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目的 评价在非糜烂性胃食管反流病（non-erosive gastroesophageal reflux disease, NERD）人群中使用高剂量双联疗法（high dWhole Genome Sequencingose dual therapy, HDDT）根除幽门螺杆菌（helicobacter pylori, Hp）的疗效、不良反应及安全性。方法 便利选取2020年9月—2021年9月福建省漳州市第三医院收治的139例合并Hp感染的NERD患者为研究对象，先使用艾司奥美拉唑40 mg qd+铝碳酸镁1.0 g tid+枸橼酸莫沙必利5 mg tid治疗1周，缓解患者胃食管反流症状；其后随机分为A组（艾司奥美拉唑20 INCB018424临床试验mg qid+阿莫西林0.75 g qid，疗程14 d）和B组（艾司奥美拉唑20 mg bid+枸橼酸铋钾220 mg bid+阿莫西林1.0 g bid+克拉霉素0.5 g bid，疗程14 d），治疗结束后4周复查尿素呼气试验，判断Hp根除疗效。结果 共132例完成临床研究。A组和B组按意向治疗（intentionto-treat, ITT）分析Hp根除率分别为86.6获悉更多%和87.5%，按方案（per-protocol, PP）分析Hp根除率分别为90.6%和92.6%，两组的根除率对比，差异无统计学意义（χ~2=0.027、0.176,P>0.05）。A组的不良反应发生率（3.1%）明显低于B组（14.7%），差异有统计学意义（χ~2=5.350,P<0.05）。结论 在NERD人群中，高剂量双联疗法和铋剂四联疗法对Hp根除率疗效相当，但高剂量双联疗法比铋剂四联疗法的不良反应更少，高剂量双联疗法根除Hp安全性更高、根除过程更舒适。

研究背景:肾移植术是大多数终末期肾病患者首选的治疗方案。术后移植肾功能的恢复受免疫排异反应、缺血/再灌注损伤(Ischemia/Reperfusion Injury,IRI)、围术期血流动力学波动、炎症反应和交感神经活性等多种因素的影响。移植肾早期肾小管损伤始于缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R),通常伴随进行性肾小管间质纤维化(Tubulointerstitial Fibrosis,TIF)。早期IRI是引发晚期移植肾功能不全的重要因素之一,而进行性移植肾衰竭最常见的病理改变就是TIF和肾小管萎缩。因此,抑制I/R引起的肾小管损伤及TIF,或许可以改善肾移植术后的转归和结局,提高移植肾存活率。近年来研究发现,选择性α2肾上腺素受体激动剂右美托咪定不但可以降低交感肾上腺髓质系统的兴奋性,保持血流动力学稳定,还可通过抑制炎症反应、减少凋亡等发挥器官保护作用。但关于该药物对肾移植和肾IRI后TIF的影响及相关作用机制却鲜有报道。研究目的:评估右美托咪定对围术期应激反应的作用,明确右美托咪定对肾移植术及肾I/R后肾损伤及TIF的影响,并探讨缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible Factor-1α,HIF-1α)及与纤维化密切相关的转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)/Smads信号通路在右美托咪定介导的抗纤维化中的作用机制。研究内容分为五部分:第一部分:右美托咪定对肾移植围术期应激反应的影响方法:将来自同一供体的移植肾随机分配至右美托咪定组(Dex,n=39)和对照组(Con,n=39)。术中记录不同时间点的平均动脉压和心率,并记录血管活性药及麻醉药的使用情况,术后比较两组患者疼痛、恶心、呕吐、烦躁和寒颤的发生情况,以评估右美托咪定对围术期应激反应的影响。结果:Dex组气管插管后(P=0.012)和切皮后(P=0.018)的平均动脉压均低于Con组,Dex组气管插管后的心率也明显低于Con组(P=0.021)。Dex组术中舒芬太尼的用量明显少于Con组(P=0.039),阿托品的使用例数,Dex组明显多于Con组(P=0.027)。