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目的 应用CRISPR/cas9技术构建敲除CD19的Raji-Luc淋巴瘤细胞，并对其免疫逃逸能力进行初步验证。方法构建PB-CRISPR-CD19小向导RNA(small guide RNA, sgRNA)质粒，筛选最优的sgRNA序列，用pCAG-PBase转座Ferrostatin-1酶、PB-combined remediationCD19 sgRNA及PB-CRISPR-Cas9共同电转染Raji-Luc细胞，采用流式分选和极限稀释法筛选得到稳定敲除的单克隆细胞株。经过基因序列检测对敲除效果进行验证；酶标仪检测细胞系表面荧光素酶的表达情况；以实验室前期构建的CD19 CAR-T和CD38 CAR-T作为效应细胞，用荧光素酶化学发光法验证Raji-Luc CD19 KO细胞株的SAHA体内实验剂量免疫逃逸能力。结果 电转染制备的Raji-Luc CD19 KO细胞转染效率较高，筛选所得两组单克隆细胞敲除效率均达到99%以上，与原始Raji-Luc细胞的荧光素酶表达无显著差异，且不能激活CD19 CAR-T细胞对其进行杀伤。结论 成功构建了Raji-Luc CD19 KO淋巴瘤细胞系。

目的 探讨驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的表达及对Eca109细胞生物学行为和铁死亡的影响。Blood-based biomarkers方法 通过生物信息学分析预测KIF20A在ESCC中的表达。构建KIF20A敲低/过表达Eca109细胞系，实验分组：对照组，KIF20A敲低组，KIF20A过表达组。通过CCK-8法，Transwell侵袭实验，细胞划痕实验检测KIF20A对Eca109细胞增殖，迁移能力的影响。采用RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导建立铁死亡应激模型，检测谷胱甘肽（glutathione,GSH），丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果 和对照组比较，KIF20A敲低组细胞增殖活力降低（P <0.05）,KIF20A过表达组细胞增殖活力增加（P <0.05）。与对照组比较，KIF20A敲低组细胞侵袭及迁移能力降低（P <0.05）,KIF20过表达组细胞侵袭及迁移能力增加寻找更多（P <0.05）。RSL3诱导处理后，KIF20A敲低组细胞裂解液中GSH含量低于对照组（P <0.05）,MDA含量高于对照组（P <0.05）;KIF20A过表达组细胞结果与之相反。结论 KIF20A在ESCC中高表BI 10773 molecular weight达，其在Eca109细胞中发挥着促进增殖、侵袭、迁移及抑制铁死亡的作用。

炎症性肠病(IBD)是一种终生伴随的慢性肠道疾病,超过20%的IBD患者会发展结直肠癌;它已从西方化疾病演变为全球性疾病,预计我国2025年患病数可达150万例。IBD的发展造成肠梗阻、肠穿孔和营养不良,更有严重者累及肝胆炎症、关节炎和皮肤疾病等。多种因素作为IBD诱因并促进疾病发展,如Th17和Treg细胞介导的肠粘膜免疫失衡,胆汁酸与氨基酸代谢途径障碍,肠杆菌科丰度提高、厚壁菌门丰度减少为主要表现的肠道菌群紊乱等。葛根素是一类具有抗炎、抗癌和改善心脑血管功能等生物活性的异黄酮。本文通过微生物测序和代谢组学技术探究葛根素对溃疡性结肠炎的保护作用机制。主要的研究结果如下:葛根素的干预能使溃疡性结肠炎小鼠结肠长度得到恢复,减轻结肠隐窝损伤;使组织学评分和疾病活动指数评分下降;抑制促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的浓度;降低粪便含水量,改善腹泻,减轻结肠炎。葛根素提高肠道微生物的多样性,抑制Listeria、Alistipes、Prevotella copri、Enterobacteriaceae、Veillonella等炎性致病菌,促进S24-7(一种拟杆菌)等菌群的发展,同时提高了Lactobacillaceae、Erysipelotrichacea、Bacteroidaceae、Deferribactselleckchemeraceae和Prevotellaceae水平的变化,从而调节结肠炎小鼠微生物生态平衡,缓解结肠炎。葛根素改变结肠炎小鼠肠道代谢物水平及代谢途径:它提高了结肠炎小鼠中色氨酸衍生代谢物3-羟基邻氨基苯甲酸(3-HAA)、吲哚酚和吡啶酸水平,调节色氨酸代谢中的犬尿氨酸途径、吲哚途径的代谢紊乱;提高6-羟基烟酸、鸟苷和4-羟基苯甲酸水平以调节烟酸和烟酰胺代谢、嘧啶代谢和泛醌合成途径。同时,葛根素提高长链脂肪酸(十二烷二酸、二十二碳六烯酸、异油酸、油酸)、中链脂肪酸(壬二酸、癸二酸)的水平。葛根素单独摄入和葛根素及色氨酸共同摄入能使大鼠结肠长度得到恢复,减轻结肠隐窝损伤,使组织学评分和疾病活动指数评分下降,减轻结肠炎。葛根素组及葛根素联合色氨酸组,可调节色氨酸代谢途径的5羟色胺和吲哚酚水平,烟酸途径中的烟酸、烟酰胺、6-羟基烟酸水平,赖氨酸代谢途径的赖氨酸和哌啶酸水平。另外,单独的葛根素组对大鼠结肠炎代谢物及途径作用:调节了腺苷、肌苷(嘌呤代谢)、α-亚麻酸(多不饱和Bio-imaging application脂肪酸代谢)、谷氨酰胺(谷胱甘肽代谢)、N-乙酰神经氨酸、N-乙酰基-D-葡萄糖胺(氨基糖和核苷酸糖代谢途径)的代谢水平,这些代谢物是合成维生素、氨基酸及脂肪酸的原料。研究葛根素组和葛根素联合色氨酸组对溃疡性结肠炎大鼠肠道运动的影响,结果表明两组物质上调结肠的水通道蛋白AQP-3表达量以降低大鼠粪便含水量;降低粪便p H值和肠道通透性;延长结肠推进时间和胃肠通过时间,腹泻症状改善。同时,上调血清素转运蛋白SERT的表达量,它终止5-羟色胺的功能并降低胞外水平以抑制肠粘膜组织摄取5-HT,缓解肠道ABT-199采购运动障碍。补充色氨酸增加其代谢物5-HT在肠腔和组织的水平,导致联合干预对肠道运动障碍的作用不明显。

