巨噬细胞膜仿生纳米铁颗粒制备及多形性胶质母细胞瘤MRI成像的初步实验研究

目的:探讨巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒(Fe_3O_4NCs@MM)对多形性胶质母细胞瘤MRI成像的研究。方法:制备巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe_3O_4NCs@MM,利用动态光散射(Dynamic Light Scattering,DLS)和透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)对其水合动力学粒径、表面电势和形态进行表LY-188011分子量征。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)评价巨噬细胞膜的完整包覆;紫外可见光谱测定巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒抗蛋白吸附能力。通过MRI成像系统,分析了含不同浓度的Fe元素(0.1-1.6 m M)rifampin-mediated haemolysis的Fe_3O_4NCs@MM在GSH存在或不存在时的T_1弛豫效应。采用细胞增殖-毒性实验(Cell Counting Kit-8,CCK-8),测定巨噬细胞膜仿生纳米铁颗粒处理肿瘤细胞24 h后的细胞活性。尾静脉注射巨噬细胞膜仿生纳米铁颗粒至原位胶质母细胞瘤模型中,观察成像效果。结果:巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe_3O_4NCs@MM的水合确认细节动力学粒径和表面电势分别为286.5±7.6 nm和-20.7±3.5 m V,且在水溶液中分布均匀,具有较好的单分散性。包覆巨噬细胞膜的纳米铁颗粒具备抗蛋白吸附的能力。MRI成像显示,制备的巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe_3O_4NCs@MM为GSH响应型MRI对比剂,具有较好的T_1-加权磁共振成像效果,在尾静脉注射巨噬细胞膜的纳米铁颗粒0.5 h后,肿瘤部位的信号可见增强。结论:巨噬细胞膜仿生的纳米铁颗粒Fe_3O_4NCs@MM可实现多形性胶质母细胞瘤的MRI成像。

