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目的 研究沙库巴曲缬沙坦Hellenic Cooperative Oncology Group与缬沙坦对顽固性心力衰竭患者氨基末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)、6分钟步行距离(6MWD)及心功能的影响。方法 选取2020年5月—2022年11月郑州大学第一附属医院收治的顽固性心力衰竭66例患者，在常规治疗的基础上，将采用缬沙坦治疗的33例作为对照组，将采用沙库巴曲劼沙坦治疗的33例作为观察组。对比两组患者接受治疗后的NT-proBNP指标、6MWD和心功能恢复有效率。结果 治疗前，两组患者的NT-pro BNP水平比较无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后NT-pro BNP(980.54±381.56)pg/mL,明显低于对照组患者[(1205.12±400.52)pg/mL](P<0Stem Cells & Wnt抑制剂.05);两组治疗前selleck LY2940026MWD差距无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后6MWD明显高于对照组(P<0.05);观察组治疗后总有效率84.85%,高于对照组[60.61%],组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本研究结果显示沙库巴曲缬沙坦治疗顽固性心力衰竭，具有较为理想的治疗效果。

目的 探讨三七总皂苷、莪术醇联用对抗结肠癌细胞株HCT116和HT29的效果及其可能的机制。方法 采用体外培养HCT116及HT29结肠癌细胞系模型，分别给予三七总皂苷(50μmol/L)(三七总皂苷组)、莪术醇(50μmol/L)(莪术醇组)及联合用药(50μmselleckchem PEG300ol/L三七总皂苷+50μmol/L莪术醇)(联合组)进行处理，并将细胞培养24 h。以5-FU为阳性对照设置阳性对照组，同时设置空白对照组(只加细胞和培养液)。体外培养24、48 h后，统计细胞抑free open access medical education制率、细胞凋亡及细胞周期情况，采用免疫细胞化学法检测Ang-2和caspase-3蛋白的表达。结果 人结肠癌细胞经三七总皂苷、莪术醇以及联合处理后，细胞生长受到不同程度的抑制，联合组对HCT116和HT29的抑制率明显高于单药的应用，差异有www.selleck.cn/products/Vorinostat-saha统计学意义(P<0.05),且抑制程度随着时间的增加而增强；联合组干预48 h后人结肠癌HCT116和HT29细胞凋亡率明显高于各单用组，差异有统计学意义(P<0.05);联合组干预24 h后，HCT116、HT-29细胞发生变化，G1期细胞数增加，S期细胞数明显减少，差异有统计学意义(P<0.05);联合组干预24 h后，HCT116和HT29细胞中Ang-2的表达水平明显降低，caspase-3的表达水平则明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 三七总皂苷、莪术醇联用能显著增强抗结肠癌作用，其机制可能是通过抑制细胞增殖，并促进细胞凋亡的双重作用。

目的探究层状双氢氧化物(LDH)基因药物纳米递送体系对miR-141-3p的有效负载及LDH@miR-141-3p被乳腺癌细胞有效吸收对其自噬的影响。方法实时荧光定量PCR和Western blotting检测乳腺癌敏感细胞SKBR-3和耐药细胞SKBR-3/PR中miR-141-3p和RAB10的表达。