Author: admin

人参皂苷（GS）是人参的主要药理活性成分，主要由糖和非糖化合物的半缩醛羟基组成，是一种多糖衍生物。目前已被分离和鉴定出的人参皂苷有100多种，按化学结构可分为原人参三醇（PPT）:Rg1,Re,Rg2,Rh1和Rf；原人参二醇（PPD）:Rb1,Rb2,Rd,selleck产品Rg3和Rh2；齐墩果酸衍生物：Ro。国内外研究发现，GS具有多种药理活性，包括抗炎、抗癌、治疗创伤愈合、心血管保护和神经保护等。缺血性脑卒中主要是由脑血管局灶性堵塞引起的，从而引起严重的神经损伤，是世界范围内死亡和残疾的主要原因之一。脑卒中发病机制复杂，具有复发率高、致残率高、致死率高等特点。GS对缺血性脑卒中的保护作用比较确切，本文主要从其作用机制进行综述。(1)抑制钙超载：GS通过抑制NMDAR1和CREB，进而抑制钙超载，修selleck复脑损伤；(2)抗氧化应激：GS能够促进Nrf2信号通路，激活HO-1，减少ROS，发挥抗氧化应激的作用；(3)抗炎：GS通过下调TLR4/NF-κB信号通路，抑制TNF-α,IL-1β和ICAM-1的表达减少神经炎症；(4)抗焦亡：GS通过激活Nrf2/HO-1信号通路，使胱天蛋白酶1等的表达受到抑制，此外还可通过降低GSDMD的表达抑制细胞凋亡；(5)抗凋亡：GS下调Bax、胱天蛋白酶3，抑制细胞凋亡；(6)修复血脑屏障：GS通过PI3K/Akt信号通路，激活Nrf2来减少TJ进而达到修复血脑屏障的作用；(7)促进血管新生：GS通过PI3K/Akt信号通路来促进VEGF的表达，促进血管新生；(8)调节肠道菌群：GS通过抑制脑缺血再灌注损伤，时使其导致的肠道菌群减少。综上所述，GS可通过抑制钙超载、抗氧化应激、抗炎、抗焦亡、抗凋亡、修复血脑屏障、促进血管新生及调节肠道菌群等methylomic biomarker治疗缺血性脑卒中。本文对GS在治疗缺血性脑卒中作用及机制进行综述，以期为其临床应用及研究提供参考。

目的 探讨盐酸伏诺拉生联合阿莫西林在胃食管反流病伴幽门PR-171分子式螺杆菌（Hp）感染治疗中的应用效果。方法 选取某院2021年7月～2022年2月收治的60例胃食管反流病伴Hp感染患者，随机分为观察和对照两组，各30例。观察组患者采用盐酸伏诺拉生联合阿莫西林抗生素治疗，对照组患者常规PPI抑酸四联疗法根除幽门螺杆菌。比较两组患者治疗1个月后临床疗效、治疗前后症状积分、Hp根除率及复发情况、不良反应发生情况。结果 观察组治疗后显效16例、有效13例、无效1例，临床总有效率为96.67%，对照组治疗后显效7例、有效15例、无效8例，临床总有效率为73.33%，观察组显著高于对照组（P <0.05）；治疗后观察组临床症状积分为（0.32±0.43）分，对照组临床症状积分为（0.92±0.87）分，两组患者临床症状积分同治疗前比较均降低，且观察组低于对照组（P <0.05）；Spinal biomechanics观察组患者Hp根除根除率为93.33%，显著高于对照组70.00%(P <0.05)，随访3个月观察组疾病复发率为10.00%，显著低于对照组46.67%(P<0.05)；观察组治疗后发生头昏1例、便秘1例、恶心1例，总发生率为10.00%，对照组发生头昏1例、腹泻1例、恶心2例，总发生率为13.33%，两组患者不良反应总发生率比较，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 盐酸伏诺拉生联合阿莫西林治疗胃CCRG 81045体外食管反流病伴Hp感染效果确切、减轻患者临床症状、提高Hp根除率，具有一定的安全性，但由于盐酸伏诺拉生在我国应用时间短，值得深入探索。

支气管哮喘（简称哮喘）prostatic biopsy puncture是一种临床常见的呼吸系统疾病，以气道出现慢性炎症反应为主要特征，发病机制繁杂，治疗Caspase抑制剂周期漫长，缠绵难愈，且无特效药。氧化应激是哮喘发病机制研究中的新热点，也是其治疗的潜在关键靶标。生理状况下，体内氧化与抗氧化系统处于动态平衡，两者相互拮抗共同维持机体正常生命活动。哮喘发病阶段，活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）等氧化产物过量产生，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）等抗氧化剂含量降低，氧化程度超出氧化物的清除，使氧化应激水平大幅提高。另外，ROS的过量生成，会激活氧化应激相关信号通路，产生促炎因子，加剧炎症反应。从而导致哮喘患者肺部和气道组织损伤。近年来，中医药在哮喘治疗中的优势得到国内外专家学者的关注，尤其在调节氧化还原平衡缓解哮喘患者氧化应激、减少炎症反应等方面已取得显著成效。