构建万古霉素修饰的碳纳米点用于VRE生物膜的多重靶向和协同治疗研究

耐万古霉素肠球菌(Vancomycin resistant enterococci,VRE)生物膜是耐药菌为了抵抗恶劣外界生存坏境而形成的保护层,可引发多种疾病,严重危害人类健康。本研究借助具有良好生物相容性的碳纳米点(Carbon nanodots,CNDs),通过简单的功能化修饰,合成万古霉素(Vancomycin,Van)修饰的CNDs颗粒(CNDs@Van),Van的功能化修饰既增强了CNDs对VRE生物膜的特异性亲和能力,又赋予其对VRE生物膜弱酸环境的特异性响应,形成p H介导的CNDs@Van组装体,可有效地光热清除VRE生物膜。另外,CNDs@Van带负电性,可作为药物载体靶向运载带正电的赖氨酸CNDs(CNDs@Lys),实现VRE生物膜的光热和阳离子协同杀菌作用。在第二章中,本研究通过简单的酰氯缩合反应,成功合成了CNDs@Van。紫外可见光谱等结果表明,Van成功修饰到CNDs表面。体外生物膜清除实验结果表明,其表面的Van分子以多聚体的形式存在,增强了其与VRE耐药菌细胞壁的特异性亲和能力PCI-32765抑制剂,提高了其对VRE生物膜的靶向性能。p H敏感性能测试结果表明,在VRE生物膜的酸性环境(p H 5.5)下,碳纳米点表面电荷从-11 m V变为0 m V,发生聚集,形成p H响应的组装体。光热性能测试结果表明,与游离CNDs对比,组装体在808 nm处的吸光值增加了300倍,光热转换效率也显著提高(33%)。细胞毒性测试结果证实,其生物毒性小,具有强生物安全性。体内外杀菌测试结果证明,其对VRE生物膜的杀菌效果显著(99%)。所以,在本实验中,本研究简单地将Van分子功能化修饰到碳纳米点表面,形成CNDs@Van,就可以获得Van多重靶向功能和p H响应性能,能够有效地光热清除VRE生物膜,实现了针对VRE生物膜的双重靶向识别和单一光热治疗效果,也就是“2+1”模式。在第三章中,由于“2+1”模式中,CNDs@Van组装体的光热转换效率较低,使得VRE生物膜清除实验中必须采用较高浓度的CNDs@Van,导致体内实验中肝肾代谢负担增加,影响体内生物膜的清除效果。greenhouse bio-test同时,其表面电荷≤0,使得其与带负电荷的VRE生物膜存在电荷排斥作用,无法进入生物膜内部,限制了VRE生物膜的清除效果。为了解决以上问题,本研究在CNDs@Van多聚体靶向的基础上引入带正电荷的CNDs@Lys。借助静电引力作用,CNDs@Lys可以与带有负电荷的CNDs@Van结合,形成了混合碳点组装体。通过紫外可见光光谱等方法进行表征,分析其外貌和光学特征。p H敏感性能测试表明,与单一CNDs@Van相比,在生物膜的酸性环境(p H<6.5)下,组装体颗粒表面电荷就可以从-9 m V变为0 m VPevonedistat配制,发生聚集,形成p H响应的组装体。同时,释放出带正电荷的CNDs@Lys。生物膜抑制实验结果表明,释放出的CNDs@Lys可借助静电引力作用,深入带负电荷的VRE生物膜内部,靶向作用于VRE生物膜。溶血实验证明,混合碳点的细胞溶血率低于1%,因此生物相容性良好。生物膜清除实验证实,CNDs@Lys可以深入生物膜内部,杀死细菌。体内外杀菌实验结果证实,光热杀菌和阳离子杀菌的协同作用实现了VRE生物膜的高效清除(99.9%)。所以,在本实验中,本研究在CNDs@Van的基础上引入带有正电荷的CNDs@Lys,形成混合碳点组装体,就可以获得Van多重靶向功能、p H响应性能和正电荷靶向作用,能够有效协同清除VRE生物膜,实现了针对VRE生物膜的三重靶向识别和光热及阳离子的协同治疗,也就是“3+2”模式。由此可见,本研究通过简单的功能化修饰构建了CNDs@Van,获得了多重靶向,达到了协同治疗的目的,实现了基于VRE生物膜的多模式治疗方案。更重要的是,本研究在保留良好生物相容性的同时,赋予碳纳米点良好的靶向性能,同时借助碳纳米点的组装效应有效解决了光热转换率低的问题,打破了碳纳米点在光热杀菌领域的局限性,也为其他生物膜的治疗研究提供了新的方向和道路。

六神丸在体内外的抗隐球菌活性研究

目的:探究六神丸体内外抗隐球菌的活性,并考察其与氟康唑、两性霉素B联用抗隐球菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。方法:采用体外测定六神丸对隐球菌的MIC,以及与氟康唑、两性霉素B联用抗隐球菌的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory conCX-5461小鼠centration index,FICI);随后,通过时间-杀菌曲线动态监测六神丸对隐球菌的体外抗菌特征;并通过肺隐球菌病小鼠模型验证其药效。结果:六神丸对44Wnt-C59作用株隐球菌的MIC为8~128μg/mL,与两性霉素B联用为相加作用,与氟康唑联用为无关作用;经时间杀菌绘制的曲线表明4 MIC及8 MIC的六神丸对隐球菌具有杀菌作用;经体内实验发现六神丸以剂量依赖性方式提高小鼠体质量、降低肺指数与肺隐球菌载量,并改善小鼠肺组织病理损伤。结Antibiotic combination论:六神丸以剂量依赖性方式发挥体内外抗隐球菌活性,且其在体外与两性霉素B联用时具有相加作用。

