手术切除是乳腺癌的主要治疗方法。然而,肿瘤切除后残留的肿瘤细胞和高度免疫抑制的肿瘤微环境(TME)对肿瘤复发和转移有显著影响。术后原位植入载药系统因其可以在手术后方便地使用,是一种很有前途的治疗方法。其中,水凝胶由于其均匀的3D多孔网络结构和原位形成后的非凡封装能力而显示出巨大的药物递送潜力,并且化疗药物、各种免疫治疗剂和纳米粒都可以装载到水凝胶中。化学动力学疗法(CDT)是一种新兴的治疗方法,通过将过氧化氢(H2O2)转化为毒性的羟基自由基(·OH)来杀死肿瘤细胞。此外,CDT还可以与化疗药物如阿霉素(DOX)协同显示出增强的抗肿瘤效果,因为DOX不仅可以直接杀死肿瘤细胞,还可以通过诱导免疫原性细胞死亡(ICD)产selleck NMR生抗肿瘤的免疫应答。除了残留的肿瘤细胞,术后免疫抑制性TME也是导致肿瘤复发和转移的另一个重要因素。因此,本论文设计了一种可注射的两性离子水凝胶系统,用于术后残留肿瘤细胞的杀伤以及免疫抑制TME的重塑,具有抑制肿瘤复发的效果。本论文的主要研究内容如下:(1)合成了具有化疗与CDT联合杀伤肿瘤效果的载药纳米粒,并对其进行了理化性质的表征与体外细胞生物学研究通过在碱性条件下H2O2和Cu2+的配位,并PF-02341066分子式同时加入DOX,制备了装载DOX的过氧化铜纳米粒(CuO2/DOX)。为了提高肿瘤细胞的靶向性,将巨噬细胞膜涂覆在纳米粒的表面制备具有肿瘤靶向功能的包膜纳米粒(M/CuO2/DOX)。使用马尔文粒径仪、透射电子显微镜(TEM)以及X射线光电子能谱(XPS)对M/CuO2/DOX的理化性质进行表征。选择4T1细胞为模型细胞,对M/CuO2/DOX的摄取、细胞毒性和诱导ICD的能力进行验证。结果表明,M/CuO2/DOX具有良好的肿瘤细胞积累以及诱导细胞凋亡和ICD的能力。(2)合成了具有抗蛋白质吸附和降解性能的两性离子水凝胶并对其理化性质进行表征甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)通过自由基聚合得到甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱聚合物(PSBMA)。PSBMA可以在生理盐水中通过静电作用自组装形成水凝胶(PSBMA水凝胶)。通过核磁共振氢谱(1H-NMR)和红外光谱(FT-IR)验证其成功合成。通过扫描电子显微镜(SEM)观察其内部为多孔的结构。选择牛血清白蛋白(BSA)以及4T1细胞作为模型蛋白和细胞,证明了其良好的抗蛋白吸附和抗细胞粘附性能。通过溶血实验和细integrated bio-behavioral surveillance胞毒性实验验证了其具有良好的生物相容性。(3)合成了包载M/CuO2/DOX与干扰素基因刺激因子(STING)激动剂2′,3′-cGAMP 的 PSBMA 水凝胶(Gel@M/CuO2/DOX/STING),并对其理化性质进行表征将M/CuO2/DOX与STING激动剂2′,3′-cGAMP一起装载到PSBMA水凝胶中得到Gel@M/CuO2/DOX/STING。使用流变仪测定了水凝胶的流变行为。体外降解和药物释放结果表明,水凝胶可以在生理盐水中逐渐降解并释放药物。(4)Gel@M/CuO2/DOX/STING用于术后肿瘤治疗的研究将水凝胶植入手术切除肿瘤后的空腔内。水凝胶可以在生理条件下逐渐降解并释放M/CuO2/DOX和2′,3′-cGAMP。M/CuO2/DOX可被肿瘤细胞选择性摄取,杀死肿瘤细胞并诱导ICD。2′,3′-cGAMP激活STING途径并上调与干扰素(IFN)信号相关的基因,重塑免疫抑制性TME。在小鼠4T1肿瘤术后切除模型中,Gel@M/CuO2/DOX/STING既可以杀死残留的肿瘤细胞,又能促进树突状细胞(DCs)的成熟,增强肿瘤特异性CD8+T细胞浸润,并最终有效预防术后复发和转移。
