目的:探讨ARSB(Arylsulfatase B)在胃癌(Gastric Cancer,GC)组织中的表达水平及其与胃癌患者预后的关系,初步明确ARSB对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制,为胃癌的早期诊断和治疗提供新的理论依据。方法:1、通过生物信息学分析,从基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO;GSE29998、GSE54129、GSE51575)和癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas;TCGA)数据库中下载胃癌患者的mRNA数据及临床数据,使用R软件的“limma”包采用Wilcox秩和检验来分析ARSB在胃癌患者中的表达差异水平;绘制ROC曲线评价精准度及灵敏度。采用“survival”R包和Kaplan-Meier Plotter在线网站进行生存率分析;应用卡方检验对ARSB与胃癌患者的临床指标进行相关性分析,Cox比例风险模型进行总体生存率的单因素和多因素分析ARSB在胃癌预后中的临床价值。2、体外细胞实验,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测四种胃癌细胞系AGS、HGC-27、MGC 803和MKN45中ARSB蛋白水平的表达,选取ARSB表达量相对较高的两种胃癌细胞系(AGS、HGC-27)利用小干扰RNA(siRNA)进行转染敲低ARSB的表达,利用Western blot检测转染效率;通过CCK-8细胞增殖实验检测ARSB敲低后胃癌细胞的增殖能力;细胞划痕实验评估ARSB敲低后胃癌细胞的迁移能力;流式细胞术测定ARSB敲低后胃癌细胞的凋亡情况;并利用Western blot验证ARSB调控WNT通路下游基因的表达。3、Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939对胃癌细胞生物学特性行为影响的实验。AGS和HGC-27两种胃癌细胞各分为4组:(1)空白对照组:XAV939(-)与ARSB siselleckchem R428RNA(-);(2)单独干扰组:ARSB siRNA(+)与XAV939(-);(3)单独抑制剂组:XAV939(+)与ARSB siRNA(-);(4)干扰联合抑制剂组:ARSB siRNA(Equine infectious anemia virus+)与XAV939(+)。通过Western blot检测经Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV939对胃癌细胞处理后ARSB蛋白表达的影响;探讨直接干扰Wnt信号通路是否会影响胃癌细胞系的功能;利用CCK-8细胞增殖实验与细胞划痕实验分别检测各组胃癌细胞增殖与迁移的情况。结果:1、通过分析GEO、TCGA数据库结果表明,ARSB在非配对胃癌组织中相较于正常组织呈高表达(P<0.05);同样,在配对组织中相较癌旁正常组织,ARSB也表现出在胃癌组织高表达的特点(P<0.001);ROC曲线显示ARSB对预测胃癌发生具有较高的准确性;生存分析结果表明:ARSB高表达患者其总生存期、无进展生存期、进展生存期相较于低表达患者均明显缩短;临床病理相关性分析提示ARSB与胃癌患者的临床指标T分期相关;Cox回归分析结果表明Aselleck GSKJ4RSB可作为影响胃癌患者预后的一个独立危险因素。2、Western blot结果提示ARSB在AGS和HGC-27两株细胞中表达较为显著,选用其用于后续的细胞功能实验。CCK-8细胞增殖实验结果显示,敲低ARSB对胃癌细胞增殖能力有明显抑制作用;细胞划痕实验结果表明敲低ARSB后胃癌细胞迁移能力显著减弱;流式细胞术检测结果表明敲低ARSB能促进胃癌细胞的凋亡;Western blot实验结果证明敲低ARSB可抑制WNT信号通路中β-catenin和c-Myc相关基因的表达。3、Western blot结果提示经Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939处理后两种胃癌细胞中ARSB蛋白表达水平明显下调;敲低ARSB联合Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV939能进一步抑制β-catenin和c-Myc的表达;CCK-8实验结果显示单独干扰组或单独抑制剂组均较空白对照组细胞的增殖能力降低(P<0.01),干扰联合抑制剂组细胞的增殖能力与空白对照组相比增殖能力降低更显著(P<0.001);细胞划痕实验结果提示单独干扰组或单独抑制剂组迁移能力较空白对照组降低(P<0.01),干扰联合抑制剂组细胞的迁移能力较空白对照组降低更显著(P<0.001)。结论:ARSB显著高表达的胃癌患者其生存时间更短;该基因是胃癌的一个预后独立危险因素。ARSB敲低能够抑制胃癌细胞AGS、HGC-27的增殖、迁移并促进胃癌细胞凋亡;ARSB通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞的恶性生物学行为。以上结果提示ARSB在胃癌的发生发展过程中发挥着重要作用。