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多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor,PIGR)是多聚免疫球蛋白(Polymeric immunoglobulin,PIG)的特异性受体。研究报道PIGR能够发挥抗病毒和抗菌的功能。本研究中,我们发现了一种含有富含半胱氨酸清道夫受体(Scselleck化学avenger receptor cysteine-rich,SRCR)结构域的新型多聚免疫球蛋白受体,将其命名为SIGR,并探究其在抗菌免疫中发挥的功能。SIGR含有一个SRCR结构域,两个IG结构域。SIGR在所检测斑马鱼的正常组织中都有表达。嗜水气单胞杆菌(Aeromonas hydrophila)刺激后,在检测组织中SIGR的表达量均发生了显著性的上调,推测SIGR可能参与斑马鱼的抗菌免疫反应。体外表达纯化了SIGR重组蛋白,进行细菌结合和凝集实验发现,SIGR可以结合细菌使细菌发生凝集。通过构建截短结构域蛋白SIGR-SRCR、SIGR-IG,对二者进行细菌结合和凝集实验selleck NMR发现,截短后的SIGR-SRCR对革兰氏阴性菌的结合、凝集能力变弱。SIGR-IG对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的结合和凝集能力未发生明显变化,推测SIGR-IG结构域对革兰氏阴性菌的结合和凝集起到关键作用,且SRGR结构域和IG结构域在结合和凝集细菌的能力上,具有一定的互补功能。为了进一步研究SIGR-SRCR和SIGR-IG的抗菌功能位点,构建缺失突变体SIGR~(△51-55)(缺失SRCR结构域保守氨基酸位点“WGTVC”)、SIGR~(△203-207)(缺少第一个IG结构域保守氨基酸位点“GxYxC”)和SIGR~(△310-314)(缺少第二个IG结构域保守氨基酸位点“GxYxC”),进行抗菌功能研究发现,突变体SIGR~(△51-55)和SIGR~(△203-207)对革兰氏阳性菌的凝集能力发生了下降,说明SRCR结构域中的保守氨基酸位点“WGTVC”和第一个IG中的保守氨基酸位点“GxYxC”对SIGR凝集革兰氏阳性菌具有重要作用。研究报道人和比目鱼的PIGR能够参与NF-κB信号通路。在ZF4中过表达SIGR,检测发现NF-κB信号通路相关分子MYD88、TRAF6、NF-κB(P65、P50)、TNF-α及下游抗菌肽Defbl1的表达均发生了上调,推测SIGR可能激活NF-κB信号通路。为了进一步确定SIGR激活NF-κB信号通路的功能位点,构建突变体SIGR~(△51-55)、SIGR~(△203-207)和SIGR~(△310-314)并在ZF4细胞中过表达,然而SIGR~(△51-55)和SIGR~(△203-207)对上述相关因子的上调没有发生显著性变化。说明结构域SRCR和IGInfectious hematopoietic necrosis virus1是SIGR调控NF-κB信号通路重要功能位点。对NF-κB信号通路下游抗菌肽Defbl1进行细菌实验,发现Defbl1能够结合、凝集和抑制细菌。扫描电子显微镜观察,Defbl1孵育后的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌,发现金黄色葡萄球菌和大肠杆菌表面膜结构严重受损,说明Defbl1能够破坏细菌细胞壁。综上所述,SIGR能够结合并凝集细菌,上调NF-κB信号通路,上调下游抗菌肽Defbl1的表达,从而破坏细菌壁的结构,对细菌进行清除,发挥抑菌功能。

为了探究槟榔应答植原体侵染的分子机理，本研究对染病槟榔与健康槟榔进行转录组比较分析。通过转录组测序共检测到表达基因24 903个，其中355个为可能的抗病基因。染病槟榔与健康槟Trichostatin A采购榔有 1 816个差异表达基因(differentially expressed genes， DEGs)，其中539个DEGs在染病槟榔中上调表达。差异表达基因的GO功能富集分析显示，DNA结合、转录调节活性、DNA结合转录因子活性等13个功能为显著性富集，表明这些功能在槟榔应答植原体侵染过程中发挥特异性作用。通过KEGG信号通路富集分析，富CP-456773价格集基因数最多的是植物与病原互作信号通路，共富集了99个DEGs；其次为植物MAPK信号通路，共富集了76个DEGs；再次为植物激素信号转导信号通路，共富集了68个DEGs，说明上述3个信号通路在应答机medial plantar artery pseudoaneurysm制中发挥了关键作用。值得注意的是，参与病原与寄主互作的99个DEGs包含29个抗病基因，其中Acat00013480、Acat00031368和Acat00027434上调表达，未来这3个基因可作为潜在抗病基因进一步研究。本研究结果可为研究槟榔与植原体互作分子机理及挖掘槟榔黄化病抗病基因提供参考依据。

光热疗法(PTT)作为一种非侵入性的癌症治疗方法,与传统的癌症治疗方法相比,光热治疗可以实现在低氧环境下杀死癌细胞,而不依赖于氧气,具有巨大的应用前景。光热疗法与光热剂(PTA)的选择有直接关系,理想的光热剂应具有较强的近红外吸收、较高的光热转换效率、良好的光稳定性和生物相容性。为此,本论文设计合成了9种基于10位-砜取代罗丹明染料,研究了取代基对此类化合物稳定性的影响,并对其光热性能进行详细探索,后续利用构建的荷瘤小鼠肿瘤模型,进一步验证了其在光声成像辅助光热治疗方面的应用。主要内容包括:(1)近红外砜罗丹明染料的合成和稳定性的研究我们成功制备了9种砜罗丹明化合物,通过核磁共振氢谱、碳谱和高分辨质谱进行表征,确定化合物的结构。紫外吸收光谱测试结果表明该类化合物在700 nm左右有较强的近红外(NIR)吸收,发射波长在730 nm左右。以化合物SO_2R2为例,化合物在CH_2Cl_2溶剂中具有较高的荧光量子产率(0.703),而在H_2O中的荧光量子产率为0.09。