Dex 组患者术后 6h(P=0.01)和 12h(P=0.002)VAS 疼痛评分较低。且Dex组术后寒颤的发生率明显低于Con组(P=0.037)。手术结束时患者的体温,拔除气管导管的时间,术后30min内恶心、呕吐及烦躁的发生率,两组间无明显差异。小结:围术期应用右美托咪定可减少肾移植术中的血流动力学波动,降低术中镇痛药的用量,改善术后寒颤及术后疼痛,缓解围术期应激反应。第二部分:右美托咪定对肾移植术后并发症及预后的影响方法:比较Dex组和Con组患者术后移植肾功能延迟恢复(Delayed Graft Function,DGF)发生率、住院天数、术后感染、并发症发生率、移植肾切除率和死亡率等转归情况。比较两组患者术后6天内血清肌酐(Creatinine,Cr)、尿素(Urea)及尿量。在术后18个NSC 125973体内月随访期间检测血清Cr、Urea、β2微球蛋白、胱抑素C及估算肾小球滤过率以评估肾功能。结果:Dex组Ⅰ级(P=0.046)和Ⅱ级(P=0.025)Clavien-Dindo并发症发生率明显少于Con组。Dex组住院天数较Con组显著减少。Dex组(12.8%)DGF发生率虽低于Con组(17.9%),但组间差异无统计学意义。术前及术后6天内两组血清Cr、Urea及尿量无明显差异。在术后18个月随访中,两组肾功能指标无明显组间差异,但相比术后6天,Dex组术后2M、3M、12M和18M肌酐降低率均较Con组有显著增加。小结:右美托咪定可减少肾移植术后并发症的发生率,缩短住院天数,并在术后18个月随访中增加肌酐降低率。围术期右美托咪定的使用虽可降低术后DGF的发生率,但并无统计学意义。第三部分:右美托咪定对肾移植术后肾损伤及TIF相关指标的影响方法:RT-PCR检测比较Dex组和Con组患者术后7天、21天外周血单核细胞中TGF-β1/Smads通路的mRNA表达水平,ELISA检测血清炎性因子IL-6和TNF-α的浓度,尿液中TGF-β1及KIM-1的相对浓度。结果:与Con组相比,Dex组患者术后7天、21天外周血单核细胞中TGF-β1及其下游的Smad2和Smad3 mRNA表达均显著下调,尿液中TGF-β1的相对浓度(经尿肌酐校正)及血清IL-6、TNF-α浓度明显降低。Dex组再灌注后2h、24h、48h和72h尿液中KIM-1的浓度(经尿肌酐校正)低于Con组。小结:围术期使用右美托咪定可改善肾移selleck化学植术后的肾损伤,降低炎症反应,并抑制TGF-β1/Smads通路的激活。第四部分:右美托咪定对小鼠肾I/R后HIF-1α和TGF-β1/Smads通路的影响方法:雄性C57BL/6J小鼠I/R模型(缺血40min)制作前30min腹腔注射三种不同浓度右美托咪定,再灌注后24h取材。HE、PAS染色评估不同剂量右美托咪定对肾组织I/R后肾小管损伤程度的影响,免疫组化和TUNEL染色评估细胞凋亡情况,ELISA检测血清Cr、Urea及TGF-β1的浓度。Western blot和RT-PCR检测右美托咪定对I/R后肾组织HIF-1α、TGF-β1/Smads和α-SMA的蛋白及mRNA表达水平的影响。结果:右美托咪定可显著缓解小鼠肾I/R 24h后的肾小管损伤,减少Caspase-3阳性细胞数及细胞凋亡,改善肾功能,且成剂量依赖性。HIF-1α于I/R后1天,TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3于再灌注后7天表达量达峰值;α-SMA自再灌注后7天开始有明显上调,14天表达量最高,之后均持续高表达至再灌注后21天。腹腔注射50μg/kg右美托咪定可明显降低I/R后7天、21天肾组织HIF-1α、TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3的表达及血清TGF-β1的浓度。小结:右美托咪定可剂量依赖性缓解小鼠肾I/R诱导的肾小管损伤,减少细胞凋亡,还可下调I/R引起的HIF-1α过表达,抑制TGF-β/Smads信号通路的激活。