拟南芥MDN1突变引发的核糖体应激响应机制探究

细胞应激反应对植物的生长发育至关重要。当植物面对外界刺激或内源压力时,细胞应激系统首先使细胞适应特定的刺激并修复损伤,一旦刺激性损伤无法被消除,将触发细胞死亡信号通路。核糖体是细胞内具有翻译功能的核糖核蛋白颗粒,其生物合成过程复杂而有序,涉及大量核糖体组装因子。核糖体的合成过程对植物的生长发育十分重要,该过程一旦出现异常,会触发核糖体应激反应。核糖体应激抑制m RNA的翻译,导致全局蛋白质合成下降,从而通过负反馈机制控制基因的表达。植物核糖体应激通常使植株表现典型的生长缺陷,例如:主根变短、叶片变尖变窄、育性降低等。尽管动物细胞中的核糖体应激信号通路已经得到深入研究,但植物细胞中的具体机制尚不清楚。AAA-ATPase Midasin1(MDN1)是拟南芥中重要的pre-60S核糖体生物发生因子,在60S核糖体亚基的成熟过程中发挥作用并参与其核输出。mdn1-1是MDN1功能降低突变体,该突变体的MDN1基因发生错义突变,表现典型的核糖体应激表型。RNA-seq分析结果显示,mdn1-1突变体中NAC转录因子NAC044、NAC085以及NAC103相关基因表达上调,本研究以此为背景,探究了转录因子NAC044、NAC085以及NAC103在MDN1突变引发的核糖体应激中的作用。主要研究结果如下:1、本研究通过分析转录组数据,鉴定到mdn1-1突变体中NAC转录因子NAC044、NAC085以及NAC103相关基因的表达显著上调。为了直观地了解相关基因在mdn1-1突变体中的表达情况,本研究将ProNAC044:GUS报告株系与mdn1-1杂交,通过GUS染色法观察野生型及mdn1-1背景下NAC044启动子信号的分布,发现NAC044在mdn1-1突变体根尖、茎尖以及RAM等细胞分裂旺盛区域强烈表达。2、在mdn1-1背景下分别敲除NAC044、NAC085或NAC103的功能,突变体的根部缺陷以及植株半不育表型得到明显缓解,其中nac085-1/mdn1-1突变体的表型变化最明显,表明NAC044、NAC085和NAC103均在mdn1-Inorganic medicine1突变体的根发育缺陷以及育性降低中发挥作用,并且NAC085的作用效果最显著。3、为了探究NAC044、NAC085以及NAC103在mdn1-1突变体中是否存在功能冗余现象,本研究对杂交得到的三重突变体044-1/085-1/mdn1-1和044-1/103-11/mdn1-1进行表型分析,结果发现同时敲除两个转录因子后,突变体的表型与双突相比没有显著差异,这表明NAC044、NAC085、NAC103在mdn1-1突变体中各自发挥作用。另外,本研究在获得突变体的过程中发现,同时突变NAC103和NAC085会导致雄性不育。据此初步推测,NAC085可能与NAC103结合形成异源二聚体从而激活下游相关基因的表达。4、在植物DNA损伤反应中,NAC044、NAC085和NAC103均受SOG1的调控。为了探究mdn1-1突变体对核糖体应激的响应是否依赖DNA损伤信号通路,对突变体sog1-1/mdn1-1和atm-2/mdn1-1的表型进行观察,结果表明,sog1-1/mdn1-1和atm-2/mdn1-1的主根表型以及根尖结构与mdn1-1突变体相比没有显著差异。另外RNA-seq分析发现,在mdn1-1背景中,NAC044、NAC085和NAC103的表达不受SOG1的介导。以上结果说明MDN1突变引发的核糖体应激响应不依赖SOG1介导的DNA损伤信号通路。5、NAC044、NAC085和NAC103在mdn1-1突变体中发挥作用导致根尖分生区细胞数目减少,为了探究这一现象的具体机制,本研究通过EdU染色观察不同突变体根尖分生区进入S期的细胞密度。结果发现与野生型相比,mdn1-1以及sog1-1/mdn1-1突变体根尖分生区进入S期的细胞密度减小;而在nac085-1/mdn1-1突变体中,多数根尖分生区细胞进入S期,这表明mdn1-1突变体根尖分生区细胞数目减少是由于细胞周期进程受到影响,NAC085在mdn1-1根尖细胞的G1/S阻滞中发挥重要作用。将SMR5:NLS-GFP导入野生型及mdn1-1突变体,观察不同株系根尖细胞中SMR5启动子活性,结果发现由于核糖体合成缺陷,mdn1-1突变体根尖处SMR5的启动子活性显著提高,而RNA-seq分析表明,在nac044-1/mdn1-1、nac085-1/mdn1-1、nac103-11/mdn1-1和sog1-1/mdn1-1突变体中,NAC044、NAC085、NAC103以及SOG1功能的丧失均显著降低SMR5的表达。上述结果表明,NAC044、NAC085、NAC103以及SOG1参与mdBelumosudiln1-1突变体根尖细胞的细胞周期调控。另外,不同突变体叶片细胞的流式分析结果显示,NAC044、NAC085以及NAC103在mdn1-1突变体叶片细胞的G1/S检查点的停滞中也发挥一定作用。6、为了确定NAC103、NAC044和NAC085在核糖体应激响应中的作用是否具有广适性,本研究使用核糖体发生抑制剂处理各突变体材料,分析处理后突变体的表型发现,nac085-1突变体对核糖体发生抑制剂有较强的抗性。另外,在核糖体缺陷材料lsg1-2背景下突变NAC085后,突变体的根部表型缺陷得到缓解。以上结果表明NAC085是通用的核糖体应激信号介导因子。7、为进一步确定影响mdn1-1表型的原因,取材7 DAG(Days after germinationNSC125066采购)野生型、mdn1-1、nac044-1/mdn1-1、nac085-1/mdn1-1、nac103-11/mdn1-1和sog1-1/mdn1-1突变体幼苗根部进行RNA-seq测序。分析结果发现,种子中特异表达的ABI3、ABI5以及种子贮藏蛋白相关基因在mdn1-1根尖部位异位表达,这一结果为接下来的研究提供了新的方向。8、TOR激酶是真核生物生长发育的核心调控因子,能够协调核糖体的发生。为了观察敲低TOR功能是否对mdn1-1表型产生影响,本研究使用TOR诱导沉默株系tor-es与mdn1-1突变体杂交,在雌二醇的诱导下,mdn1-1/tor-es显著恢复了mdn1-1突变体的根部表型缺陷,表明TOR激酶可能通过一条不同于NAC转录因子的通路参与MDN1突变引发的核糖体应激响应。综上,本研究认为转录因子NAC085、NAC044和NAC103均参与MDN1突变引发的核糖体应激响应,其中NAC085的作用最为显著,当核糖体应激发生时,NAC085能够通过靶向下游细胞周期相关基因使细胞周期停滞,从而保证细胞能够适应缺陷并修复损伤。此外,蛋白激酶TOR也参与了核糖体应激响应,具体机制还有待进一步探究。