水热共沉淀法Tofacitinib研究购买制备LDH和LDH@miR-141-3p;马尔文粒度分析仪检测LDH和LDH@miR-141-3p的粒径和电位;透射电镜检测LDH和LDH@miR-141-3p的形貌特征;紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳确定LDH和miR-141-3p的负载情况及最佳的负载比例;激光共聚焦显微镜观察LDH@miR-141-3p在不同时间段下被细胞摄取的情况;溶酶体逃逸和溶酶体通透性实验检测LDH@miR-141-3p逃逸溶酶体捕获的机制;流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell实验测定LDH@miR-141-3p对SKBR3/PR细胞凋亡、迁移和侵袭的影响;免疫荧光检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3 (LC3)表达;Western blotting检测LDH@miR-141-3p对RAB10及自噬相关蛋白的表达;结果 miR-141-3p在SKBR3/PR细胞中下调,RAB10上调。使用水热共沉淀法成功制备了LDH并成功合成了LDH@miR-141-3p体系Adezmapimod化学结构。LDH和LDH@miR-141-3p的粒径分别为117.3nm和133.9nm,和Zeta电位分别为40.8mV和37plasma biomarkers.8mV。紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶阻滞实验结果显示LDH成功搭载miR-141-3p且最佳搭载比例为20:1。透射电镜结果显示LDH和LDH@miR-141-3p均为六边形片状结构。摄取实验表明LDH@miR-141-3p在4h即可被SKBR3/PR细胞摄取且48h还存在很强的荧光。LDH@miR-141-3p可成功逃逸溶酶体的捕获且可增加溶酶体膜的通透性进入细胞质中。与单miR-141-3p组相比,LDH@miR-141-3p能够抑制SKBR3/PR细胞迁移、侵袭促进其凋亡;LDH@miR-30a能够抑制RAB10的表达。与单LDH@miR-141-3p组相比,LDH@miR-141-3p组LC3表达降低,P62表达升高。结论 LDH@miR-141-3p可抑制乳腺癌细胞的自噬和迁移,促进其凋亡,其作用机制可能与抑制RAB10表达有关。

玉米醇溶蛋白由于其优异的自组装特性、良好的抗胃酸分解特性、独特的溶解特性、良好的生物相容性、可再生性、可降解性,被广泛应用于食品加工和生物递送药物体系。不同的给药方式对纳米药物载体提出了不同的要求。本文针对注射给药和口服给药两种给药方式的瓶颈问题,合理设计了基于玉米醇溶蛋白/透明质酸(Zein-HA)的复合基纳米药物,并分别对其进行了化学修饰改性,考察了其理化性质和生物学细胞水平的表征。主要研究内容如下:(1)以玉米醇溶蛋白(Zein)和透明质酸(HA)作为原料,采用三因素四水平的正交实验表,利用GW-572016作用搅拌透析的方法,使用渴望函数对不同因素水平进行分析,制备得到了均一度较高的球形两亲性纳米颗粒。实验结果表明,玉米醇溶蛋白-透明质酸-聚乙二醇基纳米药物(Zein-HA-PEG)在体外条件下,具备良好的酸响应特性和电荷反转能力,进一步的生物水平实验表明Zein-HA-PEG基纳米药物具备较高的CD44特异性细胞摄取能力、较强的细胞毒性水平和较高的3D肿瘤球渗透能力,适用于注射给药途径。(2)使用超声透析法,利用渴望函数对四因素四水平的正交实验数据进行分析,得到最优组的反应条件。使用最优反应条件进一步制备得到了具备独特抗胃酸分解特性以及优异溶解特性的玉米醇溶蛋白-透明质酸-羟基喜树碱纳米药物(Zein-HA@HCPT)。发现Zein-HA@HCPT纳米药物表现出优异的生物学稳定性、控缓释治疗能力和独特的抗胃酸分解特性。且疏水性药物HCPT被包封后晶型表现为无定形形态,这有利于药物溶出,改善其生物利用度。其次,Zein-HA@HCPT纳米药物在结肠部位的累积释放量较高,表现出优异的结肠靶向特性。细胞毒性结果表明,未载药的Zein-HA纳米载体表现出安全的生物相容性,而Zein-HA@HCPT纳米药物具有较高的细胞毒性。