第五部分:右美托咪定通过抑制HIF-1α和TGF-β1/Smads通路改善IRI诱导的TIF方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为Sham组,I/R组,Dex+I/R组,YC-1+I/R组和育亨宾(Yohinbin,Yoh)+Dex+I/R组。缺血40min再灌注(或假手术)21天后取材。Western blot 检测各组肾组织 HIF-1α、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、α-SMA和Ⅰ型胶原的蛋白表达,RT-PCR检测HIF-1α和TGF-β1/Smads的mRNA表达。HE、PAS和Masson染色评估各组小鼠肾小管损伤程度和TIF面积,ELISA检测血清IL-6、TNF-α及Cr和Urea的浓度。结果:HIF-1α拮抗剂YC-1可显著降低I/R后21天肾组织中HIF-1α的表达,而TGF-β1/Smads通路蛋白和mRNA表达水平也随之降低。α2肾上腺素受体拮抗剂Yoh可抵消右美托咪定的作用,使HIF-1α表达明显增加,而TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3的表达也随之上调。TGF-β1/Smads通路的激活使α-SMA、Ⅰ型胶原表达上调,TIF面积显著增加。下调HIF-1α可降低TGF-β1、Smad2和Smad3的表达,减少α-SMA和Ⅰ型胶原的表达水平,缩小肾脏IRI后TIF面积,减低血清炎性因子IL-6、TNF-α及血清Cr和Urea的浓度。小结:IRI引起的HIF-1α过表达,可激活TGF-β1,促进Smad2和Smad3的磷酸化,加剧I/R后TIF的发生发展。右美托咪定发挥肾保护作用的部分机制可能是通过降低HIF-1α在I/R后肾组织中的表达,抑制TGF-β1/Smads通路的激活,从而下调α-SMA和Ⅰ型胶原的表达水平,缓解TIF。右美托咪定对I/R后TIF的抑制作用还与减少肾小管损伤,缓解炎症反应有关。研究结论:1.围术期右美托咪定的应用可减少肾移植术中血流动力学波动,缩减术中镇痛药用量,缓解术后寒颤及术后疼痛,降低术后并发症发生率,缩短住院天数,并在术后18个月随访中增加肌酐降低率。右美托咪定对移植肾的保护作用可能与抑制围术期应激反应、减少移植肾I/R导致的炎症反应和肾损伤、下调TGF-β1/Smads信号通路有关。2.右美托咪定可缓解小鼠肾I/R所致的肾小管损伤,减少细胞凋亡,抑制炎症因子释放,还可下调I/R引起的HIF-1α过表达,抑制TGF-β/Smads信号通路的激活。3.IRI诱导的HIF-1α上调,可激活TGF-β1,促进Smad2和Smad3的磷酸化,加剧I/R后TIF的进展。右美托咪定肾保护作用的部分机制可能是通过下调I/R后HIF-1α的过表达,抑制TGF-β1/Smads信号通路的激活,Medical ontologies从而减少α-SMA和胶原蛋白的表达,改善TIF。

目的 研究石莼酶解提取物对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法 按800mg/kg·d进行颈背部皮下注射D-半乳糖6周，建立小鼠亚急性衰老模型；提取物和Vc给药28天后，表征小鼠皮肤老化及氧化应激水平。结果 与水浸提物相比，石莼酶解提取物中寻找更多可溶性总糖、蛋白质、还原糖、多酚固形物含量显著提高（P<0.05），且对羟自由基和DPPH自由基清除率及intramedullary tibial nailSOD活力提高5.72、7.95、13.26倍。动物实验显示，石莼酶解提取物显著改善衰老性皮肤GSH-Px、T-SOD、CAT、T-AOC活力及MDA、蛋白质羰基水平，缓解小鼠脏器萎缩；皮肤中胶原蛋白含量提高71.63%，I/III型胶原比例提高55.40%；显著提高机体抗氧化酶GSH-Px、T-SOD、CAPLX-4720说明书T活力和T-AOC水平；抑制机体生物大分子的氧化降解，如降低蛋白质羰基和MDA水平(P＜0.05)。结论 石莼酶解提取物可降低小鼠氧化应激水平，延缓小鼠皮肤衰老。