胞质磺基转移酶2B成员1影响动脉粥样硬化进展的机制研究

目的 研究胞质磺基转移酶2B成员1(SULT2B1)在动脉粥样硬化(AS)发展中的影响及机制。方法 选取12只8周龄载脂蛋白E敲除(apoE~(-/-))雄性小鼠高脂饮食饲料喂养12周后,根据注射的腺相关病毒(AAV)随机分为对照腺相关病毒(AAV-GFP)组和敲低SULT2B1的腺相关病毒(AAV-shSULT2B1)组,每组6只,采用油红O染色评估主动脉和主动脉根部斑块形media campaign成,检测血清炎性因子和血脂水平;RAW264.7细胞中根据转染的腺病毒分为对照腺病毒(Ad-GFP)组和敲低SULT2B1的腺病毒(Ad-shSULT2B1)组(n=3)进行RNA测序检测下游RNA变化;筛选出长链非编码RNA(LncRNA)gga3-204作为下游研究对象,在RAW264.7细胞中根据转染的小干扰RNA(siRNA)分为si-NC组、si-SULT2B1组、si-Lncgga3-204组和si-SULT2B1+si-Lncgga3-204组(n=3),检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果 AAV-GFP组与AAV-shSULT2B1组小鼠高脂喂养后体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AAV-shSULT2B1组小鼠血清TC、TG、LDL-C、主动脉斑块面积占比[(8.38±1.33)%vs(11.83±1.04)%,P=0.000]、主动脉根部斑块内TG含量[(12.29±1.54)%vs(17.67±1.53)%,P=0.000]显著低于AAV-GFP组。AAV-shSULT2B1组小鼠血清IL-1β、IL-6水平显著低于AAV-GFP组,差异有统计学意义(P<0.01)。si-SULT2B1组IL-1β、IL-6 mRNA水平显著低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.01)。Ad-shSULT2B1组LncRNA gga3-204表达显著高于Ad-GFP组,差异有统计学意义(P<0.01)。si-SULT2B1组Lncgga3-204水平显著高于si-NC组,差异有统计学意义(2.LXH254配制32±0.60 vs 1.19±0.21,P=0.036)。si-Lncgga3-204组IL-1β、IL-6 mRNA水平显著高于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.01);si-SULT2B1+sMirdametinib作用i-Lncgga3-204组IL-1β、IL-6 mRNA水平显著高于si-SULT2B1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SULT2B1通过Lncgga3-204影响巨噬细胞炎性反应,进而影响AS的进展。