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基于Logistic回归模型分析某医院眼科563例年龄>60岁白内障患者术中IFIS风险的相关影响因素
目的 对平顶山市第二人民医院宝丰分院眼科563例年龄>60岁白内障患者术中虹selleckchem Pidnarulex膜松弛综合征(IFIS)发生情况进行调查,构建logistic回归模型进一步分析IFIS发生的影响因素。方法 前瞻性选取2020年4月至2022年6月来平顶山市第二人民医院宝丰分院拟行白内障超声乳化吸出术老年患者563例作为研究对象,统计其服药史、散瞳前后瞳孔直径及IFIS发生情况,并采用Logistic回归方程分析IFIS的影响因素。结果 563例老年白内障患者术中发生IFIS 46例,发生率为8.17%(46/563)。其中轻度15例、中度25例,6例重度。两组年龄、α-1受体拮抗剂应用史、FPG、HbA1c、散瞳直径、抗精神病药物应用史、苯二氮卓类药物应用史比较,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄(■=2.919)、α-1受体拮抗剂应用史(■=4.232)、空腹血糖(FPG)(■=1.405)、糖化血红蛋白(HbA1c)(■=3.038)、散瞳直径(■=0.456)、抗精神VE-822价格病药物应用史(=2.553Biomass conversion)、苯二氮卓类药物应用史(■=2.807)是白内障患者IFIS影响因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 白内障患者术中IFIS发生受年龄、α-1受体拮抗剂应用史、FPG、HbA1c、散瞳直径、抗精神病药物应用史、苯二氮卓类药物应用史等因素影响,建议临床根据上述影响因素,针对患者制定预防性措施,以有效改善预后。
食管癌复合危险因素及代谢标志物探索
目的:(1)基于林县一般人群营养干预实验30年随访数据,描述林县一般人群营养干预人群主要疾病的死亡情况及变化趋势,分析影响Western Blotting食管癌死亡的因素,为食管癌的一级预防提供参考。(2)基于队列人群血液标本,寻找食管癌代谢肿瘤标志物,并联合食管癌危险因素探索这些标志物在食管癌发病预测方面的能力。方法:纳入林县一般人群营养干预实验队列基线数据(包括人口学信息、生活方式信息、家族史信息)和30年随访数据,使用logistic模型分析影响食管癌死亡的影响因素。食管代谢组学的研究使用队列1999-2000年采集的血液标本,在队列中随机抽取200例2000年后发病的食管癌患者,经性别年龄匹配得到200例健康对照,使用液相色谱-质谱分析组间差异化合物,使用logistic模型筛选得到肿瘤标志物组合,进一步进行危险因素-标志物联合分析。结果:食管癌是林县居民主要的恶性肿瘤,队列人群的死亡率波动趋势与食管癌波动趋势类似,分组分析显示男性食管癌死亡率远远大于女性(男性531.24/10万,女性380.28/10万),高年龄组食管癌死亡率远远大于低年龄组(高年龄组730.82/10万,低年龄组347.43/10万)。年龄增加、男性、体重超重、吸烟和具有上消化道肿瘤家族史是食管癌的危险因素,而增加新鲜蔬菜水果、肉蛋类食物的摄入、提升个体教育水平、居住在山地地区是食管癌的保护因素。溶血磷脂酰胆碱18_0、胆碱、磷脂酰胆碱38_5、十二三烯酰肉碱是本研究发现的食管癌代谢标志物组合,三者组成的预测模型AUC=0.787,灵敏度约为0.68,特异度约为0.78。结论:本研究中,吸烟和超重被认为是对食管癌死亡影Cobimetinib分子式响最为重要的两个可改变危险因素,进行健康宣教可以从一级预防方面进行人群的食管癌预防。食管癌肿瘤标志物组合的研究在食管癌的早期诊断和筛查方面有广泛的应用前景,为研究低成本无创筛查提www.selleck.cn/products/Trichostatin-A供了思路,为食管癌的二级预防提供了证据,具有重要的公共卫生意义。
