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目的 探讨单核苷酸多态性微阵列技术(SNP-array)联合染色体核型分析在胎儿脉络丛囊肿产前诊断中的临床应用价值。方法 选取2018年1月—2020年12月在厦门市妇幼保健院超声医学科经产前超声诊断为脉络丛囊肿的407例胎儿，同时进行染色体核型分析和SNP-array检测。结果 407例样本中单独使用核型分析检出染色体异常39例，单独使用SNP-array检出染色体异常66例，两项联合检测检出73例染色体异常，与单项核型分析相比差异有统计学意义(χ~2=11.968,P<0.05),与单项SNP-array相比差异无统计学意义(χ~2=0.425,P>0.05)。153例单侧脉络丛囊肿和254例双侧脉络丛囊肿样本中，分别检出SNP-array异常28例和45例，两组差异无统计学意义(χ~2=0.022,P>0.05);210例孤立性脉络丛点击此处囊肿和197例合并其他异常的样本中，检出SNP-array异常27例和46例，两组差异具有统计学意义(χ~2=7.604,P<0.05)。结genetic resource论 SNP-array除可有Blebbistatin采购效检出产前脉络丛囊肿胎儿染色体数目和结构异常外，还可额外检出核型正常的脉络丛囊肿胎儿的染色体微缺失/微重复以及杂合性缺失，结合核型分析可以互补检出染色体平衡易位和倒位，更全面揭示脉络丛囊肿的遗传学病因，科学指导脉络丛囊肿胎儿妊娠选择。

【目的】明确gdnfa基因在斑马鱼中的表达特征及其进化保守性，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立gdnfa~(+/-)F_1代杂合突变体，为KPT-330后续生成gdnfa~(-/-)F_2代纯合突变体打下基础，同时为探讨gdnfa基因在斑马鱼性腺分化和发育中的作用机制提供理论依据。【方法】通过下载不同物种的GDNF蛋白氨基酸序列，并分析其保守结构域，探究该基因在不同物种中的进化保守性。利用实时荧光定量PCR检测gdnfa基因在6月龄斑马鱼不同组织中的表达情况，并通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得gdnfa F_0代突变个体，随后与野生型回交获取gdnfa~(+/-)F_1代突变个体，并分析其基因型及突变类型。最后，通过组织石蜡切片分析3月龄gdnfa~(+/-)F_1代个体与同期野生型性腺组织间的差异。【结果】斑马鱼GDNFA蛋白分子量为26.89 kD，由235个氨基酸残基组成，包含13个疏水氨基酸和51个酸性氨基酸，理论等电点（pI）为8.455，且该蛋白存在1个TGF-β结构域。斑马鱼GDNFA蛋白序列进化较保守，与非洲爪蟾、小鼠和人类GDNFA蛋白具有相同的TGF-β结构域，推测GDNFA蛋白序列在鱼类、人类和爬型动物类中进化保守。gdnfa基因在6月龄斑马鱼的性腺（精巢和卵巢）、肾脏、肝脏、鳃和肌肉组织中均有表达，但精巢中gdnfa基因的相对表达量显著高于其他组织（P<0.01）。繁育得到的48尾斑马鱼gdnfa~(+/-)F_1代杂合突变体中产生了3种突变类型，分别为在靶点附近插入2个碱基（△+2 bp）、缺失2个碱基（△-2 bp）和缺失12个碱基（△-12 bp）。48尾gdnfa~(+/-)F_1代个体的雄性∶雌性=14∶34，呈现出明显的雌性性别偏向。与野生型斑马鱼GDNFA蛋白相比，斑马鱼gdnfa~(+/-)F_1代个体的GDNFA蛋白三级结构发生了明显变化。性腺石蜡切片观察发现，部分gdnfa~(+/-)F_1代个体（△-2 bp）精巢中A型精原细胞团减少，B型精原细胞团排列更疏松；部分个体（△-12 bp）卵巢中更多的皮质泡卵母细胞累积。【www.selleck.cn/products/BAY-73-4506结论】斑马鱼gdnfa基因与其他硬骨鱼类平行进化，且gdnfa基因在硬骨鱼类的进化过程中具有高度保守性；由于gdnfa基因在斑马鱼精巢发育中发挥作用，故gdnfa~(+/-)F_1代个体性别比例偏向于雌性，推测其参与斑马鱼性别分化。gdnfa~(+/-)F_1代杂合体部分功能的缺失对精原细胞的产生、皮层滤泡期卵母细胞到初级生长期Median paralyzing dose卵母细胞的过渡阶段起到阻滞作用。获得的gdnfa~(+/-)F_1代个体可用于生成gdnfa~(-/-)F_2代纯合个体。