为了考察不同取代基对其稳定性的影响,测试了化合物在不同溶剂、p H以及光照下的稳定性,结果表明邻位取代基可PLX4032生产商以有效保护C-9位不受亲核试剂的进攻。通过对不同取代基进行筛选,发现含有CF_3基团的SO_2R2和2,6位取代的SO_wrist biomechanics2R5表现出高稳定性,而对位和间位取代的化合物稳定性较差。我们推测化合物不稳定的原因是由于C-9位容易受到亲核进攻,破坏了化合物的共轭结构,使得化合物的溶液颜色由绿色变为无色selleck S63845,并且该过程是可逆的,加入三氟乙酸后,溶液又逐渐恢复为初始绿色。(2)近红外砜罗丹明染料的光热效应和肿瘤光热治疗的研究我们利用具有较高稳定性的化合物SO_2R2进行了光热治疗方面的研究,经计算得知光热转换效率为53.06%。细胞毒性实验表明其具有低毒性和良好的生物相容性,经过计算得知SO_2R2的IC_(50)为65.82μM。细胞活/死染色实验表明化合物具有高效的光热治疗效果。SO_2R2强的光声信号和良好的生物相容性表明了其在无创监测深层组织病理过程中的潜力。为了评价化合物的肿瘤抑制效果,构建4T1荷瘤小鼠肿瘤模型,能显著抑制肿瘤生长。总之,该光热剂具有优异的光热治疗能力。我们进一步利用具有中等稳定性的化合物SO_2R6进行了可逆的光热治疗研究。光谱测试结果表明,SO_2R6表现出了p H可逆的变色响应,随着溶液p H值的增加(p H>6),溶液颜色由绿色变为无色,在酸性溶液中(p H<6),溶液颜色又恢复为绿色,p K_a约为6。化合物SO_2R6也具有一定的光热效应,计算得出光热转换效率为72.36%,并在酸性水溶液中具有良好的光热稳定性(p H<6)。因此,此类化合物可以实现p H调控的光热治疗。通过细胞毒性和细胞活/死实验表明该化合物具有良好的生物相容性,经过计算得知SO_2R6的IC_(50)为72.52μM。光声成像结果表明SO_2R6产生良好的光声信号。构建4T1荷瘤小鼠肿瘤模型,结果表明该光热剂可以成功地抑制肿瘤的生长。综上,SO_2R2和SO_2R6具有优异的光热治疗能力,可用于光声成像引导下的肿瘤的光热治疗。

近年来,光热纺织品广泛应用于光热治疗,光热杀菌及光热保健等领域。合成(类)黑色素纳米粒子(SMNPs)与天然黑色素纳米粒子(MNPs)具有相似的结构与性能,其光热、防紫外线、粘附性与生物相容性极为突出,并且由于SMNPs的化学无序,可以在其合成过程中加入其他化合物以调控SMNPs的光热性能或增加其他功能。本论文以左旋多巴(L-DA)作为SMNPs的前体与金属离子或硫堇(Th),通过一锅法自氧化聚合形成金属离子或硫堇掺杂的SMNPs,并用这些SMNPs制备光热纺织品。主要研究内容与结果如下:(1)负载纳米银/铁离子络合SMNPs的快速光热杀菌棉织物本部分在左旋多巴自氧化过程中加入Fe~(3+),合成了Fe~(3+)络合的SMNPs(Fe~(3+)-SMNPs),并利用酚羟基的还原性在Fe~(3+)-SMNPs表面原位还原生长纳米银,制备了负载纳米银的Fe~(3+)-SMNPs(Ag NPs@Fe~(3+)-SMNPs)。利用SEM与DLS对Ag NPs@Fe~(3+)-SMNPs的形貌与尺寸进行了分析,其形貌为球型,尺寸在500 nm左右。通过UV-Vis,FTIR光谱与XRD能谱对其化学结构进行了分析,结果证实了Ag NPs@Fe~(3+)-SMNPs的成功合成。并在氙灯(700 m W/cm~2)照射下研究了其分散液的光热性能,结果证实了其光热性能优于原始SMNPs。通过沉积法,利用Ag NPs@selleck Wnt-C59Fe~(3+)-SMNPs构建快速光热杀菌棉织物(Ag NPs@Fe~(3+)-SMNPs@Cotton),对改性棉织物的表面形貌、化学结构、光热、光热杀菌、抗菌及服用性能进行了研究。结果表明,改性后的棉织物表面粗糙,附着有许多Ag NPs@Fe~(3+)-SMNPs。在氙灯照射下,其表面温度在109℃左右,在阳光照射下也有60℃左右。在氙灯照射10min时,其表面大肠杆菌(E.coli)与金黄色葡萄球菌(S.aureus)存活率均在0.4%以下;无氙灯照射时,细菌与改性棉织物接触6 h时,其存活率均在0.7%以下。水洗20次与摩擦100次后,改性棉织物保持了优异的光热和杀菌性能,具有良好的耐水洗与耐摩擦性能。(2)负载Ag-SMNPs的防紫外,光热与抗菌棉织物本部分在左旋多巴自氧化过程中加入Ag~+,合成了既含有Ag NPs又络合Ag~+的Ag-SMNPs。通过SEM与DLS分析了Ag-SMNPs的形貌与尺寸,结果表明Ag-SMNPs呈球状,其粒径在500 nm左右。通过UV-Vis,FTIR,XPS及XRD分析了Ag-SMNPs的化学结构,结果证实了Ag-SMNPs既存在单质Ag又存在络合的Ag~+。在氙灯照射下Ag-SMNPs的光CL 318952热性能也优于SMNPs。通过沉积法,利用Ag-SMNPs构建防紫外线、光热与抗菌多功能棉织物(Ag-SMNPs@Cotton),对改性棉织物的表面形貌、化学结构、防紫外线、光热、光热杀菌,抗菌及服用性能进行了研究。结果表明,改性棉织物表面粗糙,附着有许多Ag-SMNPs。改性棉织物systems medicine的平均UPF值(UPF_(AV))为114.92,其UVB与UVA的平均透过率(T(UVB)_(AV)与T(UVA)_(AV))均低于1.3。氙灯与阳光的照射下,改性棉织物的表面温度分别为113.8℃与58.3℃。氙灯照射10 min时,改性棉织物表面E.coli与S.aureus存活率均在6%以下;无氙灯照射,细菌与改性棉织物接触6 h时,其存活率均在3.4%以下。水洗20次后,改性棉织物各项性能未出现明显下降,具有良好的耐水洗性能。(3)负载Th-SMNPs的快速光热/光动力杀菌棉织物本部分在左旋多巴自氧化过程中加入不同质量的Th,制备了Th-SMNPs-1,2,3(1,2,3分别代表Th/L-DA摩尔比1:10,1:7和1:5)。通过SEM与DLS对Th-SMNPs-1,2,3的形貌与尺寸进行分析,结果表明它们皆成球状,并且Th含量越高,粒径越大,Th-SMNPs-3的粒径在300 nm左右。