荔枝霜疫霉YinYang1同源基因g1902的敲除与功能分析
荔枝霜疫霉是荔枝霜疫病的致病菌,隶属于卵菌门。荔枝霜疫病通常造成大量烂果、落果,严重阻碍荔枝产业的发展。YinYang1 (YY1),是一种进化上保守的Cys2/His2(C_2H_2)锌指转录因子,且普遍表达,已被证明在不同的遗传背景下可以激活、抑制和启动转录活性。为明确荔枝霜疫霉中YY1同源基因g1902的功能,利用CRISPR/Probiotic productCas9技术与PEG介导的原生质体遗传转化手段对g1902基因进行敲除和功能分Wnt-C59纯度析,结果显示:①与野生型菌株相比,g1902基因突变体的菌丝生长速率下降62.3MK-1775体内3%;孢子囊产量与释放率显著下降,其中,孢子囊产量减少了78.49%,而释放率在0.5 h、1h和2 h时的仅为31.37%、41.57%和50.21%,但野生型的释放率分别为66.13%、74.72%和81.82%;致病性也显著下降。②与野生型菌株相比,g1902基因突变体卵孢子产量无显著性差异。研究结果表明g1902基因参与了荔枝霜疫霉的营养生长、孢子囊形成、孢子囊释放和致病性,但对卵孢子的形成无影响。
羊口疮病毒114蛋白的优势抗原表位预测及ORFV多表位疫苗的构建
为了探究羊口疮病毒114蛋白作为羊口疮病毒Secretase抑制剂多表位疫苗靶标的可能性,试验利用在线软件ABCpred预测114蛋白的优势B细胞表位,利用在线软件IEDB的MHC-Ⅰbinding server预测114蛋白的优势细胞毒性T细胞(CTL)表位;利用IEDB的MHC-Ⅱbinding server预测114蛋白的优势辅助性T细胞(HTL)表位;使用柔性短肽接头连接114蛋白的优势B、T细胞抗原表位,构建羊口疮病毒多表位疫苗。结果:羊口疮病毒114蛋白由346个氨基酸组成,包含12个优势B细胞抗原表位,分别位于292~307 aa、264~279 aa、146~161 aa、331~346 aa、113~128 aa、298~313 aa、35~50 aa、324~339 aa、281~296 aa、1PF-02341066 IC5062~177 aa、315~330 aa、204~219 aa;包含1个优势CTL抗原表位,位于65~73 aa;包含5个优piezoelectric biomaterials势HTL抗原表位,分别位于69~83 aa、68~82 aa、70~84 aa、48~62 aa、284~298 aa;构建了基于114蛋白的优势抗原表位的羊口疮病毒多表位疫苗。结论:羊口疮病毒114蛋白包含多个优势B细胞和T细胞抗原表位,可作为羊口疮病毒多表位疫苗的候选靶标,具有诱导强烈体液免疫与细胞免疫反应的可能性。
hnRNP L/LL-SETD2互作介导mRNA共转录可变剪接暨ZBTB10锌指识别端粒DNA的结构生物学研究
Pre-mRNA的可变剪接大大提高了有限基因编码序列产生的蛋白质组的复杂性。可变剪接过程的失调与生物发育、肿瘤发生和衰老等过程密切相关。可变剪接主要受RNA结合蛋白质(RBP)调控。异质核糖核蛋白hnRNPL及其同源蛋白质hnRNP LL,通过其四个保守的RRM结构域识别内含子或外显子序列上的CA富集区域调控可变剪接的发生,进而影响生物发育、肿瘤发生等过程。但是,hnRNP L/LL如何与转录机器耦联,进而实行共转录可变剪接调控的分子机制仍然未明。最近hnRNP L被报道通过其第二个RRM结构域(RRM2)与H3K36甲基转移酶SETD2上的一段保守区域(命名为SETD2_SHI)相互作用,表明hnRNP L-SETD2可能与共转录剪接的耦联相关。本研究进一步分析了hnRNPL与SETD2_SHI互作的分子机制。