(3)利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化HA中的羧基(-COOH)与L-精氨酸(L-ARG)进行化学偶联,成功制备了同时具备气体治疗功PF-07321332体内能与化学治疗功能的玉米醇溶蛋白-透明质酸-精氨酸@盐酸阿霉素纳米药物(Zein-HA-LARG@DOX)。研究表明,Zein-HA-LARG@DOX纳米药物在体外模拟的细胞微环境中具备优异的NO释放能力,同时制备得到的Zein-HA-LARG@DOX纳米药物具备高效的L-ARG载药效率(9.8%)和DOX载药效率(10.3%),体外释放NO和DOX实验也进一步证实了Zein-HA-LARG@DOX纳米药物优异的酸敏感和透明质酸酶敏感特性。细胞毒性实验进一步体现了NO可以促进癌细胞对化疗药物DOX的敏感性。综上所述,本论文针对纳米药物在静脉注射中渗透性差、穿透能力低等瓶颈问题以及在口服剂型中靶向new infections能力弱等问题,针对性设计了具备酸敏感和酶敏感特性的基于玉米醇溶蛋白-透明质酸复合载体的靶向纳米药物,用于改善静脉注射给药和口服给药的瓶颈问题,为药物递送领域的研究和应用提供了新思路。

矽肺是长期吸入的大量游离SiO_2粉尘沉着于肺组织所引起的一种常见职业病，以硅结节和肺组织弥漫性纤维化为特征。矽肺作为我国最常见、危害最严重的职业病之一，其治疗给个人及国家带来巨大的经济负担。矽肺形成机制十分复杂，发病trained innate immunity早期筛查指标缺失，也缺乏有效的治疗药物及治疗方法。矽肺的诊断主要依靠职业史结合影像学检查等方法，发现矽肺患者时selleck PLX4032，其肺组织纤维化病变已无法逆转，而且AZD9291分子式矽肺是持续进展性疾病，即便矽肺病人脱离粉尘作业环境，其肺组织纤维化病变会持续发展，日益严重。程序性细胞死亡（细胞自噬、细胞凋亡、铁死亡等）是参与矽肺发展的关键因素。本文总结了细胞自噬、细胞凋亡、铁死亡这三种程序性细胞死亡在矽肺纤维化中发挥重要作用；通过有效手段调节不同程序性细胞死亡及其相关信号通路将会延缓矽肺纤维化的进程，为矽肺形成机制的探讨及防治提供新的思路与线索。

目的 探讨金雀获悉更多异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型，并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食，每组10只。各给药组灌胃给药8周，检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数，血清CK-MB、AST及LDH活性，观察心肌纤维化程度，心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达，心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较，金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(parenteral immunizationSV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(Fulvestrant说明书P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路，减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用，进而发挥保护心脏效应。

目的 研究基于多吡啶配体BPA-TPA的双核铜、镍和锌配合物(BPA-TPA-Cu_2、BPA-TPA-Ni_2、BPA-TPA-Zn_2)的抗癌活性。方法 通过三步反应合成基于多吡啶配体BPA-TPA的双核配合物BPA-TPA-Cu_2、BPA-TPA-Ni_2及BPA-TPA-Zn_2,并以高分辨质谱法进行表征。配合物荧光滴定EB-DNA实验研究三个双核配合物与小牛胸腺DNA(Q-VD-Oph化学结构CT-DNA)的相互作用，并进一步以MTTProtein Gel Electrophoresis实验考察它们对癌细胞的体外毒活性。结果 双核铜配合物BPA-TPA-Cu_2与CT-DTamoxifenNA具有更强的相互作用，结合常数达到6.2×10~4 L/mol,优于BPA-TPA-Ni_2,BPA-TPA-Zn_2及BPA-TPA。细胞毒活性测试表明BPA-TPA-Cu_2对AsPC-1细胞具有较好的毒活性，其IC_(50)低至(35.81±9.82)μmol/L且优于BPA-TPA-Ni_2、BPA-TPA-Zn_2及顺铂(阳性对照)。结论 含多吡啶的双核铜配合物BPA-TPA-Cu_2具有相对更好的抗癌活性，有望进一步优化并开发成新的抗胰腺癌金属配合物药物。