中医药一方面通过抑制丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）、核转录因子-kappa B（NF-κB）相关信号通路，从源头上降低氧化产物和促炎因子的含量；另一方面通过激活核因子E_(2)相关因子2（Nrf2）相关信号通路，上调抗氧化酶的水平，增强抗氧化系统以中和过量堆积的氧化产物。因此，以中医药调节氧化平衡状态作为诊疗思路，可能是未来防治哮喘的新手段、新方向。文章对氧化应激相关通路参与哮喘发病机制进行系统阐述，同时对中药提取物、中药复方调控氧化应激相关通路治疗哮获悉更多喘的最新研究进行梳理，以期为中医药防治哮喘临床和基础研究的开展提供更充分、更坚实、更科学的理论依据。

目的 研究芪苓益肾通络方含药血清对肾小球系膜细胞环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶(PK)G信号通路的作用机制。方法 30只SD大鼠随机分为健康组(selleckchem健康大鼠)、通络方组(芪苓益肾通络方干预)、西药组[西药盐酸苯钠普利片(洛汀新)及格列喹酮比(糖适平干预)],每组10只，制备含药血清。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡。将HMCs细胞分为空白组(5.6 mmol/L低糖+10%健康大鼠血清)、肾病组(30 mmol/L高糖+10%健康大鼠血清)、低剂量组(30 mmol/L高糖+5%通络方组大鼠血清+5%的健康大鼠血清)、高剂量组(30 mmol/L高糖+10%通络方组大鼠血清)及对照组(30 mmol/L更多高糖+10%西药组大鼠血清)。MTT检测HMCs细胞OD值；流式细胞仪检测HMCs细胞凋亡率；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HMCs细胞中核转录因子(NF)-κB、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1水平；黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD),硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA);Western印迹测HMCs细胞中cGMP、PKG蛋白表达。结果 与空白组相比，肾病组细胞OD值升高，NF-κB、MCP-1、MDA增加，SOD、cGMP、PKG降低，差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率无明显差异(P>0.05);与肾病组相比，低剂量组细胞OD值及NF-κB、MCP-1、MDA水平降低，SOD、cGMP、PKG增加，细胞凋亡率升高，差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量组相比，高剂量组与对照组细胞OD值及NF-κB、MCP-1、MDA水平降低、细胞凋亡率升高，SOD、cGMP、PKG水平增加，差异有统计学意义(P<0Neuroscience Equipment.05);与高剂量组相比，对照组细胞增殖、凋亡、NF-κB、MCP-1、MDA、SOD水平比较无明显差异(P>0.05),cGMP、PKG蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论 芪苓益肾通络方通过刺激cGMP的表达，进而激活PKG,改善炎性及氧化应激水平，调控高糖诱导的肾小球系膜细胞的生物学行为，对肾功能起到保护作用。

目的:本试验拟采用脏腑推拿治疗术,进行代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并情绪障碍的干预试验,旨在为脏腑推拿疗法治疗代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并随情绪障碍的应用推广提供实证证据。方法:依据纳入标准收录72例于长春中医药大学附属医院推拿科就诊的代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并情绪障碍患者,随机分为治疗组与对照组,两组各36例。对照组予以常规治疗方式干预,包括MS对应各组分药物干预与健康生活方式宣教,治疗组在常规治疗方式干预的基础上,予以脏腑推拿治疗日1次,连续6天,休息1天,为1个疗程,治疗周期共4个疗程。比较两组治疗前后:腰围(WC)、腰臀比(WHR)、身体质量指数(BMI)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、简明健康状况调查量表(SF-36)及中医证候积分量表,进Canagliflozin核磁行统计分析,客观评价。