目的胃癌（GC）严重影响人类的健康生活，研究表明其与丝氨酸/甘氨酸代谢密切相关。丝氨酸/甘氨酸代谢对于肿瘤细胞的增殖能力具有重要影响。本文通过一种基于随机和非梯度系统的势能景观所建立的大型代谢网络动力学建模方法，构建了一个稳定的胃癌细胞代谢动力学模型。基于对模型的调控，定量分析丝氨酸/甘氨酸代谢影响胃癌细胞增殖的动力学机制selleck合成。方法对一般代谢网络动力学方程添加随机噪声，通过随机动力学分解得到代谢网络参数空间的李雅普诺夫（Lyapunov）函数。进一步减少与BLZ945 IC50随机波动相关的Lyapunov函数的变化，从而得到稳定的代谢网络。结果 在动力学参数不足的情况下，成功构建了胃癌Flow Cytometers细胞代谢网络的动力学模型。当胞外丝氨酸可用时，模型优先消耗丝氨酸；当甘氨酸生成丝氨酸的速率增加时，模型显著上调生成SAM和SAH的稳态通量。结论 本文证明了胃癌细胞对于丝氨酸的优先摄取以及丝氨酸/甘氨酸转化速率对SAM生成的重要作用，其可能通过调节细胞甲基化进程影响胃癌细胞的增殖能力，为靶向丝氨酸/甘氨酸代谢的癌症治疗提供了新的思路和方向。

目的:探索鼻部淋巴瘤患者鼻腔分泌物中细菌的分布特点。方法:回顾性分析青岛大学附属医院2019年1月—2022年6月就诊的86例鼻部淋巴瘤患者与39例健康体检Immune enhancement人员总鼻道的鼻分泌物的细菌培养结果，分析和比较鼻部淋巴瘤与健康人群鼻腔细菌分布的差异。结果:健康人群鼻部细菌以棒状杆菌最多(38.90%),其次为凝固酶阴性葡萄球菌(31.95%)、表皮葡萄球菌(15.28%)、金黄色葡萄球菌(6.95%)Cobimetinib;而鼻部淋巴瘤患者鼻部细菌分布则以金黄色葡萄球菌最多(30.37%),其次为棒状杆菌(9.63%)、表皮葡PD0325901核磁萄球菌(7.41%)、凝固酶阴性葡萄球菌(6.67%)。其中81例患者检出细菌，阳性率高达94.19%(81/86)。结论:鼻部淋巴瘤患者鼻分泌物中的细菌分布与健康人相比存在显著差异，其致病菌以金黄色葡萄球菌为主，这为临床上预防和治疗鼻部淋巴瘤或合并感染提供了指导意义。