【目的】建立巨噬细胞免疫抑制模型，探究菊苣酸(cichoric acid, CA)对磷酰胺氮芥(phosphoramide mustard, PM)诱导巨噬细胞免疫抑制的作用及调控机制，为将CA开发为临床防治免疫抑制性疾病的新型药物提供理论依据。【方法】以巨噬细胞源性外泌体为研究对象，采用ExoQuick免疫沉淀试剂盒提取外泌体，用透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)、纳米颗粒跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis, NTA)、Western blotting鉴定外泌体形态、粒径大小与浓SCH772984分子量度，以及表面标志蛋白CD63、HSP90的表达。同时，采用浓度为3μmol/L的PM诱导巨噬细胞24 h,建立免疫抑制模型后，给予低、中、高剂量CA(25、50、100μmol/L)进行干预，通过CCK-8测定细胞活力、中性红检测细胞吞噬能力及NTA测定外泌体粒径大小与浓度，研究CA介导外泌体增强免疫的作用机制。【结果】提取的巨噬细胞源性外泌体杯状形态完整，粒径在30～200 nm之间，标志蛋白表达清晰，具有良好的生物活性。由CCK-8、中性红及NTA测定结果可见，CA在3.12～400μmol/L浓度范围内对巨噬细胞无毒性作用；与PM模型组相比，低、中、高剂量CA可极显著PHHs primary human hepatocytes提高免疫抑制巨噬细胞活力及其吞噬能力(P<0.01),极显著促进外泌体的分泌(P<0.01)。【结论】本研究结果表明，CA可能通过调控巨噬细胞源性外泌体分泌，增强其细胞活力与吞噬能力激selleck化学活巨噬细胞，揭示了CA增强免疫的潜在作用机理。

目的 探究乳双歧杆菌Probio-M8(Bifidobacterium animalis subsp. lactis Probio-M8)ethnic medicine在连续传代中的遗传稳定性。方法 厌氧环境下，乳双歧杆菌Probio-M8在胰胨植胨酵母膏琼脂培养基（trypticase-phytone-yeast extract agar medium, TPY培养基）中连续传100代时，对不同代时菌株（0、25、50、75、100代）的菌落形态变化、碳此网站水化合物利用情况、细菌代谢物产生情况及比较基因组学进行分析。以乳双歧杆菌Probio-M8原始菌株基因组作为参考序列，利用二代数据对三代BIBW2992临床试验数据识别到的突变位点进行验证。结果 与原始菌株相比，不同代时菌株基因组大小及GC含量均无显著差异（P> 0.05）。两两菌株间ANI值均大于99%。从不同代时15株菌的基因组中共鉴定到31个SNP位点，包括7个同义突变和7个非同义突变，其余17个位于基因间区。每株菌的SNP个数均小于21，且每两个代时菌株间突变位点不会稳定存在。同时，在连续传代100代时过程中不同代时菌株的菌落形态、碳水化合物利用情况和细菌代谢物产生情况等均无显著变化。结论 乳双歧杆菌Probio-M8在厌氧环境的TPY培养基中遗传稳定性良好，为该菌株开发应用提供理论参考。[营养学报，2023,45(5):504-511,520]