首先,本研究通过等温滴定量热(ITC)实验发现hnRNP L与SETD2_SHI内的一段高度保守的肽段特异互作,并解析了 hnRNP L_RRM2与SETD2_SHI肽段的复合物结构,结构表明SETD2高度保守区段内的一对亮氨酸将其侧链分别插入hnRNP L RRM2表面形成的两个疏水口袋中。其CP-690550次,本研究结合质谱、体内实验和ITC实验表明hnRNP L的同源蛋白质hnRNP LL_RRM2在体内、体外均与SETD2_SHI结合,并解析了hnRNP LL_RRM2与SETD2_SHI截短的核心保守肽段的复合物晶体结构。通过比较分析两个复合物的结构,鉴定出介导二者相互作用的关键残基,并结合ITC实验验证了这些残基的重要性。SETD2中的亮氨酸对突变还会导致其与包括hnRNPs在内的其他pre-mRNA剪接相关蛋白质的相互作用减少。另外,通过回补hnRNP LL质粒消除了基因tip1和bptf在hnRNP L敲除时出现的外显子比例增高的现象,证明了 hnRNPL/LL在功能上存在一定的冗余性。综上所述,本研究解析的hnRNP L/LL-SETD2的复合物结构为理解共转录剪接耦联的分子机制提供了一定的理论基础。端粒功能失常是导致衰老和癌症的重要原因。最近的研究发现BTB-ZF锌指蛋白质家族成员ZBTB10,可以与端粒DNA变体重复序列TTGGGG特异性结合。端粒变体重复序列存在于亚端粒和使用替代延伸机制(ALT)的端粒中。ZBTB10通过串联C2H2锌指(ZF1-2)与双链端粒变体重复序列TTGGGG特异结合。本研究解析了 ZBTB10 ZF1-2与双链DNA序列TTGGGG的复合Fungal microbiome物晶体结构并通过ITC实验确定了 ZBTB10 ZF1-2识别TTGGGG的关键氨基酸残基,由此阐明了 ZBTB10 ZF1-2特异性识别TTGGGG的分子机制。本研究进一步改造了 ZBTB10 ZF1-2,将Arg767突变成了 Gln(Arg767Gln),使得其偏好结合端粒DNA重复序列TTAGGG,并且成功解析了 ZBTB10 ZF1-2 Arg767Gln-端粒DNA的复合物晶体结构。通过比较TZAP-端粒DNA等复合物结构,表明C2H2锌指蛋白质可以通过R..H..R(.代表任意氨基酸)基序特异识别GGG核苷酸三联体。此外,还发现基因组编码大量包含R..H..R基序的C2H2锌指,表明基因组内存在更多的端粒DNA结合蛋白质。综上所述Dolutegravir说明书,本研究阐述了 C2H2锌指识别端粒DNA的主要特征,为进一步发现新的端粒DNA结合蛋白质和探索它们的生物学功能奠定了理论基础。近些年的研究表明,衰老的速度在一定程度上由进化中保守的遗传途径和生化过程控制,例如RNA可变剪接、端粒缩短和表观遗传修饰改变等,因此,本文的两部分内容在一定程度上与衰老的生理过程相关,对这两个潜在与衰老相关的生物大分子互作机制的研究将会对理解衰老的发生提供一定的结构基础。
血液病合并念珠菌血症病原学特征与预后影响因素分析
目的:探讨Cell Analysis血液病合并念珠菌血症的病原学特征及预后,为临床诊治提供依据。方法:回顾性收集80例血液病合并念珠菌血症患者的临床资料,分析其病原学特征,并对患者确诊后30 d内死亡的危险因素进行分析。结果:80例血液病合并念珠菌血症病原学分析发现以热带念珠菌(68.8%)为主,其次为近平滑念珠菌、光滑念珠菌、白色念珠菌。药敏试验显示念珠菌对伏立康唑、氟康唑、伊曲康selleck合成唑的耐药率分别是43.8%、46.3%、52.5%。Logistic回归分析结果显示原发病未缓解、感染性休克、多器官功能障碍综合征(MODS)是血液病合并念珠菌血症患者30 d内死亡的危险因素[OR(95%CI)为7.706(1.RSL3803~32.940)、10.211(1.071~97.379)和8.621(1.535~48.420)]。结论:血液病合并念珠菌血症死亡率高,以热带念珠菌感染为主,唑类药物耐药严重。原发病未缓解、感染性休克、MODS是患者死亡的危险因素。
