背景目前每年罹患心血管疾病的人数在逐年增加,心血管疾病(Cardiovascular disease,CVD)不仅仅增加社会的医疗负担,更是造成死亡的主要原因之一。在众多的心血管疾病中,心肌纤维化(Myocardial fibrosis,MF)是疾病发生发展中共同的过程,Lapatinib作用主要表现为细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的产生与降解的失衡,导致ECM过度积累。ECM大部分来自成纤维细胞,同时心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)的过度增殖和细胞外基质的过度蓄积将影响心脏功能,严重时导致心源性猝死。因此,心肌成纤维细胞是参与心肌纤维化的主要效应细胞。糖酵解是细胞能量代谢的主要调节方式,在非缺氧条件下也不利用氧化磷酸化产能,而是进行有氧糖酵解的现象,称为瓦伯格(Warburg)效应。糖代谢重编可以使肿瘤细胞能够快速获得能量供应,维持肿瘤细胞的增殖。此外,在缺氧时,缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)表达增加能促进纤维化相关蛋白的表达。但是在心肌纤维中,糖酵解是否也具有促进心肌成纤维细胞增殖的作用尚不清楚。雄激素受体(Androgen receptor,AR)是配体依赖性转录因子,AR的缺失会导致心脏生长的受损和纤维化的加剧,还可以调控包括糖酵解在内的多种代谢途径。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)是信使RNA(Messenger RNA,m RNA)最普遍的修饰方式,m6A修饰主要发生在腺嘌呤上,主要依赖于m6A相关酶体的催化调控。m6A甲基化修饰水平调控的紊乱会导致疾病发生,m6A甲基化修饰酶出现异常表达可以引起纤维化、炎性损伤等疾病。其中甲基转移酶3(Methyltransferase?like 3,METTL3)是复合酶体的关键蛋白,可以直接使m RNA甲基化。在生物学效应方面,METTL3可以参与细胞增殖、细胞周期和炎症等生物过程中。目的本研究将通过体内和体外实验探索糖酵解在心肌纤维化模型中的变化以及m6A甲基转移酶METTL3在小鼠心肌纤维化模型中的作用和机制,为改善心肌纤维化寻找新的治疗靶点。方法1.C57小鼠随机分为4组,分别为空白对照组,异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导组,慢病毒阴性对照组,慢病毒转染Chronic hepatitisLV3-METTL3组。2.超声心动图判断各组小鼠心功能的改变,并检测血浆中的乳酸含量和心脏样本中三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)的含量。3.Western blot和RT-q PCR检测纤维化和糖酵解相关分子标志物的表达。4.TGF-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)刺激心肌成纤维细胞构建细胞模型,Edu染色和CCK-8检测细胞的增殖活力。5.构建AR过表达载体的质粒和METTL3的si RNA,分别转染心肌成纤维细胞后,观察AR和METTL3的作用,并检测细胞功能。6.Dot Blot检测总体m6A在纤维化模型中的表达差异,Me RIP-q PCR检测AR的m RNA上m6A修饰位点结果1.糖酵解在ISO诱导的心肌纤维化模型中增加,同时伴随HIF-1α的增加。2.TGF-β1促进原代心肌成纤维细胞的糖酵解和增殖能力增强。3.心肌成纤维细胞的糖酵解和增殖能力受AR调selleck产品控。4.METTL3通过AR的m6A修饰影响心肌成纤维细胞的糖酵解和增殖能力。5.慢病毒沉默METTL3后,抑制ISO诱导的小鼠心肌纤维化的程度,减弱糖酵解,心功能得到部分恢复。结论METTL3在心肌纤维化模型中高表达,且参与心肌成纤维细胞的糖酵解和增殖的调控。雄激素受体AR在心肌纤维化模型中低表达,且受到METTL3介导的m6A修饰调控,影响心肌成纤维细胞的糖酵解和增殖,促进心肌纤维化的发展。