目的:加味过敏煎是根据“以皮治皮”理论在过敏煎的基础上形成的,是治疗特应性皮炎(AD)的经验方剂,临床疗效良好。本文旨在探索加味过敏煎对AD小鼠皮肤肥大细胞和M2a巨噬细胞极化的影响。方法:6周龄SPF级BALB/c小鼠在正常周期光暗循环条件下适应性喂养7天后,分为正常对照组(C)、模型组(M)、过敏煎组(G)、加味过敏煎组(JG)、富马酸酮替芬组(K),每组雌雄各半。使用0.15%2,4二硝基氟苯(DNFB)进行造模,从Z-VAD-FMK细胞培养造模的第8天开始,C组、M组给予等量生理盐水灌胃,G、JG组小鼠给予相应药物灌胃,K组以生理盐水稀释至0.33%浓度灌胃,持续两周,第21天灌胃完后2小时进行取材。1.探索加味过敏煎对AD小鼠肥大细胞脱颗粒的影响:主要观察小鼠一般状态;用摄像机记录观察小鼠的搔抓情况;HE染色观察小鼠皮肤病理改变;检测肥大细胞脱颗粒率;q-PCR和WB检测IL-4、IL-13在皮肤组织中的表达。2.观察加味Genital infection过敏煎对AD小鼠皮肤M2a巨噬细胞极化的影响:通过q-PCR、WB检测小鼠皮肤中IL10、IL-1Ra、TGF-β、ARG1的表达;免疫荧光技术检测小鼠皮肤中ARG1的表达。采用SPSS23.0统计软件对实验数据进行统计学分析。结果:(1)小鼠一般状态观察:造模后,M组小鼠皮肤增厚,呈片状破溃,可见明显渗液和结痂,G、JG、K组皮肤色红程度不一,创面大小不一,部分可见轻微渗液。K组未见明显的结痂,但皮肤基底部色红,皮肤薄弱。JG组小鼠周围皮肤呈正常肤色,中心区域微红,创面范围小于G组,总体情况优于G组。NSC 125973细胞培养(2)造模后M、G、JG、K组小鼠搔抓次数明显增加,较C组有显著性差异(P<0.05);给药干预后,G、JG与K组搔抓次数明显减少,呈现出先增后减的趋势,G、JG、K组较M组有显著性差异(P<0.05),但G、JG与K组之间没有明显差异(P>0.05)。(3)皮肤M2a巨噬细胞活化因子IL-4、IL-13蛋白量和mRNA表达情况:M组与C组相比表达明显升高(P<0.05);G、JG、K组与M组相比表达明显降低,差异均具有显著性(P<0.05),G和JG之间IL-4的蛋白量表达具有明显差异(P<0.05),但是G和JG之间IL-4 mRNA的表达未见明显差异(P>0.05)。(4)皮肤M2a巨噬细胞特异性蛋白ARG1荧光强度:K、G、JG组的ARG1蛋白表达少于M组,且K组的ARG1蛋白表达减少比G、JG组更加明显。(5)皮肤M2a巨噬细胞极化的关键指标TGF-β、IL-10、IL-1Ra、ARG1蛋白量和mRNA表达情况:与M组相比,给药后G、JG、K组各指标的表达明显下降(P<0.05),但是G、JG组的M2a巨噬细胞极化的标志蛋白和关键指标的表达没有显著差异(P>0.05)。结论:加味过敏煎可有效减少单位时间内小鼠的搔抓次数,改善小鼠皮肤瘙痒缓解AD可能与减少肥大细胞脱颗粒炎性因子释放抑制M2a巨噬细胞的极化有关。