目的 探讨补体C3a受体(C3aR)在盲肠结扎穿孔(CLP)致脓毒症大鼠认知障碍中的作用及潜在的作用机制。方法 132只大鼠随机分为假手术组(sham组)和脓毒症组(CLP组),每组的初始数量为66只动物，每个时间点设置22只动物。构建SD大鼠CLP动物模型，于术后1、15和30 d取血清和RepSox脑(海马和前额叶皮质),采用ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6水平Y-27632半抑制浓度。Western blotting检测脑标本中Tau蛋白(Tau)、磷酸化Tau(p-Tau)和C3aR蛋白表达。将66只大鼠随机分为3组：sham组、CLP组和C3aR拮抗剂(C3aRa)干预组。于CLP后第15、17和19天，C3aRa干预大鼠于CLP术后第30天接受抑制性回避测试和物体识别测试，并采用免疫荧光法检测海马中C3aR、离子钙接头蛋白分子1(Iba1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和p-Tau表达。结果 与sham组相比，CLP组大鼠血清及脑组织中TNFα、IL-1β和IL-6在CLP后30 d内先增加后减少。在CLP组海马组织和前额叶皮层中分别观察到术后30 d和术后1、15 d Tau磷酸化显著增强(P<0.05)。与sham组相比，CLP组术后15 d和30 d在大鼠海马和前额叶皮层中均Immunotoxic assay观察到C3aR蛋白水平显著增加(P<0.05)。与CLP组相比，C3aRa干预后大鼠海马内源性C3aR含量明显降低(P<0.05),Iba1、GFAP和p-Tau免疫染色明显抑制(P<0.05)。C3aRa干预CLP大鼠可逆转认知功能损伤。结论 C3aR在脓毒症诱导神经退行性过程中相关生物化学和行为学变化发展中发挥重要作用。通过在海马注射C3aRa能够改善由脓毒症引发的神经退化过程。

目的 研究敲除血小板反应蛋白1(thrombospondin 1, TSP-1)在四氯化碳(CCl_4)所致小鼠急性肝损伤中的保护作用。方法 选取C57BL/6J小鼠16只,TSP-1基因敲除小鼠8只:C57BL/6J小鼠分为WT组和WT+CCl_4组,TSP-1基因敲除小鼠为TSP-1~(-/-)+CCl_4组;WT+CCl_4和TSP-1~(-/-)+CPre-formed-fibril (PFF)Cl_4组给予0.5 mL CCl_4+9.5 mL/kg橄榄油进行腹腔注射建立急性肝损伤模型,WT组注射橄MG132使用方法榄油10 mL/kg作为对照。通过HE染色以及血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)观察各组小鼠肝脏损伤情况及炎症反应程度;同时检测肝组织丙二醛(MDA)和谷胱甘肽PR-171小鼠(GSH)的含量并通过免疫组化和TUNEL检测凋亡的变化。结果 敲除TSP-1对CCl_4诱导的急性肝损伤具有明显的改善作用,表现为血清AST、ALT、IL-6和TNF-α的降低和肝细胞坏死的减少,以及降低MDA含量和升高GSH含量,减少肝组织中凋亡及caspase-3的表达。结论 敲除TSP-1对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡相关。

目的 研究敲除血小板反应蛋白1(thrombospondin 1, TSP-1)在四氯化碳(CCl_4)所致小鼠急性肝损伤中的保护作用。方法 选取C57BL/6J小鼠16只,TSP-1基因敲除小鼠8只:C57BL/6J小鼠分为WT组和WT+CCl_4组,TSP-1基因敲除小鼠为TSP-1~(-/-)+CCl_4组;WT+CCl_4和TSP-1~(-/-)+CPre-formed-fibril (PFF)Cl_4组给予0.5 mL CCl_4+9.5 mL/kg橄榄油进行腹腔注射建立急性肝损伤模型,WT组注射橄MG132使用方法榄油10 mL/kg作为对照。通过HE染色以及血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)观察各组小鼠肝脏损伤情况及炎症反应程度;同时检测肝组织丙二醛(MDA)和谷胱甘肽PR-171小鼠(GSH)的含量并通过免疫组化和TUNEL检测凋亡的变化。结果 敲除TSP-1对CCl_4诱导的急性肝损伤具有明显的改善作用,表现为血清AST、ALT、IL-6和TNF-α的降低和肝细胞坏死的减少,以及降低MDA含量和升高GSH含量,减少肝组织中凋亡及caspase-3的表达。结论 敲除TSP-1对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制炎症、氧化应激和细胞凋亡相关。