手术切除是乳腺癌的主要治疗方法。然而,肿瘤切除后残留的肿瘤细胞和高度免疫抑制的肿瘤微环境(TME)对肿瘤复发和转移有显著影响。术后原位植入载药系统因其可以在手术后方便地使用,是一种很有前途的治疗方法。其中,水凝胶由于其均匀的3D多孔网络结构和原位形成后的非凡封装能力而显示出巨大的药物递送潜力,并且化疗药物、各种免疫治疗剂和纳米粒都可以装载到水凝胶中。化学动力学疗法(CDT)是一种新兴的治疗方法,通过将过氧化氢(H2O2)转化为毒性的羟基自由基(·OH)来杀死肿瘤细胞。此外,CDT还可以与化疗药物如阿霉素(DOX)协同显示出增强的抗肿瘤效果,因为DOX不仅可以直接杀死肿瘤细胞,还可以通过诱导免疫原性细胞死亡(ICD)产selleck NMR生抗肿瘤的免疫应答。除了残留的肿瘤细胞,术后免疫抑制性TME也是导致肿瘤复发和转移的另一个重要因素。因此,本论文设计了一种可注射的两性离子水凝胶系统,用于术后残留肿瘤细胞的杀伤以及免疫抑制TME的重塑,具有抑制肿瘤复发的效果。本论文的主要研究内容如下:(1)合成了具有化疗与CDT联合杀伤肿瘤效果的载药纳米粒,并对其进行了理化性质的表征与体外细胞生物学研究通过在碱性条件下H2O2和Cu2+的配位,并PF-02341066分子式同时加入DOX,制备了装载DOX的过氧化铜纳米粒(CuO2/DOX)。为了提高肿瘤细胞的靶向性,将巨噬细胞膜涂覆在纳米粒的表面制备具有肿瘤靶向功能的包膜纳米粒(M/CuO2/DOX)。使用马尔文粒径仪、透射电子显微镜(TEM)以及X射线光电子能谱(XPS)对M/CuO2/DOX的理化性质进行表征。选择4T1细胞为模型细胞,对M/CuO2/DOX的摄取、细胞毒性和诱导ICD的能力进行验证。结果表明,M/CuO2/DOX具有良好的肿瘤细胞积累以及诱导细胞凋亡和ICD的能力。(2)合成了具有抗蛋白质吸附和降解性能的两性离子水凝胶并对其理化性质进行表征甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)通过自由基聚合得到甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱聚合物(PSBMA)。PSBMA可以在生理盐水中通过静电作用自组装形成水凝胶(PSBMA水凝胶)。通过核磁共振氢谱(1H-NMR)和红外光谱(FT-IR)验证其成功合成。通过扫描电子显微镜(SEM)观察其内部为多孔的结构。选择牛血清白蛋白(BSA)以及4T1细胞作为模型蛋白和细胞,证明了其良好的抗蛋白吸附和抗细胞粘附性能。通过溶血实验和细integrated bio-behavioral surveillance胞毒性实验验证了其具有良好的生物相容性。(3)合成了包载M/CuO2/DOX与干扰素基因刺激因子(STING)激动剂2′,3′-cGAMP 的 PSBMA 水凝胶(Gel@M/CuO2/DOX/STING),并对其理化性质进行表征将M/CuO2/DOX与STING激动剂2′,3′-cGAMP一起装载到PSBMA水凝胶中得到Gel@M/CuO2/DOX/STING。使用流变仪测定了水凝胶的流变行为。体外降解和药物释放结果表明,水凝胶可以在生理盐水中逐渐降解并释放药物。(4)Gel@M/CuO2/DOX/STING用于术后肿瘤治疗的研究将水凝胶植入手术切除肿瘤后的空腔内。水凝胶可以在生理条件下逐渐降解并释放M/CuO2/DOX和2′,3′-cGAMP。M/CuO2/DOX可被肿瘤细胞选择性摄取,杀死肿瘤细胞并诱导ICD。2′,3′-cGAMP激活STING途径并上调与干扰素(IFN)信号相关的基因,重塑免疫抑制性TME。在小鼠4T1肿瘤术后切除模型中,Gel@M/CuO2/DOX/STING既可以杀死残留的肿瘤细胞,又能促进树突状细胞(DCs)的成熟,增强肿瘤特异性CD8+T细胞浸润,并最终有效预防术后复发和转移。

目的 对平顶山市第二人民医院宝丰分院眼科563例年龄>60岁白内障患者术中虹selleckchem Pidnarulex膜松弛综合征(IFIS)发生情况进行调查,构建logistic回归模型进一步分析IFIS发生的影响因素。方法 前瞻性选取2020年4月至2022年6月来平顶山市第二人民医院宝丰分院拟行白内障超声乳化吸出术老年患者563例作为研究对象,统计其服药史、散瞳前后瞳孔直径及IFIS发生情况,并采用Logistic回归方程分析IFIS的影响因素。结果 563例老年白内障患者术中发生IFIS 46例,发生率为8.17%(46/563)。其中轻度15例、中度25例,6例重度。两组年龄、α-1受体拮抗剂应用史、FPG、HbA1c、散瞳直径、抗精神病药物应用史、苯二氮卓类药物应用史比较,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄(■=2.919)、α-1受体拮抗剂应用史(■=4.232)、空腹血糖(FPG)(■=1.405)、糖化血红蛋白(HbA1c)(■=3.038)、散瞳直径(■=0.456)、抗精神VE-822价格病药物应用史(=2.553Biomass conversion)、苯二氮卓类药物应用史(■=2.807)是白内障患者IFIS影响因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 白内障患者术中IFIS发生受年龄、α-1受体拮抗剂应用史、FPG、HbA1c、散瞳直径、抗精神病药物应用史、苯二氮卓类药物应用史等因素影响,建议临床根据上述影响因素,针对患者制定预防性措施,以有效改善预后。