结果:试验结束后,治疗组失访4例,对照组失访3例,最终有效病例为65例,试验结果如下:(1)试验前患者资料差异性分析:比较两组患者性别、年龄、BMI、WC、WHR、HAMD、HAMA、SF-36(生理功能、生理职能、躯体疼痛、总体健康、活力、社会功能、情感职能、精神健康)、中医证候积分差异性,结果显PUN30119使用方法示治疗前各指标组间比较差异无统drug-medical device计学意义(P>0.05),具有可比性。(2)治疗结果:治疗后两组患者BMI、WC、HAMA评分、HAMD评分、中医证候积分较治疗前降低,生理职能、活力、精神健康均较治疗前升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组躯体疼痛、社会功能评分有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组WHR较治疗前有所降低,生理功能、总体健康、活力、情感职能评分较治疗前有所升高,差异有统计学意义(P<0.05);躯体疼痛、社会功能评分较治疗前升高,但其差异无统计学意义(P>0.05)。对照组WHR较前有所下降,生理功能、躯体疼痛、总体健康、社会功能、情感职能评分较前有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。组间比较显示,治疗组在降WC、HAMA评分、HAMD评分、中医证候积分,提升总体健康方面优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗组HAMD总有效率为46.88%,对照组总有效率为27.27%,组间比较P<0.05;治疗组HAMA总有效率为71.88%,对照组HAMA总有效率为39.39%,组间比较P<0.05;治疗组中医证候积分总有效率为75.00%,对照组总有效率为66.66%,组间比较P<0.05。提示治疗组相较于对照组在抑郁障碍、焦虑障碍及中医证候三方面均疗效更优,且差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)在治疗过程中及疗程结束后患者无不适症状及不良反应,生命体征无异常。结论:(1)脏腑推拿手法是代谢综合征(痰浊瘀阻型)合并情绪障碍的有效治疗方法,能够有效改善患者情绪焦虑状态与代谢水平,提高生活质量。(2)本组病例经推拿治疗后,未发现有明显的副作用不良反应,具有较高的安全性,是一种有广泛应用前景的治疗方式。

目的 分析过敏性紫癜(HSP)患儿幽门螺MK-1775分子式杆菌(Hp)感染对补体系统及炎症指标的影响。方法 选取2017年4月-2020年4月中国医科大学附属盛京医院收治的82例HSP患儿为研究对象，根据~(14)C-尿素呼气试验结果分为Hp阳性组57例，H获悉更多p阴性组25例，分析两组患儿血清低半乳糖化IgA1(Gd-IgA1),补体片段C3a、C4a、C5a和Bb,以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素18(IL-18)水平。结果 Hp阳性组出现腹痛、呕血/便血患儿的比例显著高于Hp阴性组(P<0.05),两组出现皮肤紫癜、关节肿痛、尿蛋白阳性、血尿患儿的比例均差异无统计学意义；Hp阳性组患儿血清Gd-IgA1水平显著高于Hp阴性组(P<0.05); Hp阳性组患儿的血清补体片段C3a、C5a和BBiochemistry and Proteomic Servicesb水平显著高于Hp阴性组(P<0.05),而两组血清C4a水平比较差异无统计学意义；Hp阳性组患儿血清IL-18、MCP-1水平均高于Hp阴性组(P<0.05)。结论 Hp感染可能通过增加Gd-IgA1水平，激活补体旁路途径而促进IL-8和MCP-1的产生，进而促进过敏性紫癜的发生。

为了探究金银花-连翘治疗奶牛乳房炎的作用机制，试验采用中药系统药理学分析(TCMSP)数据库获得金银花-连翘的活性成分及相关作用靶点蛋白，并将作用靶点蛋白进一步转化为靶点基因；利用DisGeNET数据库、GeneCards数据库和NCBI数据库检索奶牛乳房炎相关基因靶点；通过String数据库和Cystoscape v3.7.1软件构建金银花-连翘的有效活性成分靶点与奶牛乳房炎疾病靶点蛋白互作(PPI)网络图；采用David数据库进行金银花-连翘与奶牛乳房炎交集靶点所涉及的Baf-A1GO功能注释与KEGG信号通路富集分析，进而探究金银花-连翘治疗奶牛乳房炎的作用机制；建立奶牛乳腺上皮细胞炎症模型，采用ELISA检测金银花-连翘水提物对相关细胞因子表达的影响。