青海地区藏族、汉族毒性弥漫性甲状腺肿与巨噬细胞移动抑制因子多态性

目的 分析青海地区藏族、汉族毒性弥漫性甲状腺肿(Graves disease, GD)患者与健康者血清巨噬细胞移动抑制因子基因(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)rs755622、Ferrostatin-1 IC50rs1007888、rs2096525novel antibiotics位点基因多态性,探讨其与青海藏族、汉族GD发病的关联性。方法 本研究设GD组(汉族60例,藏族60例)、对照组(汉族60例,藏族60例),应用SNaPshot法测定MIF基因多态性。结果 藏族、汉族GD组及对照组均符合Hardy-Weinberg平衡检验,提示样本具有良好群体代表性。藏族GD组、藏族对照组、汉族GD组、汉族对照组确认细节四组MIF-rs755622位点基因型(GG、GC、CC)、rs1007888位点基因型(GG、GA、AA)、rs2096525位点基因型(TT、TC、CC)频率的差异均无统计学意义;各位点等位基因(G/C、G/A、T/C)差异均无统计学意义。结论 MIF-rs755622位点GC单核苷酸多态性、rs1007888位点GA单核苷酸多态性、rs2096525位点TC单核苷酸多态性均与青海地区藏族、汉族GD发病无关联,该基因不是青海地区藏族、汉族GD发病的易感候选基因。