目的:(1)基于林县一般人群营养干预实验30年随访数据,描述林县一般人群营养干预人群主要疾病的死亡情况及变化趋势,分析影响Western Blotting食管癌死亡的因素,为食管癌的一级预防提供参考。(2)基于队列人群血液标本,寻找食管癌代谢肿瘤标志物,并联合食管癌危险因素探索这些标志物在食管癌发病预测方面的能力。方法:纳入林县一般人群营养干预实验队列基线数据(包括人口学信息、生活方式信息、家族史信息)和30年随访数据,使用logistic模型分析影响食管癌死亡的影响因素。食管代谢组学的研究使用队列1999-2000年采集的血液标本,在队列中随机抽取200例2000年后发病的食管癌患者,经性别年龄匹配得到200例健康对照,使用液相色谱-质谱分析组间差异化合物,使用logistic模型筛选得到肿瘤标志物组合,进一步进行危险因素-标志物联合分析。结果:食管癌是林县居民主要的恶性肿瘤,队列人群的死亡率波动趋势与食管癌波动趋势类似,分组分析显示男性食管癌死亡率远远大于女性(男性531.24/10万,女性380.28/10万),高年龄组食管癌死亡率远远大于低年龄组(高年龄组730.82/10万,低年龄组347.43/10万)。年龄增加、男性、体重超重、吸烟和具有上消化道肿瘤家族史是食管癌的危险因素,而增加新鲜蔬菜水果、肉蛋类食物的摄入、提升个体教育水平、居住在山地地区是食管癌的保护因素。溶血磷脂酰胆碱18_0、胆碱、磷脂酰胆碱38_5、十二三烯酰肉碱是本研究发现的食管癌代谢标志物组合,三者组成的预测模型AUC=0.787,灵敏度约为0.68,特异度约为0.78。结论:本研究中,吸烟和超重被认为是对食管癌死亡影Cobimetinib分子式响最为重要的两个可改变危险因素,进行健康宣教可以从一级预防方面进行人群的食管癌预防。食管癌肿瘤标志物组合的研究在食管癌的早期诊断和筛查方面有广泛的应用前景,为研究低成本无创筛查提www.selleck.cn/products/Trichostatin-A供了思路,为食管癌的二级预防提供了证据,具有重要的公共卫生意义。

荔枝霜疫霉是荔枝霜疫病的致病菌,隶属于卵菌门。荔枝霜疫病通常造成大量烂果、落果,严重阻碍荔枝产业的发展。YinYang1 (YY1),是一种进化上保守的Cys2/His2(C_2H_2)锌指转录因子,且普遍表达,已被证明在不同的遗传背景下可以激活、抑制和启动转录活性。为明确荔枝霜疫霉中YY1同源基因g1902的功能,利用CRISPR/Probiotic productCas9技术与PEG介导的原生质体遗传转化手段对g1902基因进行敲除和功能分Wnt-C59纯度析,结果显示:①与野生型菌株相比,g1902基因突变体的菌丝生长速率下降62.3MK-1775体内3%;孢子囊产量与释放率显著下降,其中,孢子囊产量减少了78.49%,而释放率在0.5 h、1h和2 h时的仅为31.37%、41.57%和50.21%,但野生型的释放率分别为66.13%、74.72%和81.82%;致病性也显著下降。②与野生型菌株相比,g1902基因突变体卵孢子产量无显著性差异。研究结果表明g1902基因参与了荔枝霜疫霉的营养生长、孢子囊形成、孢子囊释放和致病性,但对卵孢子的形成无影响。

为了探究羊口疮病毒114蛋白作为羊口疮病毒Secretase抑制剂多表位疫苗靶标的可能性，试验利用在线软件ABCpred预测114蛋白的优势B细胞表位，利用在线软件IEDB的MHC-Ⅰbinding server预测114蛋白的优势细胞毒性T细胞(CTL)表位；利用IEDB的MHC-Ⅱbinding server预测114蛋白的优势辅助性T细胞(HTL)表位；使用柔性短肽接头连接114蛋白的优势B、T细胞抗原表位，构建羊口疮病毒多表位疫苗。结果：羊口疮病毒114蛋白由346个氨基酸组成，包含12个优势B细胞抗原表位，分别位于292～307 aa、264～279 aa、146～161 aa、331～346 aa、113～128 aa、298～313 aa、35～50 aa、324～339 aa、281～296 aa、1PF-02341066 IC5062～177 aa、315～330 aa、204～219 aa;包含1个优势CTL抗原表位，位于65～73 aa;包含5个优piezoelectric biomaterials势HTL抗原表位，分别位于69～83 aa、68～82 aa、70～84 aa、48～62 aa、284～298 aa;构建了基于114蛋白的优势抗原表位的羊口疮病毒多表位疫苗。结论：羊口疮病毒114蛋白包含多个优势B细胞和T细胞抗原表位，可作为羊口疮病毒多表位疫苗的候选靶标，具有诱导强烈体液免疫与细胞免疫反应的可能性。

