芥酸是可再生的重要精细化工原料,目前,植物油是芥酸的重要来源,油菜又是全球重要的经济与油料作物,而芥酸的含medical specialist量将影响油菜的品质和用途。植物芥酸是在以FAE1(Fatty acid elongase 1)编码的β-酮脂酰-Co A合酶为关键限速酶的多酶复合体的催化下合成的,b ZIP(Basic leucine zipper,b ZIP)转录因子脱落酸不敏感5(Abscisic acid-insensitive 5,ABI5)在脱落酸(AbscisicPanobinostat分子量 Acid,ABA)介导的信号通路中起关键作用,中介体亚基Mediator25(MED25)在转录过程的多个步骤起到重要的作用。已有研究表明外源ABA对油菜种子的芥酸含量有影响,但ABI5是否参与芥酸合成及具体的调控机制尚不清楚同时MED25是否通过与ABI5互作参与调控芥酸合成未见报道。本文关注研究调控种子生长发育重要的转录因子ABI5,将其进行功能分析,探究ABI5在芥酸合成途径中起到的作用和机制以及验证MED25是否通过ABI5参与芥酸合成,从而为深入探究ABA信号通路调控芥酸合成的机制,以及为改良油菜品质提供一些新的思路。因此,为了证实ABI5对芥酸合成的调控机制,本研究得到了以下实验结果:1.从“中油821”中克隆出BnABI5片段,c DNA总全长为1321bp,编码一个包含437个氨基酸的蛋白,蛋白序列第349到413的氨基酸含有b ZIP家族典型的BRLZ结构域(BRLZ,Basic region leucin zipper),说明BnABI5是属于碱性亮氨酸拉链类型的转录因子。亚细胞定位预测结果表明BnABI5蛋白定位于细胞核中。将携带BnABI5的亚细胞定位重组质粒1302-BnABI5-GFP以及Marker共转入GV3101,注射法转化烟草下表皮细胞,荧光显微镜观察到的绿色荧光表明BnABI5蛋白与Marker共定位于细胞核中。2.从“中油821”中克隆得到BnFAE1启动子共1310bp,序列中含有TATAbox和CAAT-box等基本的核心启动子元件,植物激素、生长发育和逆境等的重要元件以及与BnABI5结合的G-box和G-box-like序列等,根据序列分析和结合位点预测将BnFAE1启动子分为3段。3.构建BnABI5启动子和的BnFAE1启动子GUS表达载体,转化野生型拟南芥,获得1301-p BnABI5-GUS和1301-p BnFAE1-GUS转基因拟南芥各两个株系,对T3代转基因拟南芥进行GUS活性分析,结果表明BnABI5启动子和BnFAE1启动子分别能够驱动GUS报告基因的表达,BnABI5基因在拟南芥的根、茎、叶脉、叶柄、花、果荚和种子中均有活性;BnFAE1在种子中表现出有活性,而在幼苗期叶柄和叶片交界处也有表达。4.酵母单杂交和双荧光素酶实验证明BnABI5转录因子能与BnFAE1基因启动子全长以及截短体P2和P3结合。构建BnABI5过表达载体,转化野生型拟南芥,获得1302-BnABI5-GFP转基因拟南芥的两个株系,对T3代转基因拟南芥进行At FAE1基因表达量检测和芥酸含量测定,结果表明BnABI5正调控调控At FAE1基因表达并且促进芥酸合成。5.以“中油821”的果荚c DNA为模板GNE-140半抑制浓度克隆出MED25片段,c DNA全长2437bp,并编码一个含有811个氨基酸的蛋白。酵母双杂、双分子荧光互补可知BnABI5转录因子能与中介体亚基BnMED25相互作用。再综合双荧光素酶结果可知BnMED25参与调控BnABI5的表达进而影响芥酸的合成。