基于转录组学探讨急性脑梗死血瘀证与神经功能关系的相关生物标志物研究

目的:临床部分一:研究筛选来我院就诊的急性脑梗死(ACI)患者,观察分析ACI血瘀证与神经功能缺损程度及预后之间的相关性,为ACI血瘀证早期诊断在预后评估中的作用提供依据。临床部分二:通过转录组学技术挖掘ACI血瘀证与神经功能关系的相关生物标志物,揭示ACI血瘀证与神经功能间的内在联系。实验部分:通过建立ACI血瘀证动物模型明确导致ACI血瘀证神经功能缺损程度加重的相关信号通路及蛋白表达,为ACI血瘀证神经功能的恢复治疗提供依据。方法:临床部分一:采用临床横断面研究,采集就诊于我院的ACI患者入院时一般资料、疾病史、凝血功能指标、中医证候积分、NIHSS评分、发病30d后mRs评分、MBI评分,通过单因素方差分析比较不同ACI血瘀程度组间疾病史、凝血功能指标的差异,分析ACI血瘀证与不同疾病史、凝血功能指标间的关系;采用Spearman相关性检验分析ACI血瘀证与NIHSS评分以及发病30d后mRs评分、MBI评分之间的相关性。临床部分二:采用高通量测序技术,检测ACI血瘀证、ACI非血瘀证、非中风对照组患者外周血mRNA表达情况,运用生物信息学算法分析每组样本FPKM表达值,采用ssGSEA和GSEA方法筛选ACI血瘀证与神经功能相关的差异信号通路,通过与神经功能关系的相关信号通路,筛选得到ACI血瘀证与神经功能关系的差异基因。运用RT-qPCR对筛选得到的关键差异基因进行验证,并采用ROC曲线面积评估差异基因对ACI血瘀证的诊断价值,明确ACI血瘀证与神经功能关系的相关生物标志物。实验部分:通过力竭游泳复合MCAO法建立ACI血瘀证动物模型,将实验动物分为空白、ACI模型、ACI血瘀证模型组。采用Zea Longa评分、血瘀辨证量表评分评估各组大鼠神经功能缺损程度及血瘀程度;通过TTC染色法观察各组大鼠脑梗死面积;运用Western-blot法检测各组大鼠neurotroselleckphin signaling pathwIVIG—intravenous immunoglobulinay中相关蛋白表达水平,以明确相关蛋白在ACI血瘀证中对神经功能的影响。结果:临床部分一:ACI临床常以多证候相兼为主要表现,血瘀证是ACI临床发生频率最高的证候,也是ACI主要的证候表现。ACI血瘀证的发生与吸烟史、冠心病病史、脑梗死病史密切MC3浓度相关。凝血功能指标FIB、DD2水平与ACI血瘀积分正相关,可以反应ACI血瘀程度。ACI血瘀积分与NIHSS评分、发病30天后mRs评分正相关,与发病30天后M…