结果表明：金银花-连翘主要活性成分包括β-谷甾醇、山奈酚、木犀草素、槲皮素等；共筛选获得239个药物活性成分主要涉及基因靶点及296个奶牛乳房炎基因靶点，其中交集靶点38个，以肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、白蛋白(ALB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(CXCL8)等为主。GO功能注释到的生物进程主要包括MAP激酶活性的正调控、炎症反应、一氧化氮生物合成过程的正调控等；细胞组分主要包括细胞核、细胞质、细胞表面等；分子功能主要包括细胞因子活性、转录因子活性等。KEGG信号通路主要富集在脂质与动脉粥样硬化、IL-17信号通路等；金银花-连翘水提物在体外可显著降低IL-6、IL-1β和CXCL8水平(P<0.05),发挥抗炎作用。说明Medical exile金银花-连翘可能通过β-谷甾醇STM2457小鼠、山奈酚、木犀草素、槲皮素等活性成分调节IL-17信号通路，并作用于IL-6、IL-1β、CXCL8等靶点来治疗奶牛乳房炎。

目的 观察活血安神方对经皮冠状动脉介入（percutaneous coronary intervention,PCI）术后胸痹气滞血瘀型双心患者血脂代Chicken gut microbiota谢及炎性因子的影响。方法 将72例冠心病PCI术后胸痹气滞血瘀型双心患者按照随机数字表法分为对照组和治疗组，每组36例；对照组采用PCI术后规范化治疗，治疗组在对照组治疗基础上联合活血安神方，随访观察7周，比较两组治疗后临床症状疗效总有效率；观察两组治疗前后总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）及selleck LXH254白介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平变化，观察两组治疗过程中出现的不良反应。结果治疗后两组临床症状较治疗前均改善，治疗组总有效率为（88.9%）高于对照组（58.3%），差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前，两组血脂指标比较无差异（P>0.05），治疗后，两组TC、TG、LDL-C水平低于治疗前，HDL-C高于治疗前，且治疗组优于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；治疗前，两组的IL-6、hs-CRP水平比较无差异（P>0.05）。治疗后两组IL-6、hsCRP水平低于治疗前，且治疗组较对照组降低更明显，差异均有统计学意义（P<0.05）；两组不良反应发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 活血安神方联合西药能够改善PCI术后胸痹气滞血瘀型双心患者的临床症状，减少心绞痛发作，缓解焦虑抑郁程度，改善脂质代谢，抑制炎症反应，临床Gefitinib-based PROTAC 3临床试验疗效好。

1.研究背景及目的以多发性硬化症(Multiple Sclerosis,MS)为代表的退行性疾病是发生于中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)的一种由脱髓鞘诱发的神经变性疾病。目前针对这种神经变性,其中一种干预策略就是通过增强神经干细胞分化为可髓鞘化的少突胶质细胞。在此过程中,中枢神经系统中的免疫细胞—小胶质细胞对神经干细胞定向分化为少突胶质细胞的过程具有重要的作用。具体来说,小胶质细胞介导的炎症微环境影响着神经干细胞分化的命运。在不同疾病状态下,小胶质细胞可表现为促炎表型M1型和抗炎表型M2型。M1型小胶质细胞释放的促炎因子具有组织损伤的作用,在此条件下神经干细胞多分化为形成瘢痕的星形胶质细胞。M2型小胶质细胞介导的炎症消散因子有利于神经干细胞分化为神经元或少突胶质细胞,其中M2型小胶质细胞释放的Chi313、TGF-β等可促进神经干细胞定向分化为少突胶质细胞。因此,通过调节小胶质细胞介导的微环境从而增强内源性少突胶质细胞生成过程来促进髓鞘再生,已成为延缓、阻止或逆转MS进展的最有希望的措施之一。目前,大量的临床和实验研究也已经在促进神经干/祖细胞分化为少突胶质细胞从而促进髓鞘再生方面取得了积极的成果。鉴于小胶质细胞与神经干细胞及其子代的密切联系,特别是它们可以分泌的无数分子影响了干细胞的分化命运,因此,可以认为小胶质细胞是调节神经干细胞定向分化为少突胶质细胞从而实现髓鞘再生的一种重要的细胞。