目的：探讨丹酚酸B(SalB)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病（PD）模型小鼠的肠道功能紊selleckchem AMG510乱的保护作用及机制。方法：48只C57BL/6成年雄性小鼠随机分为正常对照组（Control组）、SalB对照组（SalB组）、模型组（MPTP组）、SalB治疗组（MPTP+SalB组）。腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型，腹腔注射SalB治疗；采用爬杆实验检测小鼠行为；通过测此网站定首粒黑便排出时间、小鼠粪便含水量评估小鼠肠道功能；免疫组化分析小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶genetic purity（TH）阳性细胞数量、结肠Toll样受体4(TLR4)表达水平；HE染色组织切片观察小鼠结肠黏膜病理改变；免疫组化法测定小鼠黑质TH及结肠TLR4表达水平，ELISA法测定小鼠结肠组织中钙卫蛋白（CP）、TNF-α含量；Western blot检测小鼠中脑及结肠TH、结肠紧密连接蛋白（ZO-1）及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较，模型组小鼠爬杆及转弯时间均明显增加，首粒黑便排出时间显著延长，粪便含水量明显减少；中脑TH阳性细胞数量明显减少，结肠TLR4阳性细胞数增加，中脑、结肠TH蛋白水平均显著降低，结肠黏膜病理损伤评分明显增加，结肠CP、TNF-α水平显著升高，结肠ZO-1表达明显减少；结肠TLR4、MyD88、Nuclear NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显增加；与模型组比较，SalB治疗组小鼠爬杆及转弯时间均明显减少、首粒黑便排出时间显著缩短、粪便含水量明显增加；中脑TH阳性细胞数量明显增加，结肠TLR4阳性细胞数减少，中脑、结肠TH蛋白表达升高；结肠黏膜病理损伤评分明显降低，结肠CP、TNF-α含量显著减低，结肠ZO-1表达明显增加；结肠TLR4、MyD88、Nuclear NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达水平均明显下降。结论：SalB对MPTP诱导的PD模型小鼠具有神经及肠道双重保护作用，SalB缓解肠道炎症可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB炎症信号通路有关。

目的 探究藏红花素抑制音猬因子（Shh）信号通路对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 2021年1月至2022年7月体外培养人结直肠癌细胞SW620，使用不同浓度（5、10、20、40、60、80 mg/L）的藏红花素处理SW620细胞24 h后，CCK-8法检测藏红花素对SW620细胞的细胞毒性作用。将SW620细胞分别用不同剂量藏红花素（10、20、40 mg/L，藏红花素L/M/H组）、40 mg/L藏红花素+1μmol/L PurmABT-263研究购买orphamine（藏红花素H+Shh通路激活剂组）、1μmol/L Purmorphamine(Shh通路激活剂组)处理，另设置未经处理的对照（Control）组，检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力以及Shh信号通路相关蛋白Shh、平滑蛋白（Smo）、神经胶质瘤相关癌基因-1(Gli-1)表达。结果 藏红花素以剂量依赖性方式降低SW620细胞活力。