPF2WT+DPF2sh1组72h 450nmOD值扩增至初始的4.25倍,明显快于vector+DPF2sh1组(2.56倍)(P=0.002),DPF2D349N+DPF2sh1组扩增至 0.58 倍,明显慢于 vector+DPF2sh1组(P<0.001)。DPF2WT+DPF2sh2组在72h 450nmOD值扩增至初始的3.63倍,明显快于vector+DPF2sh1组(2.58 倍)(P=0.043),DPF2D349N+DPF2sh2 组扩增至 1.07 倍,明显慢于vector+DPF2sh1组(P=0.021)。以上结果提示DPF2WT可部分挽救DPF2敲降表型,DPF2D349N不仅无法挽救,还会进一步减慢细胞增殖。这些结果进一步证实DPF2D3Embryo toxicology49N负显性特征。通过荧光显微镜观察,我们发现与GFP相融合的DPF2和与RFP相融合的CEBPA荧光位置重合,即DPF2与CEBPA荧光定位重合。通过Co-IP发现DPF2WT和DPF2D349N均结合CEBPA。构建DPF2和CEBPA共表达白血病细胞系模型,我们发现,K562细胞中Dox诱导后,CEBPAWT+DPF2WT 72h 450nmOD值扩增至初始的2.32倍,与CEBPAWT+vector组(2.24倍)相仿(P=0.436),CEBPAWT+DPF2D349N组扩增至1.15倍,明显慢于 CEBPAWT+vector 组(P=0.006)。当 CEBPA 为突变型(CEBPAV314VW)时,CEBPAV314VW+DPF2WT组在72h 450nmOD值扩增至初始的3.92倍,与CEBPAV314VW+vector组(4.14倍)相仿(P=0.493),CEBPAV314VW+DPF2D349N组扩增至 2.64 倍,明显慢于 CEBPAV314VW+vector 组(P=0.002)。MOLM-13 细胞中Dox诱导后,CEBPAV314VW+DPF2wt组在72h 450nmOD值扩增至初始的4.25倍,与CEBPAV314VW+vectctor组(4.15倍)相仿(P=0.649),CEBPAV314VW+DPF2D349N组扩增至1.30倍,明显慢于CEBPAV314VW+vector组(P<0.001)。以上结果表明,表达DPF2D349N会减慢表达CEBPA的白血病细胞系的增殖,提示DPF2与CEBPA存在相互作用。研究结论:DPF2D349N为负显性突变,DPF2与CEBPA间存在相互作用,突变的DPF2通过其负显性作用可能参与了 CEBPA突变白血病的发生发展。研究目的:研究高三尖杉酯碱(homoharringonine,HHT)对CEBPA蛋白的影响及其机制,探讨HHT治疗CEBPA双突变急性髓系白血病的作用机制。研究方法:构建K562 CEBPA p30表达细胞系,用Wetern Blot法测定HHT、柔红霉素(DNR)、阿糖胞苷(Ara-C)处理前后K562 CEBPA p30表达细胞系以及U937、MOLM-13细胞系中外源和内源性CEBPA蛋白的表达量的变化,测定蛋白酶抑制剂和蛋白合成抑制剂对CEBPA蛋白表达量的影响。用转录组RNA-seq分析与柔红霉素处理相比,HHT处理后基因表达和通路富集的差异。研究结果:无论是U937和MOLM-13细胞系中的内源性CEBPA蛋白还是K562 CEBPA p30表达细胞系中的外源性CEBPA蛋白,HHT均可降低其表达量(P<0.05),而DNR和Ara-C无此效果。蛋白酶体抑制剂可增加CEBPA蛋白的表达量(P<0.05),蛋白合成抑制剂可减少CEBPA蛋白的表达量(P<0.05)。HHT处理上调了K562 CEBPAp30细胞的核糖体生成相关通路,DNR则不具有这种作用。研究结论:HHT可抑制CEBPA的合成,降低CEBPA蛋白的表达水平,这可能是HHT治疗CEBPA双突变AML的作用机制。