目的:探索使用脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)后肺纤维化,明确HMGB1是否通过调控TGF-β1/smads信号通路参与小鼠ALI后肺纤维化,为ALI后肺纤维化的早期诊治及探索新的治疗靶点提供新思路,为临床防治ARDS早期纤维化发生及改善ARDS预后提供新的理论依据。方法:C57BL/6小鼠雄性采用单纯随机抽样96只小鼠分为4组,分别为实验组(LPS组,L组)24只、对照组(PBS组,P组)24只、抑制剂(LPS+SB431542组,L-S组)组和抗体组(LPS+anti-HMGB1组,L-H组)24只。PBS组经气管注射PBS液10μL+30min后腹腔注射PBS液2m L;按气管滴入LPS构建ALI模型,LPS组经经气管注射LPS(5mg/kg)+30min后腹腔注射PBS液2m L;在LPS+SB431542组,小鼠经经气管注射LPS(5mg/kg)+30min后腹腔注射SB431542溶液(5mg/kg),LPS+anti-HMGB1组,小鼠经气管注射LPS(5mg/kg)+30min后腹腔注射anti-HMGB1抗体(2.5mg/kg);四组观察时间分别为1d、3d、7d和14d。观察小鼠肺大体情况;取肺组织计算W/D,取肺组织HE染色,Masson染色。小鼠肺组织羟脯氨酸Hyp含量测定。免疫组化检测肺组织HMGB1、TGF-β1、p-Smad3、α-SMA,ELISA检测血清HMGB1、KL-6、α-SMA含量。结果:1.肺组织大体形态:P组各时间点肺组织大体标本粉嫩,无水肿、瘀点、瘀斑、充血等表现,肺组织不同程度肿胀,部分可见局部充血、淤血甚至出血,以第1d、3d明显,第3d最重,7d、14d肺组织肿胀淤血程度有所减轻,14d肺组织可见肺叶缩小,表面凹凸不平,有大体肺纤维化表现。L-H组在各个时间节点,大体的肿胀、淤血、瘀斑及纤维化表现均有减轻。L-S组第1d、3d时间点肺肿胀淤血程度与L组相比较为接近,但第14d肺大体纤维化程度明显减轻。2.肺组织湿/干重(W/D)比值:P组小鼠各时间点肺组织W/D值并无明显统计学差异。L组各时间点相比P组明显升高,从第1d开始升高,第3d达高峰,随后第7d、14d开始下降,差异有统计学意义(P<0.05)。L-S组各时间点对比L组无显著差异,差异无统计学意义(P>0.05)。L-H组各时间点对比L组、L-S组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.肺组织HE染色:P组肺泡结构完整,肺泡腔、间质无明显炎症细胞及液体渗出,而且各时间点无明显差异。各时间点L组有不同程度肺泡间隔增厚、断裂,肺泡腔及间质不同程度液体渗出及炎症细胞浸润,且随时间延长逐渐加重,3d最明显,7、14d炎症逐渐减轻,但是随着时间推移,各级肺泡、支气管壁间质出现弥漫性纤维增生,第14 d较为显著。L-H组各时间点较L组相应时间点的肺损伤病理改变有所减轻,14d的纤维增生程度明显少于L组。L-S组各级时间点肺泡、间质炎症及液体渗出情况与L组接近,但第14d各级肺泡、支气管壁间质出现弥漫性纤维增生程度较Navitoclax抑制剂L组减轻。4.肺组织MASSON染色:P组各个时间点差异不大,肺泡间隔只有少许染成浅绿色的胶原纤维分布,支气管壁胶原层较薄。L组肺组织从第1 d可见肺泡间隔组织浅绿染色现象增多,并且随着时间推移,肺泡间隔增宽,在支气管壁、肺泡间隔和血管壁周均可见染成浅绿色的胶原纤维,浅绿色胶原沉积逐渐增多,第14d最明显,且各级支气管壁有局部弥漫性纤维增生及纤维化形成。L-H组、L-S组与同时间点的LPS组相比较,各个时间点肺组织胶原沉积和纤维增生均有不同程度减轻。5.肺组织免疫组化:1.HMGB1免疫组化染色中L组各时间点相比P组在支气管壁、肺泡间隔和血管壁周可见黄棕色颗粒明显增多,其中第3d最明显。L-S组相较于L组各时间点支气管壁、肺泡间隔和血管壁周的黄棕色颗粒无显著差异。L-H组相较于L组及L-S组各时间点HMGB1的表达程度均有下降。2.Α-SMA免疫组化染色中L组支气管壁、肺泡间隔和血管壁周的棕黄色颗粒均较同时间点的P组有明显增多,从1d到14d呈现递增式增长,第14 d各semen microbiome级支气管壁、肺泡间隔和血管壁周的棕黄色颗粒明显增多,并且有局部弥漫纤维增生、纤维化改变,说明有大量肺成纤维细胞形成。L-H组、L-S组与同时间点的LPS组相比较,在各个时间点肺组织α-SMA表达水平均有下降。3.p-Smad3免疫组化染色中L组各时间点小鼠肺组织支气管壁以及肺泡间质细胞开始出现棕黄色沉积,其中第3、7d较为明显,相比同时间点P组明显增多。L-H组、L-S组与同时间点的L组对比,肺组织支气管壁以及肺泡间质细胞的磷酸化Smad3蛋白表达水平有下降4.TGF-β1免疫组化染色中L组对比P组在各时间点小鼠肺组织各级肺泡、支气管壁的间质组织细胞内可见有明显棕黄色沉淀形成,3-7d到达高峰。L-S组各时间点产生的TGF-β1和L组无明显差异。L-H组与同时间点的LPS组、L-S组相比较TGF-β1表达水平均有一定程度下降。6.ELISAselleckchem Wnt-C59检测:1.各组小鼠血清HMGB1表达中发现L组各时间点HMGB1蛋白表达较P组相应时间点有统计学意义升高。L-S组相较于L组无统计学差异。L-H组较L组、L-S组相应同时间点有不同程度降低。2.各组小鼠血清α-SMA表达中发现L组各时间点α-SMA蛋白表达较P组显著升高。L-H、L-S组各时间点α-SMA表达较L组明显降低。3.各组小鼠血清KL-6表达中发现L组各时间点KL-6蛋白表达较P组相应时间点升高,随着时间发展差异更加显著,其中14d最高,有统计学差异。L-H组、L-S组各时间点较LPS组相应时间点低,有统计学差异。结论:1.HMGB1通过调控TGF-β1/smads信号通路参与小鼠ALI后肺纤维化。2.Anti-HMGB1抗体和SB431542抑制剂对LPS诱导的小鼠ALI后肺纤维化具有保护作用。