烟草NtGBSS2、4和NtPTST4基因在叶片淀粉合成中的作用研究
烟草(Nicotiana tabacum L.)是我国重要的以叶为收获产品的非粮食经济作物,烟叶成熟时淀粉积累可达40%。叶片中的淀粉合成涉及多种酶的协调作用。首先是ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)催化葡萄糖-1-磷酸(Glc-1P)生成的腺苷二磷酸葡萄糖(ADPG)作为合成淀粉的底物。然后由不同的淀粉合酶(SSs)催化ADP-葡萄糖的葡萄糖单元转移到葡聚糖链上形成α-1,4键。淀粉合酶大致可分为两大类,一类是合成直链淀粉的颗粒结合淀粉合酶(Granule-bound Starch Synthase,GBSS),另一类是含多个亚型的可溶性SSs参与支链淀粉的合成。淀粉分支酶(SBE)将可溶性SSs合成的葡聚糖短链通过α-1,6糖苷键连接到长链上,从而共同生成支链淀粉。而近年报道的蛋白质靶向淀粉(Protein Targeting to Starch,PTST),也参与直链淀粉的合成。PTST不仅能够帮助拟南芥中的GBSS定位到淀粉颗粒上,对大麦胚乳中的淀粉合成也至关重要。同时其同源基因也对拟南芥中淀粉颗粒的起始、数量及大小起决定性作用。淀粉的组成、直链淀粉与支链淀粉的比例、淀粉颗粒里的大小等都会影响淀粉降解率,而淀粉含量是影响烘烤特性的重要因素之一,淀粉是否充分降解及其水解后的糖类物质都会影响烟叶色泽、香气、吃味。除烟草中NtAGPase及NtGBSS1的过表达会使淀粉含量积累外,关于烟叶中的淀粉合成及调控并无其他过多报道。而GBSS、PTST这两个基因除了与直链淀粉合成相关,对淀粉颗粒大小及结构也有一定影响,这有可能会影响烟叶的品质。因此本研究以烟草红花大金元作为研究对象,筛选直链淀粉合成基因Granule Bound Starch Synthase(GBSS)和Protein Targeting to Starch(PTST),通过基因工程手段敲除NtGBSS和NtPTST,获得了相应的突变植株,对其淀粉含量、淀粉颗粒及与相关糖类物质进行了检测,探究了相关基因在烟叶淀粉合成中的作用。以下是本文的研究结果:1.NtGBSS、NtPTST基因的鉴定及表达特征分析为了鉴定烟草中直链淀粉合成基因,我们首先以已有文献报道的颗粒结合淀粉合酶和蛋白质靶向淀粉的氨基酸序列为查询种子序列,在烟草全基因组序列中比对,筛选出颗粒结合淀粉合酶和蛋白质靶向淀粉候选基因。基于序列相似性及功能域分析结果,我们在烟草红花大金元品种中共鉴定获得8个NtGBSS候选基因(NtGBSS1~NtGBSS8)及7个NtPTST候选基因(NtPTST1~NtPTST7)。对于NtGBSS基因家族而言,与其他物种构建进化树结果表明,NtGBSS基因与拟南芥、番茄及土豆的GBSSⅠ具有高度同源性。通过多序列比对发现NtGBSS基因含有多个GBSS功能结构的保守氨基酸位点:包括糖基转移酶5的ATP结合位点K(赖氨酸),G(甘氨酸),I(异亮氨酸),R(精氨酸),F(苯丙氨酸),A(丙氨酸),E(谷氨酸),以及具有GTB拓扑结构的糖基转移酶家族1的S(丝氨酸),V(缬氨酸),D(天冬氨酸)位点,这些活性位点主要发挥糖基转移酶功能。基因结构分析结果显示NtGBSS基因都含有多个外显子,在16~30之间,而且位于同一分支的基因其结构相似。组织表达谱分析表明除NtGBSS3在种子中不表达外,其他基因在各个组织中都表达,NtGBSS1、NtGBSS3、NtGBSS4、NtGBSS5在叶片中大量表达,NtGBSS6、NtGBSS7、NtGBSS8在种子和根中大量表达,NtGBSS2在种子中表达量最高。对于NtPTST基因而言,进化树结果表明,烟草NtPTST基因与拟南芥、番茄等植物对应基因具有较高的同源性。NtPTST4、NtPTST5与拟南芥的At PTST2进化关系较近。