Pre-mRNA的可变剪接大大提高了有限基因编码序列产生的蛋白质组的复杂性。可变剪接过程的失调与生物发育、肿瘤发生和衰老等过程密切相关。可变剪接主要受RNA结合蛋白质(RBP)调控。异质核糖核蛋白hnRNPL及其同源蛋白质hnRNP LL,通过其四个保守的RRM结构域识别内含子或外显子序列上的CA富集区域调控可变剪接的发生,进而影响生物发育、肿瘤发生等过程。但是,hnRNP L/LL如何与转录机器耦联,进而实行共转录可变剪接调控的分子机制仍然未明。最近hnRNP L被报道通过其第二个RRM结构域(RRM2)与H3K36甲基转移酶SETD2上的一段保守区域(命名为SETD2_SHI)相互作用,表明hnRNP L-SETD2可能与共转录剪接的耦联相关。本研究进一步分析了hnRNPL与SETD2_SHI互作的分子机制。首先,本研究通过等温滴定量热(ITC)实验发现hnRNP L与SETD2_SHI内的一段高度保守的肽段特异互作,并解析了 hnRNP L_RRM2与SETD2_SHI肽段的复合物结构,结构表明SETD2高度保守区段内的一对亮氨酸将其侧链分别插入hnRNP L RRM2表面形成的两个疏水口袋中。其CP-690550次,本研究结合质谱、体内实验和ITC实验表明hnRNP L的同源蛋白质hnRNP LL_RRM2在体内、体外均与SETD2_SHI结合,并解析了hnRNP LL_RRM2与SETD2_SHI截短的核心保守肽段的复合物晶体结构。通过比较分析两个复合物的结构,鉴定出介导二者相互作用的关键残基,并结合ITC实验验证了这些残基的重要性。SETD2中的亮氨酸对突变还会导致其与包括hnRNPs在内的其他pre-mRNA剪接相关蛋白质的相互作用减少。另外,通过回补hnRNP LL质粒消除了基因tip1和bptf在hnRNP L敲除时出现的外显子比例增高的现象,证明了 hnRNPL/LL在功能上存在一定的冗余性。综上所述,本研究解析的hnRNP L/LL-SETD2的复合物结构为理解共转录剪接耦联的分子机制提供了一定的理论基础。端粒功能失常是导致衰老和癌症的重要原因。最近的研究发现BTB-ZF锌指蛋白质家族成员ZBTB10,可以与端粒DNA变体重复序列TTGGGG特异性结合。端粒变体重复序列存在于亚端粒和使用替代延伸机制(ALT)的端粒中。ZBTB10通过串联C2H2锌指(ZF1-2)与双链端粒变体重复序列TTGGGG特异结合。本研究解析了 ZBTB10 ZF1-2与双链DNA序列TTGGGG的复合Fungal microbiome物晶体结构并通过ITC实验确定了 ZBTB10 ZF1-2识别TTGGGG的关键氨基酸残基,由此阐明了 ZBTB10 ZF1-2特异性识别TTGGGG的分子机制。本研究进一步改造了 ZBTB10 ZF1-2,将Arg767突变成了 Gln(Arg767Gln),使得其偏好结合端粒DNA重复序列TTAGGG,并且成功解析了 ZBTB10 ZF1-2 Arg767Gln-端粒DNA的复合物晶体结构。通过比较TZAP-端粒DNA等复合物结构,表明C2H2锌指蛋白质可以通过R..H..R(.代表任意氨基酸)基序特异识别GGG核苷酸三联体。此外,还发现基因组编码大量包含R..H..R基序的C2H2锌指,表明基因组内存在更多的端粒DNA结合蛋白质。综上所述Dolutegravir说明书,本研究阐述了 C2H2锌指识别端粒DNA的主要特征,为进一步发现新的端粒DNA结合蛋白质和探索它们的生物学功能奠定了理论基础。近些年的研究表明,衰老的速度在一定程度上由进化中保守的遗传途径和生化过程控制,例如RNA可变剪接、端粒缩短和表观遗传修饰改变等,因此,本文的两部分内容在一定程度上与衰老的生理过程相关,对这两个潜在与衰老相关的生物大分子互作机制的研究将会对理解衰老的发生提供一定的结构基础。