金纳米异质结构光治疗剂的构建及其在抗肿瘤光学治疗中的应用研究

光学治疗由于具有非侵入性、良好的时空可控性及较高的生物安全性等特点在恶性肿瘤治疗中备受关注。光学治疗主要包括光动力治疗(PDT)和光热治疗(PTT)这两种模式。在光照条件下,PDT利用光敏剂将氧气转变为有毒的活性氧物种(ROS)以杀伤肿瘤细胞,然而,PDT对氧气的依赖性使其疗效会显著受到肿瘤乏氧的影响。PTT通过光热制剂产生过高热以实现肿瘤消融,但相比于其他光学治疗模式,其疗效会显著受到入射光在穿透组织时功率衰减的影响。近年来,新兴的光催化治疗(PCT)通过利用光催化剂在光照条件下所产生的电子/空穴去催化还原/氧化底物,进而产生ROS或通过影响体内其他生物反应过程以实现肿瘤杀伤,有望规避上述PDT及PTT在肿瘤治疗中所面对的难题。因此,高性能光催化剂的设计及构建及其在低功率入射光照射下的抗肿瘤性能研究是当前肿瘤光学治疗研究中的一大热点。构建具有高效的近红外(NIR)光能捕selleck抑制剂获能力及酶催化性能的光催化剂在肿瘤PCT中十分关键。通过将等离子体金属/半导体纳米结构相结合,可以构建一种仿天然酶结构调控的光驱动的可变构纳米光催化剂,有利于实现其在复杂生理条件下催化活性的精确调控及高效的PCT。本论文首先将超小尺寸的氧化铈纳米粒组装到金纳米棒上,构建了一种亚纳米结构可变的金@氧化铈(STGC)纳米光催化剂。STGC中的金内核在808 nm低功率NIR光(50 m W cm~(-2))照射下可以产生高能热电子,随后金到氧化铈的热电子转移可以促使Ce~(4+)到Ce~(3+)的转变及活性的氧空位(OVs)的生成,导致STGC内部发生亚纳米结构转变。STGC的亚纳米结构转变增强了其类过氧化物酶(POD)活性,并激活了等离子体促进的类氧化酶(OXD)活性,能够有效诱导ROS的生成,具有显著的光催化性能。在实际肿瘤光学治疗中,高功率激光照射会不可避免地导致周围正常组织的坏死,因此需要以最小光强度实现有效的光学治疗。此外,由于激光穿过生物组织会导致其功率衰减,因此,对于深部肿瘤而言,低功率光照所诱导的有效PCT十分关键。由于STGC显著的光催化性能,其在细胞及体内抑瘤实验中能够有效提高ROS产率,实现低功率NIR光激活的高效肿瘤PCT。除了对肿瘤细胞的直接杀伤,近年来,光学治疗还被报道可以通过诱导肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡(ICD),进而激起机体的系统性免疫响应以抑制肿瘤细胞的转移。本论文进一步将半导体氧化铈纳米片组装在金纳米棒的两端,构建了各向异性的金/末端氧化铈纳米棒(GCNRs)。将半导体位点选择性地沉积在等离子体金属两端,能够使其有效捕获NIR光,并使光生电子/空穴与反应底物轻易接触,因而可以促进光生电子-空穴的有效分离,提高光生载流子的利用率及光催化活性。在808 nm较低功率NIR光(300 m W cm~(-2))照射下,GCNRs可以产生电子-空穴对,并凭借其末端沉积的结构实现有效的光生电子-空穴的分离。其中,热电子可以从金转移到氧化铈,促进Ce~(4+)到Ce~(3+)的转变及OVs的产生,显著提高GCNRs的类POD及类OXD活性,促进ROS的生成。产生的ROS能够诱导肿瘤细胞ICD以激起机体的免疫响应;同时,留在金纳米棒中的热空穴可以参与析氧反应(OER),以一种不依赖于过氧化氢的模式缓解肿瘤乏氧并诱导肿瘤部位浸润的M2型免疫抑制的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)反极化为抑瘤型M寻找更多1型TAM。因此,上述光催化过程中GCNRs所产生的热电子/空穴可以通过诱导ICD及缓解肿瘤乏氧,共同调节免疫抑制的肿瘤微环境(TME),从而可以实现强有力的肿瘤光免疫治疗,有效抑制原发瘤、远端瘤及转移瘤。本论文利用化学、物理、药剂学方法,并通过结构优化及表面配体修饰,构建了一系列基于金纳米棒的异质光催化剂用于肿瘤的光学治疗:(1)制备了亚纳米结构可变的金@氧化铈纳米棒,其可以通过仿天然酶的光驱变构介导的催化活性调控实现低功率NIR光刺激的肿瘤PCT;(2)构建各向异性的金/末端氧化铈纳米棒,利用其结构特性实现光生电子-空穴的有效分离,提高热载流子的利用率。通过热电子/空穴触发ROS介导的ICD诱导及OER介导的genetic homogeneity肿瘤乏氧缓解,共同调节免疫抑制的TME以实现高效的光免疫治疗。本论文为新型肿瘤光学治疗剂的开发及光催化剂在生物医疗领域的研究铺垫了理论实验基础并提供了新的思路。