与对照组相比，Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高，克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数、Shh(1.47±0.09比1.27±0.08)、Smo(1.38±0.12比1.15±0.09)、Gli-1(1.25±0.09比0.98±0.07)蛋白表达增加，细胞凋亡率减少（P<0.05），藏红花素L组、藏红花素M组、藏红花素H组SW620细胞活力下降，克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数减少，凋亡率增加，Shh(1.07±0.12、0.85±0.11、0.52±0.08比1.32±0.14)、Smo(0.96±0.11、0.72±0.08、0.43±0.06比1.19±0.12)、Gli-1(0.76±0.09、0.61±0.09、0.37±0.06比0.96±0.11)蛋白表达减少（P<0.05）；与藏红花素H组相比，藏红花素H+Shh通路激活剂组SW620细胞活力升高，克隆形成数、划痕面积愈合率、侵袭数增加，凋亡率减少，Shh(0.84±0.08比0.52±0.08)、Smo(0.81±0.09比0.43±0.06)、Gli-1(0.70±0.08比0.37±0.06)蛋白表达增加（P<0.05）。结论 藏红花素可Z-VAD-FMK抑制SW620细胞增殖、迁移和侵袭，促进其凋亡，可能与Blood cells biomarkers抑制Shh信号通路有关。

沙棘是一种药食资源，在民间常应用于治疗胃部疾病。已有研究表明沙棘果乙酸乙酯萃取物具有较强的抗幽门螺杆菌活性。为探究沙棘乙酸乙酯萃取物抑制幽门螺杆菌的化学成分及抑制机理，采获悉更多用高效液相色谱法测定其化学成分，并测定生物膜形成率、细胞膜通透性、膜蛋白荧光光谱、细胞膜完整性、脲酶活性和细胞微观结构等探究其抑菌机制。结果表明，沙棘乙酸乙酯萃取物中苹果酸含量最高，为872.97 mg/g，其次是芦丁、异鼠李素、槲皮素等黄酮类物质；沙棘乙酸乙酯萃取物可抑制生物膜形成，抑制率达到77.71%；细胞膜通透性增加2.45倍；膜蛋白结构发生变化，色氨Hp infection酸和酪氨酸残基的亲水增强；脲酶活性下降87.89%；细胞内蛋白质和核酸的泄漏量达98.72%；扫描电镜结果表明萃取物会导致细胞结构变形，表面有褶皱。以上结selleck果说明，沙棘乙酸乙酯萃取物中含有苹果酸和多种黄酮类物质，通过多种方式有效抑制幽门螺杆菌的生长繁殖，此结果为进一步分析沙棘中抑制幽门螺杆菌活性物质的研究奠定了基础。

当前仔猪腹泻是一直是困扰生猪养殖业的重要难题,随着生猪规模化养殖产业的不断扩大,仔猪病毒性腹泻疾病的流行呈现逐年升高的态势,严重损害养殖业经济效益。目前很多研究表明益生菌制剂与中兽药单独使用或与抗菌药、疫苗联合应用治疗仔猪腹泻效果显著。益生菌和中药既具备抑菌、抗病毒、增强机体抵抗力的功效,又具有天然环保、来源广泛、功效多样等优势,避开了抗生素临床应用存在的弊端。本研究通过分离鉴定有优良益生特性的乳酸菌株,进行中药发酵,研究乳酸杆菌selleckchem ICI 46474及其代谢产物、单味中药煎剂及乳酸杆菌发酵中药煎剂体外抑制PEDV增殖的能力,并利用网络药理学和分子对接技术探究优势中药黄柏作用于仔猪病毒性腹泻的机制。试验一三株乳酸杆菌的分离鉴定及其益生特性的研究从发酵青贮料Smoothened Agonist体内实验剂量中分离乳酸菌株,经培养特性、革兰氏染色显微镜检查和16S r RNA分子生物学分析,筛选鉴定出两株植物乳杆菌HN11、HN22和一株干酪乳杆菌HN12。本研究对分离菌株的生长曲线、耐酸性、耐胆盐性、抑菌能力、抗生素敏感性和动物体内安全性等性能进行研究,结果表明所有受试菌株均在4 h进入对数生长期并在16 h进入稳定期,表现出良好的产酸、耐酸和耐胆汁能力,鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均对三株分离菌株表现为高敏,肠致病性大肠杆菌对HN11和HN22菌株表现为低敏,而肠致病性大肠杆菌对HN12菌株表现为不敏感。抗生素敏感性试验结果表明分离菌株对多种抗生素敏感,而对林可霉素和诺氟沙星表现出耐药。