在之前的研究中我们对双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)促进髓鞘再生的有效性进行了研究,显示小胶质细胞可能是DHA发挥作用的重要效应细胞,但DHA是否依赖小胶质细胞发挥髓鞘再生的药效尚不清楚。并且在前期研究中发现在DHA可促进EAE和CPZ诱导的模型小鼠胼胝体区域少突胶质细胞系新生的作用,提示DHA可能具有在源头上促进少突胶质细胞生成的作用。鉴于促进神经干细胞定向分化是少突胶质细胞系生成的源头动力,我们提出假说:DHA依赖小胶质细胞促进神经干细胞分化发挥促进髓鞘再生的作用,从而促进脱髓鞘导致的神经退行性疾病患者的白质修复。基于上述分析,我们通过建立“小胶质细胞-神经干细胞”单元,建立消融小胶质细胞的EAE模型小鼠,在给药DHA后,研究DHA是否通过“小胶质细胞-神经干细胞”单元促进髓鞘再生,发挥治疗EAE的药效。另外,对DHA是如何通过“小胶质细胞-神经干细胞”单元发挥促进髓鞘再生的机制进行探索。首先对DHA促进小胶质细胞作用于神经干细胞的桥梁分子进行探索,并进一步深入探索DHA是如何促进小胶质细胞表达此桥梁分子,其分子通路为何,并通过实验反向验证DHA发挥药效和此通路的依赖关系。2.研究方法及内容2.1DHA通过小胶质细胞重塑炎症微环境的药理作用研究(1)利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)100ng/mL刺激小胶质细胞4h模拟小胶质介导的炎症失衡微环境,DHA给药24h,设置低、中、高三个剂量,分别为1μM、2μM、4μM。收集上清液用于ELISA实验,Trizol裂解细胞5分钟用于qRT-PCR实验,于-20℃保存。流式细胞术与免疫荧光收样品及时处理检测。利用qRT-PCR和ELISA实验方法检测小胶质细胞介导的促炎因子IL-1 β、TNF-α和抗炎因子IL-10 mRNA和分泌蛋白的表达情况;利用流式细胞术检测促炎小胶质细胞的比例;利用免疫荧光方法对小胶质细胞的极化情况进行检测;评价DHA对基于小胶质细胞的炎症微环境重塑的影响。(2)利用 PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库查询双氢青蒿素的结构及Canonical SMILES,将Canonical SMILES分别导入SwissTargetPrediction(http://swisstargetprediction.ch/)、SEA(https://sea.bkslab.org/)预测靶点。利用 GeneCards(https://www.genecards.org/)和 OMIM(https://omim.org/)数据库中得到疾病靶点,通过整合,去除重复值,得到疾病靶点。使用Cytoscape3.8.2软件构建“药物-作用靶点”网络。将药物-交集基因上传至相互作用数据库String(https://string-db.org/)进行蛋白相互作用网络构建(PPI)数据库;将药 物-疾病交集基 因 上传 至 DAVID 数据 库(https://david.ncifcrf.gov/summary.j sp),基 因 标 识 符 选 择OFFICIAL_GENE_SYMBOL,物种设置为:Homo Sapiens。为阐明双氢青蒿素治疗神经炎症的靶点在信号通路中进行KEGG通路富集分析。选取GO功能条目和KEGG通路条目(P<0.05)作为双氢青蒿素治疗神经炎症的主要基因功能富集过程和信号pain biophysics通路,预测双氢青蒿素治疗神经炎症的作用机制。(3)利用Western Blot的技术对网络药理学预测的关键通路中关键基因Axl、p-Axl(Y702)、PI3K、p-PI3K(Tyr317)、Akt、p-Akt(Ser473)、mTOR、p-mTOR(S2448)表达情况进行实验验证。2.2DHA通过小胶质细胞促进EAE模型髓鞘再生的药效评价(1)利用MOG35-55诱导EAE的模型,造模当天及第二天,对小鼠进行腹腔注射0.5PTX(500ng/只)。在免疫后第8天小鼠逐渐开始发病,给予EAE模型小鼠含有0.029%PLX3397(一种能够穿过血脑屏障口服的选择性CSF1R/c-kit的抑制剂)的小鼠维持饲料,以对其小胶质细胞进行消融;喂养PLX3397饲料10天后给药DHA,共给药10天。自造模第1天开始对小鼠进行体重和状态的检测,以体重和临床KONOS评分作为药效指标,在28天取材,取胸腺、脾称重;眼眶取血离心取血清-20℃保存;小鼠脑组织、腰髓组织浸泡于多聚甲醛中。(2)利用免疫组化的方法对小鼠脑组织1/3处纵截面中小胶质细胞分子标记物CD11b进行染色,以验证小胶质细胞的消融情况。