6脂肪酸代谢产物白三烯B4 (LTB4)的受体白三烯B4受体1 (LTB4R1)属于G蛋白耦联受体(GPBI 10773小鼠CR)家族,是胰岛素抵抗、慢性炎症和2型糖尿病的潜在药物作用靶点。本文根据GPCR家族蛋白激活后可以引起细胞质内钙离子升高的原理,建立了96孔板体系LTB4R1抑制剂筛选模型。胞质内钙离子探针Fluo-8可以表征细胞质内的钙离子变化,当共转染LTB4R1和G蛋白α亚基16 (Gα16)的仓鼠卵巢癌细胞(CHO)受到LTB4刺激Entinostat核磁后,胞浆钙离子浓度升高, Fluo-8的荧光信号随之增强。LTB4R1抑制剂处理细胞后, Fluo-8的荧光信号减弱。本文以0.2%DMSO为阴性对照, LTB4R1抑制剂cp-105696为阳性对照建立筛选模型。经LTB4刺激后, 0.2%DMSO处理的细胞Fluo-8信号上升约2倍后缓慢回落,而cp-105696处理组则抑制LTB4的作用。Ltibiofibular open fractureTB4和抑制剂cp-105696浓度梯度实验表明, Fluo-8的荧光信号升高幅度和抑制剂的浓度成反比,可以作为评价待测化合物的抑制效果的指标。多次重复实验计算所得阳性与阴性对照Z’因子为0.777,证明该筛选模型稳定可靠。本文采用蛋白过表达方式在CHO细胞中构建了LTB4R1-内质网钙的信号通路,并在此基础上建立了通过检测钙信号强度来筛选化合物对LTB4R1抑制活性的体系。本方法可用于LTB4R1抑制剂先导化合物的体外初步筛选,为后续体内研究奠定基础。