将浓度为1.0×10~8CFU/m L的乳酸杆菌HN11、HN12和HN22菌悬液灌服小鼠,进行动物安全性试验,发现小鼠生长状况、精神状态、内脏和肠道组织表现正常,表明分离菌株对小鼠无毒害作用。本研究结果为乳酸杆菌分离菌株的进一步开发利用提供一定的理论基础。试验二乳酸杆菌及其代谢产物体外抗PEDV作用调整乳酸杆菌HN11、HN12、HN22菌悬液浓度为1.0×10~8CFU/m L后离心取上清,经0.22μm过滤后获得代谢上清产物,离心后的菌体PBS重悬获得菌悬液,菌悬液经100℃水浴10 min获得热灭活产物。将乳酸杆菌菌悬液、代谢上清和热灭活产物通过预处理、共处理和后处理三种方式接种到PEDV感染的Vero细胞中,利用CCK8试剂盒检测各处理组细胞活力,结果显示乳酸杆菌菌悬液、热灭活产物、代谢上清均可抑制PEDV的增殖,热灭活产物和代谢上清在预处理和共处理方式下对PEDV的抑制率均高于菌悬液,且预处理和共处理作用下各乳酸杆菌的热灭活产物和代谢上清产物处理之间不具有显著性差异(P>0.05)。利用荧光定量PCR方法检测乳酸杆菌菌悬液及其代谢产物与PEDV同时接种于Vero细胞后的PEDV拷贝数,结果表明,与病毒对照组相比,HN11代谢上清处理组PEDV拷贝显著降低(P<0.05)。试验三乳酸杆菌发酵中药煎剂抗PEDV作用通过Rev Man 5.4软件对中药制剂治疗猪病毒性腹泻的疗效评价进行Meta分析,结果显示,与西药对照处理组相比,中药复方制剂对猪病毒性腹泻疾病的治愈率显著升高(P<0.01)。选择使用频率较高的三种清热解毒燥湿药黄连、黄柏、苦参进行接下来的发酵单味中药抗病毒研究。在试验二研究的基础上,调节植物乳杆菌HN11、干酪乳杆菌HN12浓度为1.0×10~8CFU/m L,以4%的接入量厌氧发酵浓度为1g/m L的黄连、黄柏、苦参煎剂36 h后,活菌平板计数法检测各发酵中药煎剂中活菌数,结果表明乳酸杆菌HN11、HN12活菌数目在黄连、黄柏和苦参煎剂中发酵36 h后未发生显著变化。高效液相色谱法(HPLC)检测黄连煎剂和黄柏煎剂发酵前后的盐酸小檗碱含量变化,以及苦参煎剂发酵前后的苦参碱含量变化,结果表示发酵黄连、黄柏煎剂中盐酸小檗碱含量,发酵苦参煎剂中苦参碱含量较发酵前均提高数倍。利用CCK8试hepatolenticular degeneration剂盒检测黄连、黄柏、苦参煎剂和发酵中药煎剂接种于Vero细胞上的最大无毒剂量,并将最大无毒剂量的黄连、黄柏、苦参煎剂和发酵中药煎剂分别与PEDV同时作用于Vero细胞后,荧光定量PCR检测结果显示各处理组PEDV拷贝相较于病毒对照组均有所降低,且以发酵黄柏煎剂作用效果极为显著(P<0.001),将黄柏煎剂和发酵液以预处理、共处理、后处理方式作用PEDV后,利用CCK8试剂盒检测不同处理组细胞活力,发现黄柏煎剂处理组、乳酸杆菌HN11发酵黄柏煎剂处理组和HN12发酵黄柏煎剂处理组之间对PEDV的抑制率不具有显著性差异(P>0.05),并且以预处理和后处理方式效果较佳,抑制率可高达50%以上。试验四基于网络药理学和分子对接技术探究中药黄柏对仔猪腹泻的作用机制利用TCMSP数据库筛选黄柏活性成分及其对应的靶点基因,通过Gene Cards、OMIM和NCBI数据库获取仔猪腹泻相关靶点;将黄柏活性成分靶点与仔猪腹泻靶点取交集后,构建蛋白互作PPI网络;利用DAVID分析核心靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析;采用Auto Tools进行分子对接验证,并通过Py Mol软件将结果可视化。结果表明,黄柏作用于仔猪腹泻的活性成分主要是槲皮素、β-谷甾醇、异紫堇杷明碱、吴茱萸次碱,通过癌症通路、MAPK信号通路、PI3K-AKt通路、IL17信号通路等多条途径发挥作用,其作用的靶点为TNF、TP53、IL-6等,探究了黄柏的多成分、多途径、多靶点作用机制。研究中我们发现黄柏具有抗炎活性,可参与调节炎症反应,这也可能是黄柏发挥抗病毒作用的关键因素。综上所述,本研究分离得到的乳酸杆菌具有优良的益生特性和抗PEDV能力,且黄柏煎剂和乳酸杆菌HN11、HN12发酵黄柏煎剂抗PEDV效果均显著,中药黄柏可通过多成分、多途径、多靶点作用于仔猪腹泻疾病。