(3)利用固蓝染色的方法对小鼠脑组织1/3处纵截面进行染色,观察小鼠脑组织髓鞘化程度,研究DHA是否通过小胶质细胞发挥维持髓鞘完整性、促进髓鞘再生的作用。2.3DHA通过小胶质细胞促进神经干细胞分化的活性评价(1)建立小胶质细胞-神经干细胞过继培养体系,DHA给药小胶质细胞后培养24h,弃去含药上清,加入新鲜培养基继续培养24h,将上清过继给予神经干细胞C17.2细胞中培养24h,RIPA和Trizol裂解蛋白和收集核酸,-20℃保存。(2)利用qRT-PCR和Western Blot的方法对神经干细胞分子标记物-Nestin、星形胶质细胞分子标记物-胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Portein,GFAP)、神经元分子标记物-神经元核抗原(Neuronal Nuclei,NeuN)、少突胶质细胞系分子标记物-髓鞘蛋白脂质蛋白(Myelin Proteolipid Protein,PLP)、成熟少突胶质细胞分子标记物-髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein,MBP)mRNA和蛋白进行检测,评价DHA通过小胶质细胞对神经干细胞分化的影响。取EAE小鼠侧脑室下区(Subependymal Ventricular Zone,SVZ)区域,利用免疫组化的方法分别对少突胶质祖细胞分子标记物NG2和成熟少突胶质细胞分子标记物MBP进行染色,评价DHA对神经干细胞分化为少突胶质细胞的影响。(3)利用qRT-RCR方法对小胶质细胞中miR-34a与Chi313 mRNA表达情况进行检测,利用ELISA方法检测分泌蛋白Chi313含量。以评价DHA髓鞘再生的药理作用是否与miR-34a与Chi313表达有关。2.4DHA通过“小胶质细胞-神经干细胞”单元促进髓鞘再生的机制探索(1)利用AS1517499抑制小胶质细胞STAT6的激活,在小胶质细胞中加入浓度为 100 nM 的 AS1517499,处理 24h;给药 DHA 培养 24h;LPS100 ng/mL刺激4h。处理后将贴壁的小胶质细胞利用Trizol裂解,利用qRT-PCR方法检测小胶质细胞中Chi313 mRNA表达情况,同时收集上清液对Chi313蛋白进行ELISA检测。2.3中过继方法处理神经干细胞,利用Western Blot和qRT-PCR的方法对神经干细胞EGFR激活情况以及SOX10、PLP、MBP蛋白及mRNA表达情况进行检测,验证DHA依赖于STAT6促进Chi313表达的作用,以及对神经干细胞定向少突胶质细胞通路中关键分子信号的影响。(2)利用Axl shRNA干扰小胶质细胞Axl转录,给药DHA后,利用qRT-PCR和ELISA方法检测小胶质细胞中Chi313 mRNA与蛋白的表达情况,利用Western Blot和qRT-PCR的方法对神经干细胞EGFR激活情况和SOX10、PLP、MBP蛋白及mRNA表达情况进行检测,验证DHA依赖于Axl促进Chi313表达的作用,以及对神经干细胞定向少突胶质细胞通路中关键分子信号的影响。3.研究结果3.1 DHA通过小胶质细胞重塑炎症微环境的药理作用研究1.LPS刺激小胶质细胞介导的微环境失衡其特点为大量促炎因子过表达同时炎症消散因子表达不足,因此在本节研究中我们利用LPS造模,从而模拟小胶质细胞介导的促炎微环境。实验结果显示,LPS可明显激活静息状态下的小胶质细胞,使小胶质细胞促炎因子IL-1 β、TNF-α显著增高(P<0.05),CD16/32占比显著增加(P<0.05),并显著增强iNOS的荧光强度(P<0.05)。给药DHA后,DHA可显著降低LPhttps://www.selleck.cn/products/vx-661.htmlS刺激后的小胶质细胞介导的促炎分子IL-1 β、TNF-α升高的情况(P<0.05),同时升高炎症消散因子IL-10的表达(P<0.05);流式细胞术结果表示,DHA给药后相比于模型组可显著降低CD16/32标记的M1小胶质细胞占比(P<0.05),免疫荧光结果显示DHA处理过的小胶质细胞相较于模型组标记为Arg1荧光强度增加(P<0.05),iNOS荧光强度减弱(P<0.05)。可以看出DHA可以重塑LPS介导的小胶质细胞炎症微环境,并促进小胶质细胞M1型向M2型转化。2.将神经炎症的靶点与DHA靶点相互映射,共获得药物-疾病交集基因27个;取药物-疾病交集基因,利用DAVID数据库进行GO基因功能富集分析,共筛选出275条GO条目,其中生物过程相关的有285条,细胞成分51条,分子功能39条。综合分析提示:除Axl外,PI3K也是DHA调控的关键靶点之一,而Axl/PI3K/Akt/mTOStaurosporineR通路可能是DHA重塑炎症微环境的重要通路之一。