急性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤是临床常见的恶性血液病，具有病因复杂、病位深疴、病情顽固、变化多端、难以根治等临床特征。中医药治疗该类疾患积累了丰富经验，显示出一定优势，但临床疗效仍有待提高。在长期临床实践基础上，根据中医风邪致病SB203580纯度理论，将风药应用于恶性血液病的中购买Pexidartinib医临床诊疗，形成了理论特色，可提高临床疗效。风邪入里滞留是恶性血液composite biomaterials病发生和进展的重要原因，气滞、痰湿、瘀血、癌毒是恶性血液病过程中的关键病理产物。风药能通关达窍，兼开郁、化痰、涤饮、行水、胜湿、化瘀、解毒，契合恶性血液病复杂的病机特点。临证中常用麻黄、桂枝、柴胡、僵蚕、刺蒺藜、升麻、葛根、金银花、连翘、细辛、白芷、羌活、独活等，可以祛风散邪，对恶性血液病正虚、气滞、痰凝、血瘀、癌毒等病理因素均具有干预作用。

目的:探讨7例多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)继发Ⅰ型冷Gefitinib核磁球蛋白血症(cryoglobulinemia, CG)患者的临床特征、治疗及转归。方法:回顾性分析2015年1月—2023年3月北京协和医院确诊的7例MM继发Ⅰ型CG患者的临床资料、治疗方案和生存结局。结果:7例患者中，男5例，中位诊断年龄为56(40～71)岁。4例继发于冒烟型骨髓瘤。CG受累器官包括皮肤(n=5)、周围神经(n=4)、关节(n=4)和肾脏(n=1)。中位冷球蛋白水平diABZI STING agonist为13 046.5(693.8～33 988.0) mg/L,所有患者均为IgG单克隆型冷球蛋白，与M蛋白类型一致。7例患者均接受了抗浆细胞治疗，其中1例因CG相关急性肾衰竭同时进行了血浆置换。6例有随访资料的患者均获得了MM血液学缓解，4例有CG相genetic clinic efficiency关症状者均达到临床缓解。中位随访37(10～45)个月后，1例失访，1例因治疗相关感染死亡。结论:MM是Ⅰ型CG相对少见病因，对于有皮肤、周围神经、关节等受累表现的MM患者，应考虑到继发性CG的可能。

卵巢癌是一种对铂类药物敏感的肿瘤,一线常规治疗通常有较高的疗效。然而,75%的晚期患者在接受顺铂(Cis[Pt Cl_2(NH_3)_2],DDP)治疗一段时间后仍会发生转移和/或复发,顺铂耐药性最终会影响癌症患者的长期生存率。卵巢癌对顺铂耐药的机制很复杂,研究表明,它可能与药物外排增加、表观遗传改变、DNA修复增强和自噬激活有关。尽管自噬在肿瘤形成过程中的促生长和促死亡作用仍有争议,大量研究支持在化疗药物引起的微环境压力下,肿瘤细胞将刺激自噬作为对抗化疗药物细胞毒性的保护机制,最终导致化疗耐药性的出现。铁死亡是一种铁依赖性的细胞程序性死亡方式。在二价铁离子或酯氧合酶的作用下,催化细胞膜上不饱和脂肪酸发生脂质体过氧化,从而诱导细胞死亡。某些耐药肿瘤细胞,特别是间充质状态的、易转移的肿瘤细胞,极易发生铁死亡,但具体机制不明。因此,明确耐药卵巢癌细胞对铁死亡激活剂的易感性可能为卵巢癌临床治疗提供新的视角。抗氧化体系失活和铁代谢紊乱是影响细胞铁死亡敏感性的重要因素。一种被称为x CT(SLC7A11)的胱氨酸-谷氨酸反转运蛋白有助于从头合成抗氧化剂谷胱甘肽(Glutathione,GSH)。GSH在催化磷脂氢过氧化物解毒中的作用对细胞生存至关重要。GSH也是谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)的底物。