通过XPS分析了Th-SMNPs-1,2,3的化学结构,结果证实了Th与SMNPs发生了迈克尔加成与希夫碱反应。利用飞行时间质谱,分析了Th-SMNPs-3粗反应液的分子量与Th-SMNPs-3可能的分子结构。在808nm激光(2.0W/cm~2)照射下,测试了Th-SMNPs-1,2,3的光热性能,其中Th-SMNPs-3的光热性能最强。并通过计算得出Th-SMNPs-3的摩尔消光系数ε808值为4.7×10~9 M~(-1) cm~(-1),其总光热效率η*值为34.49%,比SMNPs的η*高出60%。通过DFT理论计算与EPR光谱分析了Th-SMNPs-1,2,3光热增强的机理。Th与L-DA氧化单体形成了D-A结构,Th-SMNPs-1,2,3分子内LUMO-HOMO能带隙减少,促进了光的吸收与转换。Th的掺杂使得半醌自由基的含量增多,抑制了非热辐射跃迁。通过沉积法,利用Th-SMNPs-1,2,3构建了快速光热/光动力杀菌的棉织物(Th-SMNPs-1,2,3@Cotton),对改性棉织物的表面形貌、化学结构、光热、单线态氧(~1O_2)生成、光热/光动力杀菌及服用性能进行了研究。结果表明,改性棉织物表面粗糙,并且Th含量越高,改性棉织物越粗糙。在808 nm激光(0.05-0.5 W/cm~2)照射下,测试了改性棉织物的光热性能,结果表明,Th-SMNPs-3@Cotton的光热性能最强,最高可达100℃。在660 nm激光(0.05 W/cm~2)照射下,Th-SMNPs-3@Cotton生成~1O_2的能力最强。在808nm(0.1 W/cm~2)与660 nm双激光照射下,Th-SMNPs-3@Cotton表面的E.coli与S.aureus存活率均在10%左右。并且,Th-SMNPs-3@Cotton可以作为伤口愈合敷料。

目的:探讨电针对重症肌无力(MG)大鼠症状及CD_4~+/CD_8~+、乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)水平的影响。方法:随机选择10只无特定病VE-822供应商原体(SPF)级雌性Lewis大鼠作为对照组，剩余大鼠均通过免疫接种法构建实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型，成模大鼠随机分为模型组、电针组及泼尼松组，每组10只，其中电针组大鼠每日于阳陵泉、足三里、脾俞穴位处行电针刺激，泼尼松组大鼠灌服泼尼松5.4 mg/(kg·d),对照组、模型组及泼尼松组大鼠每日于非穴位处行电针刺激，连续15 d。记录治疗前后各组大鼠体质量；采用Lennon评分评估大鼠肌力情况；采用肌电图检测重复电刺激(RNS)衰减率；测定胸腺指数；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清AChR-Ab、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平；采用流式细胞术检测大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD_4~+/CD_8~+比值变化情况。结果:治疗前，模型组、电针组及泼尼松组体质量低于对照组，临床Lennon评分、RNS衰减率及血清AChR-Ab水平高于对照组(P<0.05),模型组、电针组及泼尼松组体质量、临床Lennon评分、RNS衰减率及血清AChR-Ab水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后，与对照组比较，模型组、电针组及泼尼松组大鼠体质量降低，临床Lennon评分、RNS衰减率及血清AChR-Ab水平升高，胸腺指数、血清IFN-γ、IL-4、IL-6水平、CD_4~+T细胞占比及CD_4~+/CD_8~+比值升高，血清TGF-β_1水平及CD_8~+T细胞占比降低(P<0.05);与模型组比较，电针组及泼尼松组体质量、血清TGF-β_1水平及外周血CD_8~+T细胞占比升高，临床Lennon评分、RNS衰减率及胸腺指数、血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-4、IL-6水平、外周血CD_4~+T细胞占比及CD_4~Medial preoptic nucleus+/CD_8~+比值降低(P<0.05);电针组作用效果弱于泼尼松组(P<0.05)。结论:电针刺激可改善EAMG大鼠临床症状，其MRTX1133化学结构作用机制可能与促进免疫平衡恢复，降低AChR-Ab水平有关。

新型冠状病毒肺炎(Coronavirus diseasebile duct biopsy 2019,COVID-Pevonedistat19)是一种由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒 2(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染导致的急性呼吸系统传染病,疫情在全球范围大流行导致大量感染、重症及死亡病例,造成巨大的公共卫生与经济负担。目前疫情防控面临新挑战。SARS-CoV-2基因组的不断进化与频繁变异产生了多种变异株,目前流行的Omicron变异株已显示出更强的传播力与明显的免疫逃逸性,对现有疫苗的防护效率及治疗药物的诊疗效果、疫情的防控等造成严峻挑战。在防治药物中,病毒进入抑制剂具备预防病毒感染以及早期应用截断疾病向危重症转化的作用,可同时作为预防与治疗药物使用。然而,目前已获批的如Molnupiravir和Paxlovid等临床用药均以抑制病毒复制为靶,尚缺乏病毒入侵抑制剂供临床应用。面对疫情长期共存、病毒频繁变异导致传播力增强的现状以及大量因基础疾病等无法接种疫苗的人群,研发具备预防与治疗COVID-19的广谱病毒入侵抑制剂具有更强的现实意义。疫情暴发后,连花清瘟胶囊作为中医药抗疫代表性治疗药物被纳入《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》批准用于COVID-19的临床治疗。