多序列比对发现其含有多个保守氨基酸位点:主要为N末端的AMP活化蛋白激酶结构域位点W(色氨酸),K(赖氨酸)购买GSI-IX,G(甘氨酸),N(天冬酰胺),这些活性位点是糖原结合位点,参与结合淀粉的过程。组织表达谱分析表明NtPTST1~NtPTST7在各个组织中都表达,其中NtPTST1、NtPTST3、NtPTST6、NtPTST7在种子和根中大量表达,NtPTST2在根中大量表达,NtPTST4在叶片中表达量最高,NtPTST5在茎中表达量相对较高。结合序列及表达特征分析结果,NtGBSS2、NtGBSS4及NtPTST4可能在烟草叶片直链淀粉的合成过程发挥着重要作用。2.NtGBSS、NtPTST的敲除植株制备通过PCR扩增,获得了NtGBSS2、NtGBSS4与NtPTST4这三个基因的完整CDS序列,然后通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建敲除载体,利用农杆菌介导的遗传转化获得了三个基因的突变株且均已获得纯合植株。对NtGBSS2、NtGBSS4及NtPTST4所得突变植株检测发现,突变形式以删除和插入为主。对突变后的基因编码的氨基酸序列进行了分析,结果表明NtGBSS2,NtGBSS4中缺失3的倍数碱基的突变类型的基因编码的氨基酸序列部分缺失。而其余突变形式都造成了NtGBSS2、NtGBSS4及NtPTST4这三个基因翻译的提前终止,且终止子的插入位于功能结构域之前。3.NtGBSS、NtPTST敲除烟草株系的相关性状指标检测选取旺长时期的突变体植株进行表型观察与相关物质含量检测。与野生型对照相比,NtGBSS、NtPTST敲除烟草的生长发育并没有受到影响。颗粒结合淀粉合酶(GBSS)活性检测发现,NtGBSS2-8的杂合植株酶活性显著降低56.79%,NtGBSS2的其余2株杂合植株和1株纯合植株的酶活性降低但差异不显著;NtGBSS4的2株杂合植株Nt点击此处GBSS4-3、NtGBSS4-10酶活性显著降低,分别降低了51.86%、49.47%,NtGBSS4-9的纯合植株酶活性显著降低,减少了55.12%,NtGBSS4-6与野生型比较没有显著差异。而NtPTST4的突变植株的颗粒结合淀粉合酶活性均降低但差异不显著,这可能是由于PTST基因是介导GBSS基因靶向淀粉,其发生编辑并不直接影响GBSS酶活性。直链淀粉含量检测显示,NtGBSS2的4株突变株的直链淀粉含量都显著下降,分别降低了约28.3%、50%、50%和30%,且NtGBSS2-6、NtGBSS2-8、NtGBSS2-9呈极显著降低;NtGBSS4的4株突变株直链淀粉含量分别显著下降50previous HBV infection%、30%、40%、38%;NtPTST4突变株中无论是纯合体还是嵌合体植株,它们的直链淀粉都极显著降低,下降率在26.6%-58%之间。三个基因突变株直链淀粉含量显著或极显著下降,其下降率与不同基因的编辑形式和编辑效率相关。而突变体植株的支链淀粉含量在不同突变株中呈现升高或不变的趋势,NtGBSS2-5、NtGBSS2-9,NtGBSS4的4株突变植株和NtPTST4-4、NtPTST4-6、NtPTST4-8的支链淀粉显著升高外,其他突变株无显著差异。与野生型对比,NtGBSS2-5、NtGBSS2-6、NtGBSS2-8、NtGBSS2-9的敲除植株的总淀粉含量都显著降低,分别降低了24.43%、35.45%、47.86%、27.04%;NtPTST4敲除植株的总淀粉含量显著降低,减少量分别为33.97%、30.9%、19.04%、29.02%、12.21%、27.9%、26.17%;而NtGBSS4突变株总淀粉含量与野生型差异不显著,我们猜测这可能与直链和支链淀粉改变的比例有关,但其中具体的关系还需后续进一步研究。纯化叶片中的淀粉颗粒并用扫描电镜观察发现,NtGBSS2、NtPTST4突变植株的淀粉颗粒大小具有显著差异,作为对照的两株野生型淀粉颗粒大小都在3μm以下,其中小于1μm的分别占7.25%和10.6%,1-2μm之间占比最多,分别占81.16%和76.52%,剩余11.59%和12.88%在2-3μm之间。