目的采用急性心肌梗死后慢性心力衰竭（CHF）方法建立CHF大鼠模型，探讨强心汤是否通过调控miR-125b-5p从而抑制核因子κB（NF-κB）介导的炎性因子的表达以保护心血管内皮祖细胞，从而达到治疗CHF的目的。方法 42只SPF级SD大鼠随机数字表法分为对照组、模型组、强心汤低剂量组（6.13g/kg）、强心汤中剂量组（12.25MK-2206试剂g/kg）、强心汤高剂量组（24.50g/kg）、沙库巴曲缬沙坦组（10.42mg/kg），每组7只。除对照组外，其他各组大鼠均采用结扎冠状动脉左前降支方法建立CHF模型。造模成功分别给予相应药物灌胃，给药28d。采用心脏彩超检测各组大鼠心功能指标[左室舒张末期内径（LVEDd）、左室收缩末期内径（LVEDs）、左室射血分数（LVEF）]。HE染色观察大鼠左心室心肌组织宏观病理学变化。马松染色观察到各组大鼠心脏心肌纤维化情况。荧光原位杂交（FISH）检测大鼠左心室心肌组织miR-125b-5p在内皮祖细胞的表达情况。蛋白免疫印迹法检测大鼠左心室心肌组织脑源性神经营养因子（BDNF）、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白表达。酶联免疫吸附测定法检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（T点击此处NF-α）、白细胞介素（IL）-1β和IL-6的含量。结果 与对照组比较，模型组大鼠LVEDd、LVEDs升高，LVEF降低；心肌组织病理损伤严重，组织结构异常改变，横纹肌模糊，心肌细胞排列紊乱且部分变性坏死；心肌组织呈蓝色的胶原纤维、黏液沉积增多；左心室心肌组织miR-125b-5p平均光密度明显升高；左心室心肌组织BDNF蛋白表达减少，p-NF-κBp65/NF-κBp65值增加；TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显增加（P＜0.05）。与模型组比较，强心汤中、高剂量组和沙库巴曲缬沙坦组大鼠LVEDd、LVEDs均降低，LVEF均升高；左心室心肌组织的病理损伤改善明显，横纹肌清晰，心肌细胞排列整齐有untethered fluidic actuation序，细胞坏死减少；心肌组织呈蓝色的胶原纤维、黏液沉积减少，心肌纤维化情况明显减少；左心室心肌组织miR-125b-5p平均光密度明显降低；左心室心肌组织BDNF蛋白表达增加，p-NF-κBp65/NF-κBp65值降低；TNF-α、IL-1β和IL-6含量明显降低（P＜0.05）。结论 强心汤能够降低miR-125b-5p表达，抑制NF-κB通路的激活，降低促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6的表达，减轻心肌炎性反应、病理损伤及减少心肌纤维化，最终保护心血管内皮，改善心功能，从而治疗CHF。

目的 探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血中T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域3(Tim-3)、程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)及T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白（TIGIT）在CD4~+T和CD8~+T细胞上的表达情况及其与DAS28评分的相关性。方法 选取2021年3月至2023年4月于宁夏医科大学总医院风湿免疫科确诊为RA患者60例为研究对象，另选取同期在宁夏医科大学总医院体检中心行健康检查者30例为健康对照组。根据DAS28-ESR评分将RA患者分为疾病活动期（疾病活动组，30例）和疾病缓解期（疾病缓解组，30例）。收集所有研究对象新鲜血液样本，采用流式细胞术检测3组外周血中Tim-3、PD-1和TIGIT分子分别在CD4~+T细胞和CD8~+T细胞上的表达情况。结果 疾病活动组患者的病程长于疾病缓解组，且两组中女性多于男性（P均<0.05）。RA患者疾病活动组中DAS28评分、白细胞介素6(IL-6)、红细胞沉降率（ESR）、C-反应蛋白（CRP）、补体3(C3)和类风湿因子（RF）水平均高于疾病缓解组（P均<0.05）。而抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、IgG、IgA和IgM在两组患者中差异均无统计学意义（P均>0.05）。RA患者疾病活动组和疾病缓解组RF、IL-6、ESR和CRP均高于健康对照组（P均<0.05）。RA疾病活动组患者中Tim-3、Hepatocyte nuclear factorPD-1和TIGIT在CD4~+T细胞上的表达以及PD-1和TIGIT在CD8~+T细胞上的表达均高于健康对照组（P均<0.05）。RA患者疾病缓解组Tim-3、PD-1和TIGIT在CD4~+T细胞上的表达，以及PD-1和TIGIT在CD8~+T细胞上的表达均低于疾病活动组（P均<0.05）。健康对照组和疾病缓解组间Tim-3、PD-1和TIGIT分子表达差异均无统计学意义（P均>0.05）。CD4~+T细胞表达Tim-3(r=0.584,P<0.001)、PD-1(r=0.525,P<0.001)和TIGIT(r=0.576,P<0.001)分子与DAS28评分呈正相关。CD8selleckchem~+T细MRTX849核磁胞表达PD-1(r=0.464,P<0.001)和TIGIT(r=0.620,P<0.001)分子与DAS28评分呈正相关。结论 Tim-3、PD-1和TIGIT在CD4~+T细胞和CD8~+T细胞上的异常表达影响RA患者的病情活动，这些异常表达的分子可能作为评价RA患者病情活动度的指标。