临床研究证实使用连花清瘟胶囊能够提高患者临床治愈率,预防密接与次密接感染;体外研究证实,连花清瘟方能够抑制SARS-CoV-2病毒复制。既往研究明确连花清瘟方对SARS-CoV、H3N2流感病毒、呼吸道合胞病毒等具有广谱抗病毒作用。尽管目前连花清瘟方预防与治疗COVID-19的有效性得到了一定程度的确认,然而其抗SARS-CoV-2及广谱抗病毒的药效物质与作用机制仍有待进一步研究。由于SARS-CoV-2具有高致病性与高传染性,使用完整病毒毒株进行研究需要在生物安全级别(biosafety level,BSL)3级或4级实验室进行。我国高级别生物安全实验室资源紧张,严重限制了 SARS-CoV-2研究,因此,寻找可用于普通生物安全实验室的SARS-CoV-2替代模型十分必要。同时,用于模拟SARS-CoV-2感染的动物或细胞模型与人体存在较大差异,仅能够模拟部分SARS-CoV-2感染特征,也需开发更接近人体真实状况的宿主模型。针对上述问题,课题组已经构建出包含SARS-CoV-2全部结构蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),因其仅含有病毒结构蛋白不具有复制能力,是一种安全、仿真的病毒替身模型。作为宿主模型,由人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)诱导分化的肺泡球类器官具有最接近真实人体的蛋白表达谱,可弥补目前宿主模型的缺陷,用于SARS-CoV-2感染研究。研究目的明确连花清瘟方原药及大鼠含药血清中含有的中药化学成分;明确连花清瘟方对SARS-CoV-2病毒入侵宿主细胞的两种途径,内吞与膜融合的影响;筛选连花清瘟方来源的具有抑制SARS-CoV-2病毒入侵宿主细胞的药效成分,并阐明其作用机制。研究方法1.使用连花清瘟方对SD大鼠进行灌胃,获取连花清瘟方含药血清;通过UPLC-MS/MS方法对连花清瘟方原药与大鼠含药血清进行中药化学成分检测;比较连花清瘟方原药与含药血清的中药化学成分,筛选出代谢成分;最后通过文献挖掘方法对连花清瘟方来源中药化学成分抗病毒功效进行归纳整理,筛选候选药物。2.利用病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)与荧光素酶报告基因技术,构建带有荧光素酶标签的SARS-CoV-2 VLPs(Luc-VLPs);以人血管紧张素转换酶 2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)转基因 C57BL/6J 小鼠作为动物模型,使用连花清瘟方及其来源的中药化学成分预防性灌胃给药后,使用VLPs进行干预,构建SARS-CoV-2感染模型,通过检测肺内Luc-VLPs水平,以及利用免疫荧光染色技术可视化肺内VLPs数量,判断连花清瘟方预防SARS-CoV-2感染效果,并利用免疫印迹法对药物干预后ACE2、跨膜丝氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2,TMPRSS2)表达水平进行检测,判断药物对SARS-CoV-2入侵相关受体的影响。3.以Vero E6细胞作为SARS-CoV-2通过内吞途径入侵的细胞模型,使用连花清瘟方及其来源的中药化学成分对SARS-CoV-2 VLPs入侵Vero E6细胞过程进行干预,根据入侵细胞内VLPs水平,判断药物对SARS-CoV-2内吞途径进入宿主细胞的影响。4.以二分蛋白法(dual split protein,DSP)构建SARS-CoV-2膜融合途径入侵的细胞模型,使用连花清瘟方及其来源的中药化学成分对SARS-CoV-2膜融合过程进行干预,根据膜融合后形成的绿色荧光蛋白及荧光素酶水平判断药物对SARS-CoV-2膜融合途径入侵宿主细胞的影响。进一步利用DSP法构建SARS-CoV-2突变株及其它冠状病毒SARS-CoV与MERS-CoV膜融合细胞模型,判断连花清瘟方来源化学成分的广谱膜融合抑制效果。5.利用人诱导多能干细胞(human inducedpluripotent stem cells,hiPSC)诱导分化人Ⅱ型肺泡样上皮细胞(alveolar epithelial cells type Ⅱ,AECⅡ),并通过3D培养构建AECⅡ肺泡球模型;利用免疫荧光染色技术检测AECⅡ表达病毒入侵相关受体ACE2以及TMPRSS2水平;利用与人体蛋白表达谱十分相近的AECⅡ肺泡球作为宿主模型,使用筛选所得连花清瘟方来源有效中药化学成分对SARS-CoV-2 VLPs入侵AECⅡ进行干预,进一步判断药物对SARS-CoV-2病毒颗粒入侵宿主细胞的影响。6.对具有抑制SARS-CoV-2膜融合功效的连花清瘟方来源中药化学成分(山奈酚)的作用机制做进一步研究,通过检测药物对膜融合不同阶段的影响,判断药物作用靶点。首先,检测药物对SARS-CoV-2 S蛋白受体结合域(spike protein receptor-binding domain,S-RBD)与宿主细胞受体 ACE2 结合过程的影响。使用药物对S-RBD与表达ACE2的HEK-293F细胞的结合过程进行干预,利用流式细胞术检测与ACE2结合的S-RBD水平判断药物对S-RBD与ACE2结合的影响。进一步,检测药物对宿主TMPRSS2对S蛋白S2亚基切割过程的影响。利用瞬时转染技术构建表达TMPRSS2的HEK-293T细胞,使用药物对该细胞对TMPRSS2荧光底物Boc-QAR-AMC的切割过程进行干预,根据荧光信号判断药物对TMPselleck激酶抑制剂RSS2酶切活性的影响;利用瞬时转染技术分别构建表达TMPRSS2的HEK-293F-ACE2细胞与表达SARS-CoV-2 S蛋白的HEK-293T细胞,将两细胞混合,模拟TMPRSS2对S蛋白切割过程,使用药物对这一过程进行干预,利用蛋白免疫印迹法检测切割后产物,判断药物对TMPRSS2对S蛋白酶切过程的影响;通过分子对接技术预测药物与TMPRSS2的亲和力及结合位点;利用表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)技术对山奈酚与S蛋白不同亚基的结合亲和力进行检测;利用细胞热位移技术,使用药物对表达SARS-CoV-2 S蛋白的HEK-293T细胞进行干预,使用蛋白免疫印迹法检测经过不同温度处理后细胞表达的S蛋白含量,判断药物是否具有与S蛋白结合能力。