与之相比,NtGBSS2突变株中淀粉颗粒显著增大,4株突变株仅有2.46%-4.46%的淀粉颗粒小于1μm;大部分在2-3μm之间,不同突变株中占41.98%-55.22%;部分颗粒直径3-4μm,占7%-18.6%;而在NtGBSS2-5、NtGBSS2-6、NtGBSS2-8的突变株中其淀粉颗粒有超过1.23%的粒径大于4μm。NtPTST4突变株淀粉颗粒的粒径大小极显著增加。除NtPTST4-8以外,其余突变株小于1μm的淀粉颗粒处于0.8%-6.6%之间;大部分淀粉颗粒大小在2-3μm之间,占比达33.97%以上;所有突变株中有超过3.87%的淀粉颗粒大小大于3μm,而NtPTST4-3、NtPTST4-4、NtPTST4-5、NtPTST4-7突变株大于3μm的淀粉颗粒数超过10%。突变植株大颗粒淀粉数量占比要显著大于野生型,且淀粉颗粒更为圆润,而NtGBSS4突变植株的淀粉颗粒大小、结构与野生型差异不显著,NtGBSS4的淀粉颗粒整体上与野生型相似,1-2μm之间占比最多,占65.91%-74.38%;4株突变株小于1μm的淀粉颗粒占比要多于野生型,有6.82%-25.93%;其中NtGBSS4-6、NtGBSS4-9、NtGBSS4-10分别有0.62%、0.75%、2.27%的淀粉颗粒大小超过3μm。对影响烟叶品质糖类物质进行了测定发现,NtGBSS2、NtGBSS4及NtPTST4的突变植株还原糖、葡萄糖含量显著升高,更有利于其与氨基化合物发生Maillard反应。综上所述,本研究通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了NtGBSS2、NtGBSS4和NtPTST4基因的突变体植株。实验结果表明NtGBSS、NtPTST参与烟草叶片中的直链淀粉合成,并对改变淀粉颗粒的大小和结构有一定作用,且能影响叶片中还原糖、葡萄糖的含量。研究工作为全面了解茄科植物淀粉的合成及调控机制奠定了基础,也为通过基因工程手段提升烟叶品质提供了新的视角。
质子泵抑制剂联合铝镁加混悬液治疗胃内镜黏膜下剥离术术后溃疡的临床价值
目的:探讨质子泵抑制(PPI)联合铝镁加混悬液治疗胃内镜黏膜下剥离术(ESD)术后溃疡的临床价值MK-2206采购。方法:纳入我院消化科在2019年1月—2020年12月期间收治的60例ESD术后溃疡患者作为观察对象,按便利抽样法分为C组和O组,C组给予艾司奥美拉唑,O组在C组基础上增加铝镁加混悬液。对比两组的治愈率、胃蛋白酶原(PG)水平、术后不同时Gut dysbiosis间点的溃疡面积、延迟性出血情况。结果:治疗8周后,O组的治愈率高于C组(P<0.05),两组延迟性出血发生率对比无显著差异(P>0.05)。术后4周、8周,两组间的PGⅠ、PGⅡ、胃蛋白酶原比值(PGR)水平对比无显著差异(P>0.05),O组的溃疡面积均小于C组(P<0.05)。结论:PPI联合铝镁加混悬液可提高ESD术后溃疡患者溃疡愈合的效果,缩小溃疡面积,但调节PG水平和降低延迟性出血的selleck抑制剂效果有限。
PbNAC71在调控梨矮生性状中的功能及机理研究
矮化密植栽培具有高产、优质和便于机械化操作等优点,是现代果树栽培的发展趋势。与苹果等果树相比,梨缺乏优良的矮化砧木及矮生品种,且对于梨矮化机理的研究也相对滞后。培育优良的梨矮化砧木及矮生品种有利于实现梨树的矮化密植。本研究发现以‘云南榅桲’为基砧(以‘哈代’梨为中间亲和砧)嫁接‘早酥’梨表现出良好的矮化效应。随后从新梢转录组数据中筛选出一个矮生候选基因PbNAC71,并验证了其诱导烟草和‘Oupper extremity infectionsHF-333’梨矮生的功能。