3.PI3K/Akt/m-TOR作为Axl调控的重要通路之一,其激活对促进小胶质细胞M2表型,降低促炎分子的释放有重要的作用。我们对DHA共培养后的小胶质细胞中Axl/PI3K/Akt/mTOR通路的调控情况进行实验验证.Western Blot实验结果表示,DHA给药后的小胶质细胞相较于模型组Axl、p-Axl(Y702)、p-PI3K(Tyr317)、p-Akt(Ser473)、p-mTOR(S2448)蛋白表达增高,PI3K、Akt、mTOR总蛋白表达无明显差异。表示DHA对LPS刺激下的小胶质细胞Axl/PI3K/Akt/m-TOR通路的功能具有激活作用。小结:DHA可重塑LPS介导的小胶质细胞炎症微环境,为髓鞘再生提供了条件和基础,激活Axl/PI3K/Akt/mTOR通路可能是DHA对MS有效性的的内在机制之一。3.2DHA通过小胶质细胞促进EAE模型髓鞘再生的药效评价1.免疫组化结果显示,给予含0.029%的PLX3397饲料喂养的EAE小鼠较正常饲料喂养小鼠的大脑中小胶质细胞分子标记物CD11b阳性占比明显降低,其中给予含0.029%的PLX3397饲料喂养10天后小鼠SVZ区域CD1 1b阳性占比3.93±1.11,正常饲料喂养的小鼠SVZ区域CD11b阳性占比22.64±2.61(P<0.05),说明该实验方法成功实现了对EAE小鼠的小胶质细胞的消融。灌胃给予DHA后,EAE+DHA组小鼠相比于EAE组小鼠临床KONO'S评分明显降低(P<0.01),体重明显增加(P<0.01);喂养含PLX3397饲料后,EAE+PLX3397+DHA相比于EAE+PLX3397组评分及体重无明显差异(P>0.05)。说明DHA缓解EAE模型的残疾程度及维持其体重依赖于小胶质细胞的存在。2.利用劳克坚牢蓝(Luxol Fast Blue,LFB)对小鼠脑组织进行染色,以Imag J进行计算,结果发现,EAE+DHA组LFB阳性面积8.12±1.10相较于EAE组0.66±0.63髓鞘化明显增加(P<0.05);喂养含PLX3397饲料后,EAE+PLX3397+DHA 组 LFB 阳性面积 0.92±0.48 相比于 EAE+PLX3397 组1.16±0.27没有明显差异(P>0.05),说明DHA可依赖于小胶质细胞促进EAE模型小鼠脑内髓鞘再生,维护髓鞘的完整性。小结:DHA发挥治疗EAE、缓解EAE残疾程度、促进EAE髓鞘再生及其完整性的作用,小胶质细胞是其重要条件和基础。3.3DHA依赖于小胶质细胞促进神经干细胞分化的活性评价1.在小胶质细胞上清过继培养神经干细胞试验的结果表明,DHA处理的小胶质细胞上清显著增加了神经干细胞C17.2中少突胶质细胞标记物PLP和MBP mRNA的转录和蛋白的表达(P<0.05),神经干细胞分子标记物Nestin表达的明显降低(P<0.05);但对星形胶质细胞分子标记物GFAP和神经元细胞分子标记物NeuN mRNA无明显影响(P>0.05)。说明DHA可能通过小胶质细胞促进了神经干细胞向少突胶质细胞的定向分化。2.在体外证明了 DHA可通过小胶质细胞促进神经干细胞分化为少突胶质细胞后,我们在体内对侧脑室下区(Subependymal Ventricular Zone,SVZ)少突胶质细胞祖细胞(标记为NG2)与成熟的少突胶质细胞(标记为MBP)进行了免疫组化分析。结果表示,喂养正常饲料EAE小鼠给药DHA后,较EAE组少突胶质祖细胞分子标记物NG2、少突胶质细胞分子标记物MBP阳性信号明显增强(P<0.05),利用PLX3397饲料喂养EAE小鼠消融了小胶质细胞后,DHA促进小鼠SVZ区域的NG2和MBP阳性信号增强的现象消失(P>0.05)。说明,DHA在EAE小鼠体内促进神经干细胞分化为少突胶质细胞的作用同样依赖于小胶质细胞。3.同时,DHA在体外可以抑制小胶质细胞中miR-34a的表达,促进小胶质细胞中Chi313 mRNA和Chi313蛋白的表达(P<0.05)。小结:DHA可通过小胶质细胞促进神经干细胞分化为少突胶质细胞从而促进髓鞘再生,其活性可能与影响了小胶质细胞miR-34a、Chi313的表达有关。3.4DHA通过“小胶质细胞-神经干细胞”单元促进髓鞘再生的机制探索1.在3.3中我们证明了 DHA具有明确的促进Chi313表达作用,而Chi313在神经干细胞分化为少突胶质细胞的过程中起着关键的核心作用,因此,在此部分中我们利用“小胶质细胞-神经干细胞”单元,围绕Chi313表达,基于对在神经干细胞中Chi313-EGFR-SOX10级联关系、对小胶质细胞中Axl/JAK2/STAT6/Chi313通路上的关键因子变化的分析,从正反两个角度深入探讨了 DHA促进髓鞘再生的机制。