模式生物线虫头摆和体曲行为的自动识别和分析

近年来,通过对秀丽隐杆线虫头部摆动和身体弯曲等运动行为的监测,可以有效的进行药物筛选、生态毒物评估、衰老以及人类疾病研究,为microbial remediation人类健康和长寿提供了科学基础和方案。先前的研究中,通过人工计数头部摆动和身体弯曲次数来评估其运动能力,为相关研究领域提供了重要见解。然点击此处而,随着实验数据集的不断扩大,人工计数往往是低通量的,而且容易造成人为的偏差。因此,使用高通量、自动化的方法来代替这种传统的计数方法是当前研究的主流。现有的自动化方法仍存在一些需要解决的问题,如行为分析不全面、识别准确率低以及适用场景专一等。为解决上述问题,本论文的研究工作如下:(1)针对现有的头尾识别方MK-1775法需要进行阈值分割、对拍摄环境依赖性高以及识别准确率低等问题,提出了一种基于卷积神经网络的头尾识别算法。首先,使用ResNet18网络作为主体结构,加入注意力机制构建了头尾识别网络模型;接下来,通过训练生成头部和尾部热图,并进行归一化处理;最后,分别对带有头部和尾部特征的卷积层应用可微空间数值变换输出头尾坐标。在实验部分,通过与传统头尾识别方法以及其它网络模型的对比分析,证明了算法的准确性和有效性。(2)针对传统的人工计数方法效率低下以及一些自动化方法无法全面的分析头部摆动行为等问题,提出了一种自动识别和分析线虫头部摆动行为的算法。首先,通过设计基于卷积神经网络的头尾识别算法来获得头尾坐标;随后,主干曲线被提取并根据弧长将其等分,标记等分点;接下来,角度计算公式被用来计算头部弯曲角度,进而根据每帧头部的弯曲角度来计算头部摆动次数,为后续行为分析提供基础数据;最后,通过实验证明了该算法的鲁棒性。(3)针对现有的身体弯曲识别和计数算法中存在的部分弯曲行为识别不准确、识别标准不统一、软件是专门为特定的环境设计等问题,提出了一种自动识别和分析线虫身体弯曲行为的算法。首先,使用基于卷积神经网络的头尾识别算法来获取头尾坐标;然后,使用基于形态学的坐标提取算法来获取身体中心线的坐标;随后,基于曲率的特征点提取算法被用来计算中心线的咽部、拐点以及峰值点坐标;接下来,根据每帧最大垂直距离的变化来计算身体弯曲次数并进行分析;最后,通过实验证明了所提算法的准确性和有效性。

我国妇产科护士药物处方范围及形式的研究

目的:本研究在前期研究基础上,查阅国外护士药物处方权相关资料,结合我国《临床药物手册》中妇产科相关药物,根据我国https://www.selleck.cn/products/mrtx849.html国情探讨三级甲等医院妇产科护士可以开具的妇产科药物处方内容与处方形式,为未来护士药物处方权实施提供参考。研究对象:省内外三级甲等医院妇产科工作的临床医疗专家与护理专家。专家选择的前提是原则上同意给予护士处方权。专家的纳入标准为:(1)副高级及以上职称;(2)在对应的临床科室工作10年及以上;(3)本科及以上学历。前三条标准符合两项即可。方法:1文献研究法:检索万方、中国知网中文数据库和外文数据库以及浏览国内外官方网站,文献检索关键词为妇产科药物、护士处方权。查阅国外护士权相关资料以及护士药物处方一览表中妇产科药物相关内容,整理出国外护士可开具的妇产科药物内容和形式,初步制定专家咨询问卷。2半结构访谈法:根据初步设计的咨询问卷制定访谈提纲,对三级甲等医院妇产科医疗专家与护理专家进行半结构访谈,专家的纳入标准为:(1)副高级及以上职称;(2)在对应的临床科室工作10年及以上;(3)本科及以上学历。前三条标准符合两项即可。并对访谈结果进行分析,对初步制定human medicine的专家咨询问卷进行修订,形成专家咨询问卷。3德尔菲法:邀请省内外三甲医院在妇产科工作的临床医疗专家与护理专家,进行两轮关于妇产科药物处方权内容的专家咨询,对咨询结果进行统计分析,得出本课题的研究结果。专家的纳入标准为:(1CCRG 81045)副高级及以上职称;(2)在对应的临床科室工作10年及以上;(3)本科及以上学历。前三条标准符合两项即可。其中第一轮专家咨询中医疗专家7名,护理专家13名,第二轮专家咨询中医疗专家6名,护理专家11名。本研究中两轮专家咨询的积极系数分别为75.0%和88.0%。结果:护士妇产科药物处方权研究两轮专家咨询问卷的有效回收率分别为45.45%、50%,权威系数分别为0.77、0.85。最终专家建议妇产科护士可以开具的妇产科药物为2大类9种药物。避孕药包括左炔诺孕酮;阴道内用药包括制霉菌素阴道泡腾片、硝酸咪康唑栓、克霉唑、硝酸益康唑栓、甲硝唑(阴道栓)、替硝唑阴道泡腾片、氧氟沙星阴道泡腾片、地瑞舒林。其中左炔诺孕酮倾向于协议/延长处方,制霉菌素泡腾阴道片、硝酸咪康唑栓、克霉唑、硝酸益康唑栓、氧氟沙星阴道泡腾片、地瑞舒林倾向于独立/协议处方,甲硝唑(阴道栓)、替硝唑阴道泡腾片倾向于独立处方。结论:建议妇产科护士可以开具的妇产科药物共2大类9种药物,1种药物处方形式倾向于协议/延长处方,6种药物处方形式倾向于独立/协议处方,2种药物处方形式倾向于独立处方。