本研究进一步解析了PbNAC71调控木质部及导管发育的分子机制,发现PbNAC71蛋白可能受到泛素化修饰,形成了‘PbRNF217-PbNAC71-PbWAT1’的调控模型,为选育梨矮生品种和矮化砧木提供重要的理论依据。主要研究结果如下:1.PbNAC71是生长发育的负调节因子,过表达PbNAC71的烟草和‘OHF-333’梨表现出明显的矮生表型。本研究发现以‘云南榅桲’为基砧,‘哈代’为中间砧嫁接‘早酥’梨(‘早酥’/‘云南榅桲’)具有良好的矮化效应。与嫁接‘杜梨’的‘早酥’梨(‘早酥’/‘杜梨’)相比,‘早酥’/‘云南榅桲’植株高度显著降低,短枝率显著增加,新梢生长受到显著抑制。激素测定结果显示‘早酥’/‘云南榅桲’梨新梢内IAA显著下降,ABA含量显著提高,GA_3含量没有显著变化。在盛花期后20天,TZ含量在‘早酥’/‘云南榅桲’新梢中显著下调。新梢徒手切片观察结果显示嫁接在‘云南榅桲’矮化砧的新梢木Bafilomycin A1使用方法质部面积显著减小。本研究以盛花期后20天的新梢为材料进行转录组测序分析,转录组数据显示有四个NAC家族转录因子显著上调表达。其中,PbNAC71表达差异最大,并且在所有梨矮生种质中显著上调表达。同时,PbNAC71响应生长素和细胞分裂素处理而显著下调表达。因此,将PbNAC71筛选出来作为矮生候选基因。本研究利用转基因技术,获得了过表达PbNAC71的转基因烟草和‘OHF-333’梨。与野生型相比,转基因烟草和‘OHF-333’梨的植株高度都显著降低。这些结果表明PbNAC71是一个调控梨生长发育的负调控因子,过表达PbNAC71能够导致梨出现矮生性状。2.PbNAC71通过结合PbWAT1启动子上的SNBE元件降低其启动子活性,从而抑制木质部及导管发育。石蜡切片观察结果表明转基因植株茎木质部及导管大小显著减小。为了进一步明确PbNAC71调控木质部及导管发育的机理,本研究进一步分析了转录组数据,发现两个次生壁合成相关基因PbWAT1和PbWAT1-related显著差异表达。拟南芥同源基因突变体的表型观察结果表明,只有atwat1突变体植株有明显的矮化表型,因此将PbWAT1筛选出来作为PbNAC71的候选下游靶基因。为了进一步明确PbWAT1的功能,本研究在atwat1突变体中过表达了PbWAT1。试验结果表明PbWAT1Ceralasertib化学结构能恢复atwat1突变体的木质部导管发育,从而增加其植株高度。双荧光素酶试验结果表明PbNAC71能抑制PbWAT1的启动子活性。通过启动子序列分析,在PbWAT1启动子上发现了三个SNBE元件。酵母单杂交、Ch IP-q PCR及EMSA试验明确PbNAC71在体内、体外都能结合PbWAT1启动子上的SNBE元件。这些结果表明,PbNAC71通过结合PbWAT1启动子上的SNBE元件降低其启动子活性。3.PbRNF217能够促进PbNAC71的蛋白泛素化,从而调控木质部及导管发育和植物高度。通过酵母双杂交筛库,筛选到了一个E3泛素连接酶PbRNF217。进一步通过酵母双杂交、双分子荧光互补和Pull-down试验证明PbNAC71在体内、体外都能与PbRNF217蛋白互作。Western blot试验结果表明在PbNAC71与PbRNF217共表达‘杜梨’根系中PbNAC71的蛋白丰度显著降低。基于E3泛素连接酶的功能,我们推测PbRNF217能促进PbNAC71蛋白的泛素化降解。体内泛素化试验及体外蛋白降解试验表明PbRNF217能够促进PbNAC71蛋白依赖于26S蛋白酶体途径的泛素化降解。随后,本研究在过表达PbNAC71的转基因烟草中又过表达了PbRNF217。与单转基因烟草相比,双转基因烟草株高显著增加,Nt WAT1的表达显著上调,木质部及导管大小也明显增大。并且我们还发现MG132处理后,双转基因烟草生长受到显著抑制,Nt WAT1显著下调表达,其木质部及导管大小也显著减小。这些结果表明PbNAC71蛋白的泛素化降解是双转基因烟草株高、木质部大小和导管面积显著增加的主要原因。