背景:增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是一种复杂的纤维化改变的过程,是眼外伤和视网膜脱离术后常见的并发症,常导致视网膜脱离,造成严重的视力损害。其中视网膜色素上皮细胞(retinal pigmentCell Cycle抑制剂 epithelium,RPE)在PVR的发展中起到重要作用,RPE细胞在多种因素的影响下,去分化为成纤维细胞或巨噬细胞样细胞形态,纤维增殖膜逐渐形成,细胞不断收缩,最终牵拉导致PVR。Dispase是一种非特异性的中性金属蛋白酶,来源于多粘菌,可将细胞从周围基质中释放出来。血小板衍生生长因子(platelet-derived growth faGalunisertib NMRctor,PDGF)是创伤愈合过程中较早出现的生长因子之一,有助于伤口修复的某些细胞成分的迁移和增殖,在创伤愈合的全过程中起重要作用。甲基化-CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Me CP2)作为表观遗传学调控因素,通过调控转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)介导的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),进而调控视网膜纤维化。目的:Me CP2作为表观遗传修饰因子,在人PVR增殖膜中有显著表达。然而Me CP2在实验性PVR中的作用还未得到证实。本实验通过小鼠玻璃体腔注射Dispase+RPE、PDGF+RPE探索并建立稳定的小鼠PVR模型,并对小鼠眼球切片做HE染色、免疫组化染色及免疫荧光染色,探究Me CP2在实验性PVR增殖膜中的表达及意义。方法:48只健康C57BL/6J小鼠,随机分为4组,每组12只,分别为正常组、PBS对照组、Dispase+RPE组、PDGF+RPE组。本实验选取每只小鼠左眼作为实验观察眼。正常组:单纯饲养,不做任何处理;PBS对照组:PBS左眼玻璃体腔注射,1μL/眼;Dispase+RPE组:DispaseⅡ(0.02 U/μL)+ARPE-19(2×104/μL)左眼玻璃体腔注射,1μL/眼;PDGF+RPE组:PDGF-BB(0.5μg/m L)+ARPE-19(2×104/μL)左眼玻璃体腔注射,1μL/眼。全部实验眼于术后第7、14、21、28天在充分散瞳下行OCT检查及眼底照相,观察并记录玻璃体视网膜的改变,根据眼底表现,进行PVR分级。然后进行麻醉、处死、迅速摘除眼球、取材、石蜡包埋、HE染色、免疫组化染色、免疫荧光染色。通过免疫组织化学染色法观察PVR中Me CP2、TGF-β2、细胞角蛋白(cytokeratin,CK)、波形蛋白(Vimentin)、α-SMA、钙黏蛋白E(epithelial cadherin,E-cadherin)是否在转化的RPE细胞中表达以及Me CP2在不同组之间表达有无差异。通过免疫荧光双重染色法观察Me CP2与TGF-β2、α-SMA、CK是否存在共定位。结果:1、眼底照相、OCT检查下,正常组、PBS对照组玻璃体透明,视网膜分层清晰,各层组织结构正常;Dispase+RPE组、PDGF+RPE组观察至28天,玻璃体腔均出现致密增殖条带,牵引视网膜,出现视网膜褶皱、局部或大块脱离,导致PVR。但Dispase+RPE组较PDGF+RPE组病变速度快,病变程度偏重,前期即可导致视网膜脱离。第7天、14天、21天两组PVR分级结果比较有统计学意义(P<0.05),第28天两组PVR分级结果比较无统计学意义(P>0.05)。2、HE染色观察小鼠眼球切片,正常组、PBS对照组各层组织结构正常;Dispase+RPE组、Pgynaecological oncologyDGF+RPE组第28天可见较厚增殖膜,各层组织结构混乱,视网膜皱褶、断裂,部分或大块脱离。3、免疫组织化学染色结果显示PDGF+RPE组与正常组对比,Me CP2、TGF-β2、CK、Vimentin、α-SMA高表达,E-cadherin低表达。4、免疫荧光双重染色结果显示PDGF+RPE组中Me CP2与TGF-β2、α-SMA、CK均存在共定位。结论:1、Dispase+RPE、PDGF+RPE小鼠玻璃体腔注射均可以成功诱导PVR模型,但PDGF+RPE模型更接近人PVR进程,具有可行性和可重复性。2、Me CP2在PVR的发病中具有重要作用,从而促成小鼠RPE细胞上皮间质转化和视网膜纤维化。