目的 探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及分子机制。方法 体外培养大鼠肾小球足细胞，阿霉素诱导建立足细胞损伤模型Alpelisib说明书，分为：空白组、模型组、淫羊藿苷联合地塞米松组及氯喹组。免疫荧光法测定足细胞特异性骨架蛋白synaptopodin的表达；转染mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系，激光共聚焦显微镜观察足细胞Emricasan使用方法内自噬流的强弱；透射电镜观察足细胞内自噬体、自噬溶酶体的变化；Western Blot法检测足细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62及自噬信号通路蛋白PTEN、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达。结果 与模型组比，淫羊藿苷联合地塞米松组的synaptopodin的表达升高（P<0.05）；足细胞内自噬流水平、自噬体及自噬溶酶体数量均增加（P<0.01）; LC3-Ⅱ、PTEN的表达上调（P<0.01），但p62、pPI3K、p-Akt、p-mTOR的表达下调（P<0.01）。与淫羊藿苷联合地塞米松组比，氯喹组synaptopodin的表达降低（P<0.05）；足细胞内自噬流的水平降低；自噬体数量增加（P<0.genetic phenomena05），自噬溶酶体的数量减少（P<0.01）；且LC3-Ⅱ和p62表达同步升高（P<0.05,P<0.01），但PTEN、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达无明显变化（P>0.05）。结论 淫羊藿苷联合地塞米松可能通过激活PTEN，抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路，增强足细胞自噬水平，达到保护足细胞的作用。

目的 探讨SOX9对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖的影响和分子机制。方法采用免疫组化EnVision法检测ESCC组织和癌确认细节旁正常组织中SOX9的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。对过表达SOX9的Eca109-SOX9细胞和Eca109-vector进行全转录芯片检测。qRT-PCR技术检测TE-1和干扰SOX9表达的TE-1细胞中差异基因的表达。Western blot法检测干扰和过表达SOX9后活化/非磷酸化β-catenin蛋白表达。使用Wnt抑制剂LGK974处理不同ESCC细胞后,通过CCK-Stand biomass model8法检测细胞增殖能力的变化。结果 SOX9在ESCC组织(4.58±3.04)中的表达显著高于癌旁正常组织(1.56±2.08,P<0.001)。SOX9表达与ESCC分化程度和浸润深度有关(P<0.05)。生存分析显示,SOX9高表达患者的总生存率明显低于低表达者(P <0.05);生物信息学分析发现AXIN2、FZD7和WNT5A在Eca109-SOX9细胞中的表达明显高于对照组;使用siRNA干扰SOX9后,AXIN2、FZD7和WNT5A的mRNA表达水平及活化/非磷酸化β-catenin的蛋白表达水平均降低,过表达SOX9则活化/非磷酸化β-catenin表达增加;经不同浓度LGK974处理的TE-点击此处1和Eca109-SOX9细胞增殖能力均显著降低,而低表达SOX9的Eca109-vector细胞增殖能力未见明显改变,且SOX9蛋白表达不受LGK974影响。结论 SOX9在ESCC中高表达,并可通过活化Wnt/β-catenin信号通路促进ESCC增殖,提示SOX9有望成为ESCC的预后标志物和药物治疗靶点。

目的 研究沙库巴曲缬沙坦Hellenic Cooperative Oncology Group与缬沙坦对顽固性心力衰竭患者氨基末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)、6分钟步行距离(6MWD)及心功能的影响。方法 选取2020年5月—2022年11月郑州大学第一附属医院收治的顽固性心力衰竭66例患者，在常规治疗的基础上，将采用缬沙坦治疗的33例作为对照组，将采用沙库巴曲劼沙坦治疗的33例作为观察组。对比两组患者接受治疗后的NT-proBNP指标、6MWD和心功能恢复有效率。结果 治疗前，两组患者的NT-pro BNP水平比较无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后NT-pro BNP(980.54±381.56)pg/mL,明显低于对照组患者[(1205.12±400.52)pg/mL](P<0Stem Cells & Wnt抑制剂.05);两组治疗前selleck LY2940026MWD差距无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后6MWD明显高于对照组(P<0.05);观察组治疗后总有效率84.85%,高于对照组[60.61%],组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本研究结果显示沙库巴曲缬沙坦治疗顽固性心力衰竭，具有较为理想的治疗效果。