因此,半胱氨酸剥夺和GPX4抑制可以有效地诱导铁死亡。GPX4抑制剂RSL3以及SLC7A11的直接抑制剂Erastin被广泛用于诱导铁死亡。增加铁的吸收,减少铁的储存和限制铁的外流都会导致铁积累增加,促进铁死亡。转铁蛋白通过介导铁摄取影响细胞铁积累,而铁蛋白的合成和降解均能影响铁水平。细胞质中过量的铁离子储存在由铁蛋白重链FTH1和铁蛋白轻链FTL1组成的铁蛋白复合体中。与对铁死亡敏感的细胞相比,FTH1和FTL1在对铁死亡不敏感的细胞中的表达量显著增加。最近的研究指出,铁死亡可能是自噬依赖性的。这是因为对铁死亡激活剂的反应导致自噬体的积累,而自噬机制的成分有助于铁死亡的发生。此外,铁蛋白的自噬降解可以增加细胞内的不稳定铁离子水平,使细胞对铁死亡更加敏感。本研究通过使用两个卵巢癌亲本和顺铂耐药细胞系,我们发现顺铂耐药的卵巢癌细胞对铁死亡诱导剂Erastin更敏感。进一步研究发现,顺铂耐药细胞的高自噬水平导致了游离铁离子水平的增加。动物实验表明Erastin和DDP联合应用对耐药卵巢癌细胞具有良好的治疗效果。重要的是,自噬抑制分子AKT1在顺铂治疗不敏感卵巢癌患者中表达显著降低。因此,我们假设顺铂耐药卵巢癌细胞通过维持高自噬水平应对化疗压力,这种自噬状态启动了铁蛋白FTH1/FTL1的降解并导致铁离子的释放,进而导致顺铂耐药卵巢癌细胞对铁死亡诱导剂更加敏感。本研究旨在阐明铁死亡与卵巢癌顺铂耐药之间的联系,为明确AKT1/FTH1途径在顺铂耐药卵巢癌铁死亡中的作用提供科学依据,对靶向铁死亡途径逆转顺铂耐药提供新的策略。方法:1.顺铂耐药卵巢癌细胞铁死亡敏感性增加(1)顺铂耐药卵巢癌细胞株的验证SKOV3和A2780顺铂耐药卵巢癌细胞株(记为Res)及亲本细胞株(记为Par)由课题组前期构建,实验前分别经0、2.5、5、10及20μM顺铂处理,CCK8法检测亲本细胞和耐药细胞活力。(2)顺铂耐药卵巢癌细胞对铁死亡敏感性增加使用20μM Erastin对卵巢癌亲本及耐药细胞株处理24h,CCK8法评估细胞活力。ELISA法检测MDA、GSH、SOD水平,铁离子比色法检测游离铁水平。荧光探针染色检测ROS水平。Ferrostatin-1预处理细胞后再经Erastin杀伤,CCK8法评估细胞活力以明确顺铂耐药卵巢癌细胞对铁死亡敏感性增加。2.靶向铁死亡途径逆转卵巢癌顺铂耐药(1)Erastin增强顺铂对耐药卵巢癌细胞的杀伤针对SKOV3-Res及A2780-Res细胞分别进行顺铂单药或顺铂联合Erastin处理。使用CCK8法测定细胞活力,使用钙黄绿素/PI分别对活/死细胞进行染色以判NSC 119875断凋亡率。(2)Erastin增强顺铂对小鼠卵巢癌耐药模型的治疗效果将2×10~6个SKOSecond-generation bioethanolV3-Res细胞悬液对C57BL/6雌性小鼠进行腹腔注射,制备卵巢癌腹腔转移模型。一周后,小鼠接受三种不同治疗:对照(DMSO,0.05%)、DDP(4mg/kg)或DDP(4mg/kg)+Erastin(1mg/kg)。小鼠每3天腹腔注射一次药物,持续4周。统计小鼠生存时间,腹水量,腹壁转移瘤数目,HE染色检测转移瘤对腹壁侵犯情况。3.顺铂耐药卵巢癌细胞通过FTH1自噬降解对铁死亡易感(1)顺铂耐药卵巢癌的Erastin敏感性不依赖于铁死亡防御系统分别在有/无Erastin处理条件下对亲本及DDP耐药的SKOV3及A2780细胞中GPX4、NRF2和SLC7A11蛋白水平进行Western Blot检测。RT-PCR对NRF2靶基因HO1和NQO1进行检测。(2)铁蛋白FTH1在顺铂耐药卵巢癌细胞中下调分别在有/无Erastin处理条件下对亲本及DDP耐药的SKOV3及A2780细胞中铁蛋白FTL1及FTH1进行Western Blot检测。RT-PCR法检测铁蛋白FTL1及FTH1的m RNA表达。(3)FTH1在顺铂耐药卵巢癌细胞中降解增加以10μ/m L放线菌酮(Cycloheximide,CHX)处理细胞阻断新蛋白的合成,以观察FTH1在亲本细胞和耐药细胞中的蛋白稳定性。