最后,检测药物对S2亚基上负责完成膜融合的七肽重复序列1与2(heptad repeat 1/2,HR1/2)形成 6-螺旋束(six-helix bundle,6-HB)的影响。利用圆二色谱技术,检测药物对HR1与HR2的二级结构以及形成6-HB过程的影响;利用非变性凝胶电泳技术及氨基酸突变技术,检测药物对预测作用靶点氨基酸突变前后HR1、HR2以及形成6-HB过程的影响;利用原子力显微镜,在气相观测条件下检测药物对HR1、HR2以及6-HB结构稳定性的影响。研究结果1.从连花清瘟方原药与大鼠含药血清中共检测出129种中药化学成分,其中9种成分仅在大鼠含药血清中检出,为原药代谢产物;经过文献挖掘,38种连花清瘟方来源的中药化学成分对34种巴尔的摩病毒分类法Ⅰ至Ⅵ类不同病毒有明确文献报道的抗病毒功效,其抗病毒作用机制包括抑制病毒黏附、进入、复制、合成、释放以及直接破坏病毒结构等。2.连花清瘟方预防性给药动物实验结果显示,模型组小鼠肺内VLPs水平升高至背景组的2330±399%(p<0.005),阳性对照药物熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组肺内 VLPs 水平降低至 232±72%(p<0.005),连花清瘟方组肺内VLPs水平降低至267±101.8%(p<0.005);免疫荧光染色结果显示,模型组小鼠肺组织细胞内可见大量VLPs颗粒,连花清瘟方与阳性对照药物UDCA干预组肺组织细胞内VLPs数量显著降低;免疫印迹实验结果显示UDCA干预降低了小鼠肺ACE2表达水平,而连花清瘟方干预不影响ACE2表达水平。上述结果提示连花清瘟方具有预防SARS-CoV-2感染功效,并且其预防感染效果不通过改变宿主ACE2发挥作用。3.连花清瘟方原药与含药血清对SARS-CoV-2入侵宿主细胞的两种途径,内吞与膜融合均具有抑制作用;从连花清瘟方含有的129种中药化学成分中,结合文献对药物抗病毒功效的报道,筛选出芦荟大黄素、大黄酸、连翘酯苷A、连翘酯苷Ⅰ、连翘苷、野黑樱苷、红景天苷、广藿香酮、山奈酚、芦丁、地奥司明、香叶木素、木犀草素、新绿原酸、甘草酸、α-亚麻酸、绵马贯众素ABBA共17种中药化学成分进行后续研究;结果显示,这17种药物对SARS-CoV-2病毒颗粒内吞途径入侵宿主细胞均无抑制作用;其中山奈酚对SARS-CoV-2 S蛋白、ACE2与TMPRSS2共同介导的膜融合过程具有明显抑制作用。4.连花清瘟方来源中药化学成分(山奈酚)预防性给药动物实验结果显示,模型组小鼠肺内VLPs水平升高至背景组的2480±220%(p<0.005),山奈酚组肺内VLPs水平降低至1944±103%(p<0.005);免疫荧光染色结果显示,模型组小鼠肺组织细胞内可见大量VLPs颗粒,山奈酚干预组肺组织细胞内VLPs数量显著降低;蛋白免疫印迹实验结果显示山奈酚干预不影响小鼠ACE2表达水平。上述结果提示山奈酚具有预防SARS-CoV-2感染功效,并且其预防感染效果不通过改变宿主ACE2发挥作用。进一步以与人体蛋白表达谱十分接近的AECⅡ作为宿主模型的体外细胞实验证实,山奈酚干预组细胞内VLPs水平较模型组降低了 46.3±15.8%(p<0.005),山奈酚具有整体抑制SARS-CoV-2病毒颗粒入侵AECⅡ的功效。5.山奈酚不影响SARS-CoV-2 VLPs通过内吞途径入侵Vero E6细胞;在SARS-CoV-2 S蛋白与ACE2介导的膜融合过程中,山奈酚仅对同时存在TMPRSS2的膜融合过程具有抑制作用(p<0.005);山奈酚同时对SARS-CoV-2 Delta、Omicron 突变株(BA.1、BA.2、BQ.1.1、XBB.1)以及 SARS-CoV、MERS-CoV具有广谱膜融合抑制作用。随后的机制研究证实,山奈酚不影响SARS-CoV-2 S-RBD与ACE2的结合,但对TMPRSS2酶活性具有一定的抑制作用(p<0.005)。分子对接结果证实山奈酚能够与TMPRSS2酶活性位点Ser 441结合。SPR以及细胞热位移实验发现,山奈酚与S蛋白,特别是S2亚基存在相互作用。对山奈酚对S2亚基中驱动膜融合的HR的作用研究中发现,在圆二色谱检测中,山奈酚抑制HR1与HR2形成6-HB,并对HR1二级结构中的α-螺旋构象具有破坏作用;在非变性凝胶电泳检测以及原子力显微镜观测中发现,山奈酚能够破坏HR1与HR2结构稳定性,抑制6-HB的形成;氨基酸突变结果显示,赖氨酸残基对于HR1结构稳定性具有正向调节作用,对HR2结构稳定性具有负向调节作用;山奈酚对赖氨酸突变的HR丧失了破坏作用提示山奈酚的作用靶点是HR中的赖氨酸残基。研究结论1.利用带有荧光素酶标签的复制缺陷型SARS-CoV-2 Luc-VLPs结合人ACE2转基因小鼠动物模型和AECⅡ模型能够在一定程度上复现SARS-CoV-2病毒颗粒入侵宿主细胞的生物学过程,可用于研究药物对病毒颗粒入侵宿主阶段的影响。2.连花清瘟方对SARS-CoV-2入侵宿主细胞的两种途径,内吞与膜融合均具有抑制效果,连花清瘟方来源的中药化学成分——山奈酚具有广谱膜融合抑制功效,两药物作为SARS-CoV-2病毒进入抑制剂均具有预防SARS-CoV-2感染的功效。3.山奈酚抑制膜融合作用机制为靶向S2亚基HR区赖氨酸残基,破坏HR结构稳定性,抑制6-HB形成。发现赖氨酸残基对HR结构稳定性的影响为进一步深入认识冠状病毒HR结构以及基于山奈酚作为先导化合物开发靶向HR的广谱膜融合抑制剂提供实验研究基础。

