目的:探讨HPV16病毒E6基因295T/G和E7基因647A/G多态性位点对免疫相关分子STAT1和IRF9的表达影响,为预防和治疗宫颈癌奠定基础。方法:(1)提取165例HPV16阳性感染的宫颈细胞样本中的DNA,采用PCR实验对E6和E7基因进行扩增,并进行Sanger测序。将测序结果与NCBI上提供的标准欧洲序列进行比较分析,同时构建出系统进化树。(2)分别在Ha Ca T、293T、C33A和Si Ha四种细胞中感染HPV16 E6-295T/E7 647A过表达未变异组、E6-295T/E7-647G、E6-295G/E7-647A和E6-295GLorlatinib作用/E7-647G过表达变异组慢病毒载体。(3)利用RT-q PCR检测HPV16 E6和E7 m RNA的表达水平,Western Blot实验检测E6和E7不同多态性位点对STAT1和IRF9分子表达的影响(STAT1和IRF9是IFNκ信号途径重要复合物,可以影响天然免疫分子的表达)。(4)得到的数据均采用IBM SPSS Statistics 26作出统计学的科学分析,以P<0.05认为差异有统计学意义。结果:(1)提取宫颈细胞样本DNA,对HPV16 E6及E7基因进行测序,得到E6和E7基因的变异位点的信息,并进行统计学分析,发现宫颈癌细胞中E6-295T/G变异在维吾尔族和汉族之间无显著性差异(P>0.05);汉族宫颈癌细胞中E7-647A/G位点变异明显高于维吾尔族,差异具有统计学意义(P<0.05)。构建E6和E7系统进化树后,发现有142例样本属于欧洲株(NCBI:NC＿001526.4),其余23例为亚洲株(NCBI:AF534061),未见美洲株和其他株。(2)构建E6和E7多态性位点慢病毒过表达载体,并感染4种细胞系,利用Western Blot检测信号转导和转录激活因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)和干扰素调节因子9(Interferon regulatory factors 9,IRF9)的表达水平变化,结果显示(1)在Ha Ca T细胞中分别过表达E6-295T/E7-647A、E6-295T/E7-647G、E6-295G/E7-647A和E6-295G/E7-647G多态性位点慢病毒载体会导致STAT1的表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。并且E6-295G/E7-647A和E6-295G/E7-647G变异组明显低于E6-295T/E7-647G变异组,E6-295T/EGSI-IX研究购买7-647G变异组明显低于E6-295T/E7-647A未变异组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)在293T细胞中过表达E6-295G/E7-647A和E6-295G/E7-647G多态性位点慢病毒载体可以导致STAT1表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)C33A细胞中分别过表达这四个多态性位点慢病毒载体会导致STAT1表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),并且E6-295G/E7-647G明显高于E6-295G/E7-647A;E6-295G/E7-647A明显高于E6-295T/impedimetric immunosensorE7-647G和E6-295T/E7-647A组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)Si Ha细胞分别过表达这四个多态性位点慢病毒载体可以使E6-295T/E7-647A、E6-295G/E7-647A和E6-295G/E7-647G组STAT1表达水平明显高于对照组,并且E6-295G/E7-647A组STAT1表达水平最高,明显高于其他组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)在293T细胞中分别过表达这四个多态性位点慢病毒载体会导致IRF9表达水平明显低于对照组,并且E6-295G/E7-647G组IRF9表达明显低于E6-295G/E7-647A;E6-295G/E7-647A组IRF9表达明显低于E6-295T/E7-647A和E6-295T/E7-647G组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(6)这四个不同多态性慢病毒载体分别感染Ha Ca T细胞后,IRF9表达明显低于对照组,并且E6-295G/E7-647A明显低于E6-295G/E7-647G组;E6-295G/E7-647G组明显低于E6-295T/E7-647A和E6-295T/E7-647G组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(7)C33A细胞中分别过表达这四个多态性位点慢病毒载体会导致IRF9表达水平明显高于对照组,并且E6-295G/E7-647A组IRF9表达水平明显高于E6-295G/E7-647G和E6-295T/E7-647G组;E6-295G/E7-647G和E6-295T/E7-647G组明显高于E6-295T/E7-647A,差异具有统计学意义(P<0.05)。(8)这四个不同多态性慢病毒载体分别感染Si Ha细胞后,IRF9表达明显高于对照组,并且E6-295G/E7-647G明显高于E6-295G/E7-647A组和E6-295T/E7-647G组;E6-295G/E7-647A组和E6-295T/E7-647G组明显高于E6-295T/E7-647A未变异组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)本研究的宫颈细胞样本感染HPV16 E6和E7型主要为欧洲株,E7-647G位点变异主要发生在汉族宫颈癌中。(2)当HPV16 E6-295T/G和E7-647A/G不同多态性位点慢病毒载体感染293T和Ha Ca T非癌细胞后,使细胞STAT1和IRF9蛋白质表达水平明显降低,且E6-295G变异下降程度最强。感染C33A和Si Ha宫颈癌细胞后,STAT1和IRF9蛋白质表达水平明显升高,且E6-295G变异升高程度最强。