FTH1质粒转导SKOV3-Res和A2780-Res细胞后,以活/死染色和CCK8法检测细胞对Erastin诱导的铁死亡的反应。(4)顺铂耐药卵巢癌细胞自噬水平增加透射电镜观察了顺铂耐药卵巢癌细胞及亲本细胞的自噬小体,免疫荧光染色检测顺铂耐药卵巢癌细胞及亲本细胞中自噬标志物LC3b的表达。使用自噬抑制剂3-MA处理后,Western Blot检测FTH1蛋白的表达情况,CCK8法评价顺BMN 673化学结构铂耐药卵巢癌细胞对Erastin杀伤的敏感性。4.顺铂耐药卵巢癌细胞中AKT1缺失介导FTH1自噬降解(1)基于GEO数据库筛查卵巢癌顺铂耐药差异基因通过对GEO数据库GSE23603中17例顺铂治疗完全应答(Complete response,CR)患者和10例不完全应答(Incomplete response,IR)患者的测序结果进行比对,分析顺铂耐药的差异基因,KEGG分析差异基因所富集的分子通路,免疫组化染色检测CR与IR患者卵巢癌组织AKT1的表达。(2)AKT1缺失与卵巢癌预后的关联分析通过TCGA数据库分析AKT1表达水平与卵巢癌预后的关系。AKT1由中位表达水平分为高表达组及低表达组,Nomogram模型用于评估卵巢癌患者AKT1丢失的风险。(3)AKT1缺失上调顺铂耐药卵巢癌细胞自噬水平在SKOV3-Res和A2780-Res细胞中转导外源性AKT1,Western Blot检测AKT1、LC3b、p-ULK1及FTH1的表达。CCK8法检测在顺铂耐药的卵巢癌细胞中恢复AKT1表达后,Erastin诱导的细胞铁死亡情况。结果:1.顺铂耐药卵巢癌细胞铁死亡敏感性增加(1)顺铂耐药卵巢癌细胞株的验证与亲本细胞相比,SKOV3-Res细胞对顺铂具有更强的耐药性(IC50/SKOV3-Par=10.717,IC50/SKOV3-Res=23.830)。与亲本细胞相比,A2780-Res细胞对顺铂具有更强的耐药性(IC50/A2780-Par=9.528,IC50/A2780-Res=25.591)。以上结果说明,SKOV3和A2780顺铂耐药卵巢癌细胞株构建成功。(2)顺铂耐药卵巢癌细胞对铁死亡敏感性增加(1)使用20μM Erastin对卵巢癌亲本及耐药细胞株处理24h,CCK8法评估细胞活力,与亲本细胞相比,SKOV3-Res细胞和A2780-Res细胞活力均显著降低。Erastin处理后,与亲本细胞相比,SKOV3-Res和A2780细胞中SOD和GSH水平均显著降低,MDA水平增加。细胞铁积累是铁死亡的典型标志之一,Erastin处理后,顺铂耐药的SKOV3和A2780细胞中亚铁离子水平均显著高于亲本细胞。脂质ROS的增加是细胞发生铁死亡的重要特征,Erastin处理后SKOV3-Res及A2780-Res细胞中的ROS水平显著高于对应的亲本细胞。(2)预先使用10μM Fer-1处理细胞2h后评估Erastin的杀伤效果,发现抑制铁死亡途径挽救了Erastin对亲本和顺铂耐药卵巢癌细胞的杀伤。这些结果说明,与亲本细胞相比,顺铂耐药卵巢癌细胞具有高铁死亡敏感性。2.靶向铁死亡途径逆转卵巢癌顺铂耐药(1)Erastin增强顺铂对耐药卵巢癌细胞的杀伤相比于单独顺铂治疗,顺铂联合Erastin处理导致耐药卵巢癌细胞细胞活力显著降低,凋亡率显著增加。提示,在体外实验中Erastin增强顺铂对耐药卵巢癌细胞的杀伤。(2)Erastin增强顺铂对小鼠卵巢癌耐药模型的治疗效果与单独DDP治疗组小鼠相比,DDP+Erastin联合治疗组小鼠的腹壁转移性肿瘤更少,DDP+Erastin联合治疗组小鼠的转移瘤对腹壁的侵袭更低,腹水体积更小,中位生存时间更长。以上结果说明,Erastin与顺铂联合治疗在体外及体内实验中均表现出对顺铂耐药卵巢癌更强烈的杀伤效果。3.顺铂耐药卵巢癌细胞通过FTH1自噬降解对铁死亡易感(1)顺铂耐药卵巢癌的Erastin敏感性不依赖于铁死亡防御系统(1)在未经Erastin杀伤的情况下,铁死亡防御系统的关键分子在SKOV3-Res细胞中的表达显著高于SKOV3-Par细胞。Erastin显著诱导了NRF2和SLC7A11的上调,且不改变SKOV3-Res细胞及SKOV3-Par细胞的表达差异。