目的 分析艾滋病合并Vorinostat体内实验剂量中枢性马尔尼菲篮状菌病患者的临床特点，提高临床早期诊断水平。方法 回顾性Imidazole ketone erastin小鼠分析2014—2020年南宁市第四人民医院收治的5例经脑脊液培养确诊马尔尼菲篮状菌感染的艾滋病患者的临床资料。结果 5例艾滋病合并中枢性马尔尼菲蓝状菌感染者中男性4例，平均年龄35.2岁。脑脊液检出马尔尼菲篮状菌平均时间8 d。脑脊液改变主要表现为白细胞计数和蛋白质升高，葡萄糖和氯化物降低。头颅影像检查主要表现为颅内感染灶。5例患者IgE immunoglobulin E结局均死亡，其中2例误诊为中枢性结核分枝杆菌感染，2例病情危重入院不足1周死亡，1例经过有效抗真菌治疗但最终因感染性休克死亡。3例既往接受过规范抗人类免疫缺陷病毒(HIV)治疗。结论 艾滋病合并中枢性马尔尼菲篮状菌病临床表现缺乏特异性，早期诊断困难，临床易误诊、漏诊，病死率高，临床应高度重视。

如何防治恶性肿瘤已成为目前研究的重点。然而肿瘤部位复杂的微环境诸如活性氧(Reactive oxygen species,ROS)高表达、微酸性以及乏氧等肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)加剧了肿瘤的侵袭和转移、使肿瘤的耐药性增强,限制了众多治疗方案的疗效。在此背景下,通过调节甚至是利用肿瘤微环境开发新型的抗肿瘤药物用以提高对肿瘤的治疗效果具有重要的意义。本课题提出了两种功能性的多酚纳米粒子,分别通过三元协同治疗与增强DOX疗法来克服肿瘤微环境对肿瘤治疗的影selleckchem响,从而增强治疗效果。首先,本研究在水中通过一锅法构建了一种具有线粒体靶向功能的一氧化氮纳米发生器EArg Fe@Ce6,其在单光源660纳米激光的照射下可以实现光动力/气体/光热的协同治疗。由于表没食子素没食子(EGCG)与左旋精氨酸(L-Arg)是通过化学驱动的方式连接,所以其含有高负载率的NO供体L-Arg,EGCG和铁离子(Fe~(3+))的配合为EArg Fe@Ce6提供了显著的光热能力,从而在低浓度和低功率的情况下可进行低温PTT(m PTT),光敏剂二氢卟吩(Ce6)通过物理吸附的方式负载在纳米粒子表面,在激光照射下可为体系提供ROS以进行PDT。EGCG使EArg Fe@Ce6具有线粒体靶向能力,同时有利于缓解缺氧的肿瘤微环境以增强PDT。PDT产生的大量活性物质(ROS)进一步催化L-Arg产生大量的NO,bioresponsive nanomedicine以进行气体治疗并同时对m PTT和PDT致敏。体外和体内的结果表明,660纳米单光源触发的光动力/气体/光热的协同疗法可以取得良好的肿瘤治疗效果。然后,本研究基于表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、丁硫氨酸亚胺(BSOBMS-907351作用)和甲醛(HCHO)在水介质中的化学反应驱动组装,制备了纳米粒子HEB,最后物理吸附上阿霉素(DOX),最终形成纳米制剂HEBD。首先酸性肿瘤微环境可以使连接EGCG、BSO和DOX之间的希夫碱键断裂从而释放药物。HEBD中的EGCG成分负责靶向线粒体,破坏线粒体电子传输链(m ETC),迫使电子泄漏,有利于DOX的捕获,从而产生更多的ROS。EGCG诱导的m ETC破坏导致线粒体呼吸受到抑制,从而缓解肿瘤细胞的缺氧状况,而BSO又可抑制谷胱甘肽(GSH)的生物合成,以保护ROS免受GSH氧化还原作用的消耗,进一步增强DOX诱导的CDT。这种放大CDT途径的DOX介导的联合治疗策略可以在很大程度上提高抗肿瘤效果,延长肿瘤小鼠的寿命,减少心脏毒性和转移的风险。综上所述,本研究提出利用功能性多酚-氨基酸自组装的纳米药物的思路,对调节甚至是利用肿瘤微环境的新型抗肿瘤疗法具有重要的启示意义,在生物医学应用中具有很大的实际应用前景。

研究背景皮肤角质类脂质体是一种由神经酰胺、胆固醇、棕榈酸、油酸和氢化磷脂组成的膜,其磷脂结构类似于体内细胞膜的脂质双层。皮肤角质类脂质体的内部空间不仅可以包封亲水性药物、还可以包裹疏水性药物。同时,它还具有毒性低,高生物相容性的特点。因此,皮肤角质类脂质通常用于药物递送系统。甘草黄酮是从甘草中提取分离出来的一种大类成分,具有抗氧化、抗溃疡、抗肿瘤、酪氨酸酶抑制等药理作用。但由于甘草黄酮不溶于水及各种油酯,只溶于乙醇、丙二醇、甘油及部分有机溶剂,导致其不能充分发挥相应的药理作用。将皮肤角质类脂体作为甘草黄酮的载体,可以提高甘草黄酮在皮肤局部的药物浓度,同时还延长甘草黄酮在皮肤局部的作用时间,这为皮肤疾病提供新的治疗方案。研究目的本论文以皮肤角质类脂体为载体分别将甘草查尔酮A和甘草黄酮制备成皮肤角质类脂体,以提高甘草查尔酮A、甘草黄酮在皮肤局部的滞留量,有利于药物在皮肤局部形成药物贮库,更好的发挥药理作用。同时,通过皮肤角质类脂体作用于大鼠皮肤,研究皮肤角质类脂体对皮肤角质层结构的影响,探讨皮肤角质类脂体促进药物渗透皮肤屏障的作用机制。通过大鼠皮肤局部以及血液中的药物浓度的检测,分析甘草黄酮皮肤角质类脂的代谢动力学。最后,通过体内、体外不同的试验,对甘草黄酮皮肤角质类脂体抑制酪氨酸酶的作用进行评价。研究方法1.甘草黄酮皮肤角质类脂体处方前研究采用高效液相色谱法(HPLC)建立测定甘草黄酮(指标性成分:甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A)的含量方法;通过考察甘草黄酮的油水分配系数以及甘草黄酮在不同溶剂的溶解度,为后续实验的接收介质选择合适的溶剂。2.皮肤角质类脂体制备工艺研究通过考察甘草查尔酮A、甘草黄酮皮肤角质类脂体的处方配比以及制备工艺的条件,确定影响包封率的主要因素。采用星点设计-效SB431542溶解度应面法和Design-Expert 8.0软件,筛选最优处方与制备工艺。最后,采用透射电子显微镜和Mastersize 2000激光衍射粒度仪对甘草查尔酮A、甘草黄酮皮肤角质类脂体的形态特征进行考察。3.皮肤角质类脂体促渗透机制的研究采用Franz扩散池,以生理盐水(含30%PEG400)作为接收液,在离体大鼠皮肤上分别给予相同甘草黄酮含量的皮肤角质类脂体、甘草黄酮溶液,收集不同时间的渗透液,通过计算甘草黄酮的渗透速率,分析这2种剂型中甘草黄酮渗透离体大鼠皮肤的差异。在皮肤滞留量试验中,测定离体大鼠皮肤内甘草黄酮的含量,分析皮肤角质类脂体对甘草黄酮在皮肤内滞留量的影响。