目的:探究破坏破骨细胞内的p H稳态是否可以抑制破骨细胞的功能及改善去卵巢手术screen media后导致的骨质疏松症状方法:1.细胞水平:1.1提取骨髓巨噬细胞(BMMs),在含10%血清和巨噬细胞集落刺激因子的α-MEM培养基中培养,使用核因子κB受体活化因子配体(RAN KL)刺激3点击此处天后提取前体破骨细胞膜,制备包载Na_2HPO_4和Na Cl的脂质体(Na2HPO4@Lipo,Na Cl@Lipo),将前体破骨细胞膜(p OCm)与制备的脂质体分别杂交后制备Na_2HPO_4@Lipo-p OCm和Na Cl@Lipo-p OCm。1.2将巨噬细胞分成四组进行实验:巨噬细胞组、加RANKL刺激组、加RANKL刺激加Na_2HPO_4@Lipo-p OCm、加RANKL刺激加Na Cl@Lip o-p OCm,在细胞水平评估破坏细胞内p H稳态对破骨细胞功能的影响。1.3为探究破坏细胞内的p H稳态在转录水平的变化,将巨噬细胞、成熟破骨细胞、加Na_2HPO_4@Lipo-p OCm后的破骨细胞进行转录组测序(RNA-seq)。2.动物水平:2.1动物靶向实验,用脂质体包载吲哚青绿(ICG)后与前体破骨细胞膜杂交,制备ICG@Lipoo-pOCm,尾静脉注射后不同时间通过活体成像可视化位置分布。2.2 OVX模型导致的骨质疏松,40只10周的C57BL/C雌鼠随机分成5组:假手术组、OVX组、OVX+Na Cl@Lipo-p OCm组、OVX+Na_2HP O_4@Lipo和OVX+Na_2HPO_4@Lipo-p OCm组。Micro CT扫描后分析骨质AMG510丢失情况,组织切片后进行苏木精—伊红染色(HE)和酸性磷酸酶染色(TRAP)分析骨质情况。结果:1.细胞水平:1.1酸性磷酸酶染色(TRAP)、骨片吸收实验、RT-qPCR、流式细胞术、蛋白质印迹(Western Blot)等实验证实Na_2HPO_4@Lipo-p OCm破坏了破骨细胞内的p H稳态,导致破骨细胞的分化和功能受到抑制。1.2 RNA-seq证实破骨细胞分化能力下降,且FOXM1作为关键的转录因子在破坏细胞内pH后对破骨细胞的调控起主要作用。2.动物水平:2.1动物靶向实验证实脂质体与前体破骨细胞膜杂交后在体内具有靶向骨组织的作用,尤其是脊柱和双下肢。2.2 MicroCT显示Na_2HPO_4@Lipo-pOCm可以抑制OVX所导致的骨质疏松症状,增加了全身骨量,组织学切片染色(HE、TRAP)证实Na_2HPO_4@Lipo-p OCm在体内抑制了破骨细胞的功能。结论:1.Na_2HPO_4@Lipo-pOCm可以通过破坏破骨细胞内的pH稳态进而抑制破骨细胞2.FOXM1在破骨细胞分化成熟过程中起着重要调控作用,抑制FO XM1表达可以抑制破骨细胞分化。