然而,Erastin对SKOV3-Res细胞中的GPX4表达呈现强烈的抑制作用。经Erastin治疗后,GPX4在SKOV3-Res细胞中的表达显著低于其亲本细胞。(2)在未经Erastin杀伤的情况下,GPX4、NRF2和SLC7A11在A2780-Res细胞中的表达显著高于A2780-Par细胞。Erastin处理导致了GPX4在A2780-Res细胞中显著下调。RT-PCR结果显示顺铂耐药卵巢癌细胞中NRF2靶基因HO1和NQO1的增加,证明了抗ROS系统活性的增强。以上结果表明,顺铂耐药卵巢癌细胞对Erastin的高敏感性似乎并不依赖于铁死亡防御系统的失活。(2)铁蛋白FTH1在顺铂耐药卵巢癌细胞中下调经Western Blot检测转铁蛋白FTL1及FTH1发现,与亲本细胞相比,SKOV3-Res和A2780-Res细胞中FTH1蛋白水平增加,但FTL1蛋白水平没有增加。Erastin处理后FTH1和FTL1的蛋白表达受到抑制,但顺铂耐药卵巢癌细胞中FTH1的表达水平仍低于其亲本细胞。RT-PCR结果显示,与亲本细胞相比,顺铂耐药细胞中FTH1的m RNA水平没有显著差异。这些数据表明了FTH1受到转录后调节的可能性。(3)FTH1在顺铂耐药卵巢癌细胞中降解增加(1)以10μ/m L CHX处理细胞阻断新蛋白的合成,以未经CHX处理的细胞中FTH1蛋白的表达为起始标准值,发现顺铂耐药卵巢癌细胞中FTH1蛋白的降解率与亲本细胞相比显著增加。(2)在顺铂耐药卵巢癌细胞中恢复FTH1蛋白表达后,顺铂耐药卵巢癌细胞对Erastin诱导的铁死亡敏感性降低。表明顺铂耐药卵巢癌细胞可能通过促进FTH1的降解而增加LIP中游离铁离子的水平,可能是铁死亡敏感性增加的原因。(4)顺铂耐药卵巢癌细胞自噬水平增加(1)通过透射电镜观察了顺铂耐药卵巢癌细胞及亲本细胞的自噬小体情况,发现SKOV3-Res及A2780-Res细胞的自噬小体较对应亲本细胞增加。通过免疫荧光染色检测了顺铂耐药卵巢癌细胞及亲本细胞中自噬标志物LC3b的表达情况,发现SKOV3-Res及A2780-Res细胞的LC3b表达高于对应亲本细胞。说明顺铂耐药卵巢癌细胞维持较高的自噬水平。(2)使用自噬抑制剂3-MA处理后,Western Blot检测FTH1蛋白的表达情况,发现阻断自噬恢复了FTH1的蛋白表达。提示顺铂耐药卵巢癌细胞的高自噬水平导致了FTH1的蛋白降解。(3)3MA处理导致SKOV3-Res和A2780-Res细胞对Erastin杀伤的敏感性降低。上述结果提示,高自噬水平导致的FTH1降解介导了顺铂耐药卵巢癌细胞的铁死亡敏感性。4.顺铂耐药卵巢癌细胞中AKT1缺失介导FTH1自噬降解(1)基于GEO数据库筛查卵巢癌顺铂耐药差异基因通过对GEO数据库GSE23603中17例CR患者和10例IR患者的测序结果进行比对,发现IR患者的测序结果中自噬抑制分子AKT1显著降低。KEGG富集分析表明,CR及IR患者差异基因在MAPK及PI3K-AKT途径中富集。IR患者卵巢癌组织中AKT1表达显著下调。(2)AKT1缺失与卵巢癌预后的关联分析TCGA数据库分析AKT1表达水平与卵巢癌预后的关系,发现AKT1低表达可能预示着较短的生存时间和不良预后。生存分析发现,卵巢癌患者中AKT1的表达缺失与低总生存率、低疾病特异性生存率及更短的无进展间隔有关。这些结果说明,AKT1的丢失是卵巢癌的不良预后因素。(3)AKT1缺失上调顺铂耐药卵巢癌细胞自噬水平在SKOV3-Res和A2780-Res细胞中转导外源性AKT1时,p ULK1降低,LC3b表达增加,表明顺铂耐药细胞通过下调AKT1维持自噬。恢复AKT1表达后耐药卵巢癌细胞中FTH1的表达被挽救。在顺铂耐药的卵巢癌细胞中恢复AKT1表达后,Erastin诱导的细胞铁死亡减少。表明AKT1的丢失可能是顺铂耐药卵巢癌细胞对铁死亡诱导剂高度敏感的原因,这是由p-ULK介导的FTH1自噬降解引起的。结论:1.AKT1的缺失导致顺铂耐药卵巢癌细胞维持高自噬水平;2.AKT1缺失介导的FTH1自噬降解导致顺铂耐药卵巢癌细胞对铁死亡敏感;3.靶向铁死亡可能是逆转卵巢癌顺铂耐药的潜在途径。