采用热差分析(DSC)和傅里叶红外光谱(FTIR)实验,研究皮肤角质类脂体对大鼠皮肤角质层结构的影响,分析角质层脂质与蛋白质的变化对药物进入皮肤的作用。通过香豆素6(C6)的细胞荧光定位以及离体大鼠皮肤的分布研究,考察皮肤角质类脂体在促进药物渗透细胞膜以及角质层过程中的作用。4.甘草黄酮皮肤角质类脂体药动学研究将甘草黄酮凝胶及甘草黄酮皮肤角质类脂体凝胶作用于大鼠皮肤,分别采用微透析技术和眼球静脉丛取血法对甘草黄酮在大鼠皮肤和大鼠体内的代谢动力学进行考察,并计算其相关药动学参数,分析不同剂型对甘草黄酮在大鼠体内代谢动力学的影响。5.甘草黄酮皮肤角质类脂体药效学评价在皮肤角质类脂体作用于小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)后,通过对细胞活力的检测,评价甘草黄酮皮肤角质类脂体的细胞毒性;通过L-酪氨酸反应试验考察甘草黄酮对细胞内酪氨酸酶活性的影响;通过考察小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)内以及大鼠皮肤黑色素含量的变化,阐述甘草黄酮皮肤角质类脂体对细胞内黑色素的影响。采用紫外线照射的方法对大鼠皮肤进行黑化造模,在大鼠皮肤造模部位给药治疗,通过蛋白组学技术分析各组大鼠皮肤内的蛋白含量差异,评价皮肤角质类脂体对皮肤角质层蛋白以及甘草黄酮对大鼠皮肤黑色素的影响。研究结果1.甘草黄酮皮肤角质类脂体处方前研究甘草黄酮含量测定方法的HPLC色谱条件为:Agilent 5 HT-C18柱(250 mm x4.6mm,5 μm),乙腈-甲醇-0.2%磷酸水梯度洗脱,流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:10 μL;检测波长:230 nm。分别建立了以甲醇和含30%PEG400生理盐水为溶剂的标准曲线,且五个成分在浓度范围内与峰面积均呈现良好的线性关系。从溶解度实验结果发现,相对于其他的溶剂,在含30%PEG400的生理盐水中,甘草黄酮五个指标性成分都有较好的溶解性,因此选择生理盐水(含GPCR & G Protein抑制剂30%PEG400)作为透皮实验的接收液。油水分配系数是预测药物在水中或者混合液中的溶解度。在一定程度上,油水分配系数可以预测甘草黄酮其在皮肤上的渗透性能。甘草黄酮指标性成分的油水分配系数分别为:甘草苷0.804、异甘草苷1.411、甘草素1.298、异甘草素1.259、甘草查尔酮A1.970。油水分配系数实验结果表明,甘草黄酮的这五个成分的皮肤渗透性能较差,这说明甘草黄酮将不能在皮肤上很好的渗透,从而影响甘草黄酮在皮肤局部的治疗作用。2.皮肤角质类脂体制备工艺研究甘草查尔酮A皮肤角质类脂体(LAL):通过对影响包封率的因素进行分析,发现影响甘草查尔酮A皮肤角质类脂体包封率的主要因素是脂质比、醇水比以及神经酰胺用量、超声时间。以甘草查尔酮A的包封率为评价指标,利用Design-Expert 8.0软件对各个因素水平进行分析,得到最优处方条件分别为:卵磷脂0.025g、胆固醇0.025g、神经酰胺0.02g,溶于2 mL无水乙醇中,再分别加入0.125mg甘草查尔酮A,混匀,匀速加入10 mL预热65℃ PBS(pH 7.4),再慢速搅拌20 min(约700 rpm),65℃水浴保温50 min,100 W超声15 min,用0.45 μm过滤器过滤。该条件下制备的甘草查尔酮A皮肤角质类脂体的其包封率为 54.07±6.99%,平均粒径为 186.7±1.31 nm。甘草黄酮皮肤角质类脂体(LFL):通过对影响包封率的因素进行分析,发现影响甘草黄酮皮肤角质类脂体包封率的主要因素是药脂比、脂质比、醇水比以及神经酰胺用量。以甘草黄酮的包封率为评价指标,利用Design-Expert 8.0软件对主要因素水平进行分析,得到最优处方条件分别为:卵磷脂0.0250g、胆固醇0.0972g、甘草黄酮0.1402g,乙醇3mL,神经酰胺用量0.02 g。该条件下制备的甘草黄酮皮肤角质类脂体的其包封率为55.14±2.69%,平均粒径为211.8±2.26 nm。3.皮肤角质类脂体促渗透机制的研究在甘草黄酮的释放动力学分析中发现,甘草苷、异甘草苷、甘草素这三个成分从甘草黄酮(LF)和甘草黄酮皮肤角质类脂体(LFL)中的释放均符合零级动力学方程。本实验对LF和LFL进行对比,由结果可知,LFL组CMV infection中甘草苷、异甘草苷、甘草素三者的单位面积累积透过量都高于LF组,且以上三个成分在24 h内持续释放,皮肤渗透速率稳定;在LF中甘草苷的渗透速率为2.1973μg·h-1·cm-2,异甘草苷的渗透速率为0.5535 μg·h-1·cm-2,甘草素的渗透速率为0.2686 μg·h-1·cm-2;在LFL中甘草苷的渗透速率为3.5542μg·h·cm-2,异甘草苷的渗透速率为0.6010 μg·h-1·cm-2,甘草素的渗透速率为0.3509μg·h-1·cm-2。LF组中甘草黄酮指标性成分的渗透速率明显低于LFL组,这说明皮肤角质类脂体可以促进甘草黄酮渗透进入皮肤。此外,在甘草黄酮释放动力学实验中可以看出,甘草苷、甘草素以及异甘草苷可以通过扩展池渗透进入大鼠离体皮肤,而异甘草素和甘草查尔酮A并不能在接收液中被检出。虽然甘草查尔酮A在该批次甘草黄酮中的含量相对较高为4%,但可能是由于其化学结构导致其不能很好的渗透皮肤。而异甘草素其在甘草黄酮中的相对含量(0.05%)较低,在渗透液中的含量过低,超出检测限而不被检测出来。在LFL组和LF组中皮肤滞留量的分析结果可以看出,两组之间的皮肤滞留量具有显著性差异(P<0.05),而且LFL组的甘草黄酮皮肤滞留量均明显高于LF。这说明皮肤角质类脂体可以促进甘草黄酮进入皮肤。通过对大鼠皮肤样品的差示热扫描曲线分析,与空白对照组(CT)相比,空白皮肤角质类脂体组(NL)的大鼠皮肤其角蛋白相变温度升高。这说明在皮肤角质类脂体的作用下,大鼠皮肤角蛋白结构可能发生改变。LF组大鼠皮肤的熔点进一步升高,而LFL组中的熔点相对于NL组熔点减少的程度较低。NL组的角蛋白熔点低于LF组和LFL组。同时,研究结果显示不同处理组的皮肤焓值(相变温度)与对照组相比有不同程度的提高,焓值的变化程度:NL组>LFLG组和LFG组>NG组。