不同语言水平孤独症儿童要求技能的特征及干预研究

要求通常是儿童获得的第一种语言行为,作为早期语言干预的起点,对孤独症儿童至关重要。孤独症儿童经常难以用恰当的方式来发起要求,容易产生一系列问题行为。目前,国内外与不同语言水平孤独症儿童要求技能特征相关的研究较少。研究者仍在探索适合孤独症儿童要求技能的评估工具。研究者在实践中发现改变玩具的玩法以及使用积极LY294002的语气语调有助于提升孤独症儿童的要求技能。因此,本研究在现有研究基础上重新编制一套要求技能的评估工具,使用该评估工具在有/无启动情境下评估,以了解无意义语言组和有意义语言组孤独症儿童发起和回应要求技能的特征。在特征研究的基础上,研究者通过阶梯式要求技能干预策略对5名不同语言水平的孤独症儿童进行10次个别化干预,每次干预30分钟。研究结果主要有以下几点:本研究综合考虑孤独症儿童的身心发展特征,编制出一套适用于学龄前不同语言水平孤独症儿童的评估工具。该工具包括评估材料包及要求行为(眼神/手势等)的编码及计分规则,能对孤独症儿童在有启动(改变玩具的一般玩法及使用积极的语气语调)和无启动(仅展示玩具的一般玩法)情境下的要求物品技能进行评估。本研究在有/无启动情境下对发起要求技能进行评估发现:有启动情境有助于提高两组孤独症儿童发起要求技能的得分,促进发起要求行为的发展。两组孤独症儿童,(1)在发起要求技能Nirmatrelvir的得分上,有启动情境显著高于无启动情境(P=0.000<0.01;P=0.011<0.05);(2)在发起要求行为类型及频数上,有启动情境下单行为(如:手势)的频数减少,双行为(如:眼神+手势)及三行为(如:眼神+手势+发声)的频数显著增加;发起要求行为中的眼神、手势及发声的频数都明显增加。本研究对比同一情境下两组孤独症儿童发起要求技能进行评估时发现:有意义语言组与无意义语言组孤独症儿童对比,前者发起要求技能及行为显著优于后者,(1)发起要求技能得分显著高于后者(P=0.001<0.01;P=0.015<0.05);(2)在发起要求行为类型及占比上,前者比后者使用更多的双行为及三行为,意义音节及简单句的占比显著高于后者。前者的发起要求技能虽然优于后者,但是有意义语言组孤独症儿童的发起要求技能与其语言能力存在不匹配现象。他们在使用语言发起要求时,易将主语或宾语遗漏。他们的语法及语用能力有待进一步提高。本研究对比两组孤独症儿童在有启动情境下回应要求技能发现:有意义语言组与无意义语言组孤独症儿童对比,前者回应要求技能显著优于后者,(1)回应要求技能得分显著高于后者(P=0.009<0.Targeted oncology01);(2)前者正确回应占比远高于后者,视觉提示及无反应占比均低于后者。干预的研究结果表明,阶梯式要求技能干预策略显著提高孤独症儿童要求技能,干预后,5名孤独症儿童发起要求技能得分及发起要求行为的类型及频数显著增加,回应要求的正确率显著提高。该策略包括体验、回应、发起、运用四个环节,以最近发展区及鹰架式教学为理论依据,综合考虑了不同情境对要求技能的影响。以上结论验证了干预策略的有效性。