首先我们通过建立的“小胶质细胞-神经干细胞”单元,对神经干细胞表面受体p-EGFR(Y1068)、SOX10的蛋白表达情况进行研究。结果发现DHA处理过的小胶质细胞上清液过继于神经干细胞中24h后,可使神经干细胞p-EGFR(Y1068)、SOX10表达明显增强(P<0.05)。表示DHA可通过小胶质细胞激活神经干细胞表面受体EGFR,并促进神经干细胞中SOX10的表达。接下来我们对DHA处理过的小胶质细胞中Axl/JAK2/STAT6进行正向验证,结果发现DHA处理过的小胶质细胞相比于模型组p-JAK2(Y1007)、p-STAT6(Y641)表达增强(P<0.05)。JAK2、STAT6总蛋白表达无明显差异(P>0.05),(Axl的结果在第一部分已展示)结果正向验证了 DHA具有激活小胶质细胞中Axl/JAK2/STAT6通路,使小胶质细胞释放Chi313,从而激活神经干细胞EGFR-SOX10,促进神经干细胞分化为少突胶质细胞。2.在正向验证DHA具有激活小胶质细胞Axl/JAK2/STAT6通路的作用后,我们将反向验证DHA是否依赖于小胶质中Axl/JAK2/STAT6/Chi313通路发挥激活神经干细胞EGFR-SOX10,促进神经干细胞分化为少突胶质细胞的作用。研究结果表示,利用AS1517499抑制小胶质细胞中STAT6激活后,DHA丧失促进小胶质细胞表达Chi313 mRNA和蛋白的作用,同时其上清液过继于神经干细胞后,p-EGFR(Y1068)蛋白无明显变化,SOX10、PLP、MBP mRNA和总蛋白无明显变化。表示DHA依赖于STAT6的激活发挥分泌Chi313和促进神经干细胞分化为少突胶质细胞的作用。3.进一步地,我们将使用sh-RNA干扰Axl mRNA的转录,进而验证DHA是否对小胶质细胞中Axl/JAK2/STAT6通路有依赖关系。结果表示利用携带Axl shRNA的慢病毒转染小胶质细胞后,DHA丧失促进小胶质细胞表达Chi313m RNA和蛋白的作用,同时其上清液过继于神经干细胞后,p-EGFR(Y1068)蛋白无明显变化,SOX10、PLP、MBP mRNA和总蛋白无明显变化。表示DHA依赖于Axl发挥分泌Chi313和促进神经干细胞分化为少突胶质细胞的作用。小结:DHA通过激活小胶质细胞中Axl/JAK2/STAT6通路促进Chi313的释放,从而激活神经干细胞EGFR受体,促进SOX10表达,进而发挥促进神经干细胞向少突胶质细胞方向分化的作用。4.结论(1)DHA可明显缓解EAE模型小鼠的残疾程度。(2)DHA可重塑小胶质细胞介导的炎症微环境,为髓鞘再生提供了条件。(3)DHA对EAE模型小鼠髓鞘再生作用的发挥依赖于中枢神经系统中存在的小胶质细胞。(4)DHA促进EAE模型小鼠髓鞘再生的作用主要是通过促进小胶质细胞Chi313的表达,从而影响了神经干细胞的分化。(5)DHA促进EAE模型小鼠髓鞘再生的机制主要是通过激活小胶质细胞中Axl/JAK2/STAT6通路促进小胶质细胞释放Chi313,从而激活神经干细胞EGFR受体,促进SOX10的表达,进而使神经干细胞定向分化为少突胶质细胞。5.意义本研究首次揭示了 DHA依赖于小胶质细胞发挥促进EAE模型髓鞘再生的作用;验证了其促进髓鞘再生的主要环节之一为促进内源性神经干细胞分化;揭示了其发挥作用的内在分子机制。本研究为脱髓鞘类疾病的治疗提供了新的途径,对DHA的深入研究具有重要参考价值。

目的 探讨回授法结合视频的健康教育在系统性红斑狼疮（SLE）Laduviglusib研究购买患者行肾穿刺活检术中的应用效果。方法 选取2018年10月—2020年10月安徽省某三甲医院风湿免疫科收治的行肾穿刺活检术的SLE患者85例为研究对象，按照组间基线资料可比的原则分为对照组43例和观察组42例。对照组实施常规的肾穿刺活检术健康教育，观察组在对照组基础上采用回授法结合视频宣教进行健康教育。比较健康教育前后两组患者肾穿刺术相关知识掌握程度。采用焦虑自评量表（SAS），匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评估干预效果。比较两组患者术后并发症的发生率。结果 健康教育干预后，观察组患者健康教育后相关知识掌握程度优于对照组，差异有统计学Behavioral genetics意义（P<0.05）；观察组干预前后寻找更多SAS和PSQI评分差值均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组总并发症的发生率低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 回授法结合视频宣教能提高SLE患者肾穿刺活检术相关知识掌握程度，有效改善患者的负性情绪及睡眠质量，减少术后并发症。