熔点的降低说明皮肤的热稳定性变差。皮肤角质类脂体的加入降低了大鼠皮肤的热稳定性,这可能与角蛋白的结构改变有关。在傅里叶红外光谱(FTIR)中,皮肤样品的吸收峰主要为角质层脂质峰(Vas CH2,VsCH2)和角蛋白峰(Amide Ⅰ,Amide Ⅱ)。通过对大鼠皮肤样品的FTIR结果分析,NL组、CT组、LFL组、LF组、LA组以及LAL组大鼠皮肤的吸收峰面积与对照组相比有不同程度的增加。此外,与NL组的皮肤吸收峰面积相比,LAL组和LFL组的吸收峰面积增加程度更大。通过对皮肤角质类脂体在皮肤分布实验,发现在10～60 min的时间内,随着时间的推移,在香豆素皮肤角质类脂体凝胶(C6L)处理组的皮肤上,荧光强度越来越高,而且荧光密度逐渐增加。这说明随着时间的增加,皮肤角质类脂体可以促进药物在皮肤中的积累和扩散。给药50 min后,C6L组的皮肤上,可以清晰的观察到整个皮肤表皮层中都有荧光。相同给药时间后,C6溶液组的荧光值比C6L组低。这说明皮肤角质类脂体与皮肤有更好的结合能力,有利于药物扩散到皮肤中,从而发挥药理作用。在细胞定位实验中,发现香豆素C6荧光信号大量存在于细胞质中,其绿色荧光的信号与溶酶体染色剂Lyso-Tracker Red所形成的红色信号重叠,而不与细胞核染色剂DAPI的蓝色信号重叠。这说明,皮肤角质类脂体被吞噬后,存在于细胞质内。4.甘草黄酮皮肤角质类脂体药动学研究通过分别对LFG和LFLG在SD大鼠的皮肤背部组织液和血液中的浓度变化进行分析发现,LFLG组中各指标性成分的半衰期分别为:甘草苷16.74h、异甘草苷12.97h、甘草素11.55h、异甘草素70.95h,比LFG组的半衰期长。LFG组各指标成分的半衰期为:甘草苷6.03h、异甘草苷6.68h、甘草素5.67h、异甘草素42.22h。LFLG组中各指标性成分在皮肤中的浓度(甘草苷3.35μg/mL、异甘草苷2.85μg/mL、甘草素2.95μg/mL、异甘草素1.46μg/mL)都比LFG组的浓度(甘草苷3.18μg/mL、异甘草苷1.66μg/mL、甘草素2.85μg/mL、异甘草素0.93μg/mL)高。半衰期的延长,说明LFLG能够使药物皮肤中滞留更长时间,这可能是由于LFLG在皮肤角质层形成了药物贮库,缓慢地释放甘草黄酮。皮肤局部的药动学结果表明,LFLG组中甘草黄酮在真皮层中的浓度明显高于LFG组,这说明皮肤角质类脂体能够促进甘草黄酮渗透角质层进入皮肤中,提高药物在皮肤的浓度,进而影响其治疗作用。5.甘草黄酮皮肤角质类脂体药效学评价细胞毒性试验结果显示,当甘草黄酮的浓度高于0.45 mg/mL时,细胞活性的抑制率大于53.56%左右。而酪氨酸酶活性测定和黑色素含量测定结果显示,在一定范围内,随着甘草黄酮药物浓度的增加,酪氨酸酶活性呈现逐渐降低。大鼠皮肤蛋白组学分析结果,发现黑化后的模型组与空白组的差异蛋白所富集得到的通路为核糖体通路(Ribosome,rno03010)。而甘草黄酮皮肤角质类脂体组与模型组之间差异蛋白KEGG通路富集得到的通路为:军团菌通路(Legionellosis,rno05134)以及抗原加工与暴露相关通路。结论1.甘草黄酮皮肤角质类脂体处方前研究采用高效液相色谱建立甘草黄酮五个指标性成分含量的测定方法,其线性关系以及仪器精密度均为良好。甘草黄酮五个指标性成分在生理盐水(含30%PEG400)中均有较好的溶解度,可以将(含30%PEG400)用于体外透皮试验的接收液。在饱和水正辛醇体系中,甘草黄酮五个指标性成分的油水分配系数较差。2.皮肤角质类脂体制备工艺研究甘草查尔酮A、甘草黄酮皮肤角质类脂体制备工艺研究表明,采用单因素考察法结合星点设计-效应面法筛选甘草查尔酮A、甘草黄酮皮肤角质类脂体的处方和制备工艺是有效、可靠的。3.皮肤角质类脂体促渗透机制的研究透皮机制研究表明,大鼠皮肤在皮肤角质类脂体干预后,皮肤角质层发生的热力学行为改变,调节大鼠皮肤角质层脂质双分子层的排列及其流动,有利于促进药物渗透进入皮肤。4.甘草黄酮皮肤角质类脂体药动学研究相关药动学研究表明,皮肤角质类脂体能够有效提高甘草黄酮透过皮肤角质层的渗透速率,增加药物的皮肤滞留量,延长药物在皮肤局部的作用时间,提高药物的局部浓度,增强药物的治疗作用。5.甘草黄酮皮肤角质类脂体药效学评价药效学研究表明,皮肤角质类脂体能促进甘草黄酮进入皮肤,并延长其在皮肤表面的作用时间,从而增强甘草黄酮抑制酪氨酸酶的作用,进而减少黑色素的产生,降低色素的沉淀。

目的 血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB）是血小板衍生生长因子家族成员之一，可刺激血管平滑肌细胞增殖和迁移，在血管生成中起重要作用，但在中枢神经系统中的作用尚不清楚。本研究采用确认细节慢性社会挫败应激建立小鼠抑郁症模型，研究海马齿状回区PDGF-BB对抑郁样行为的作用及其机制。方法 采用化学遗传学结合行为学实验研究MS-DG环路对慢性社会挫败应激模型小鼠抑郁样行为的影响；应用分子生物学技术、免疫荧光成像检测MS-DG环路依赖的PDGF-BB对DG脑区神经发生的影响。结果 (1)化学遗传学抑制MS-DG神经投射增加DG脑区PDGF-BB表达，并产生抗抑郁作用，而激活MS-DG神经投射产生相反的作用。(2)抑制MS~(GABA+)-DG神经投射激活海马DG区生长抑素阳性中间神经元，促进PDGF-BB表达。(3)海马DG区过表达PDGProteomics ToolsF-BB改善慢性社会挫败应激诱导的小鼠抑郁样行为，而海马DG区注射PDGF-BB中和抗体阻断抑制MS-DG神经投射介导的抗抑郁作用。(4)海马齿状回区注射PDGF-BB重组蛋白逆转慢性社会挫败应激诱导的海马神经发生损伤和新生神经元树突形态异常。(5)特异性沉默神经干细胞PDGF-β受体导致海马神经发生受损，并增加小鼠对应激的易感性。结论 抑制小鼠MS~(GABA+IACS-010759试剂)-DG神经投射促进DG区生长抑素阳性中间神经元释放PDGF-BB，通过激活神经干细胞PDGF-β受体，进而逆转慢性应激所致成年海马神经发生损伤，缓解小鼠抑郁样行为。