目的 应用CRISPR/cas9技术构建敲除CD19的Raji-Luc淋巴瘤细胞，并对其免疫逃逸能力进行初步验证。方法构建PB-CRISPR-CD19小向导RNA(small guide RNA, sgRNA)质粒，筛选最优的sgRNA序列，用pCAG-PBase转座Ferrostatin-1酶、PB-combined remediationCD19 sgRNA及PB-CRISPR-Cas9共同电转染Raji-Luc细胞，采用流式分选和极限稀释法筛选得到稳定敲除的单克隆细胞株。经过基因序列检测对敲除效果进行验证；酶标仪检测细胞系表面荧光素酶的表达情况；以实验室前期构建的CD19 CAR-T和CD38 CAR-T作为效应细胞，用荧光素酶化学发光法验证Raji-Luc CD19 KO细胞株的SAHA体内实验剂量免疫逃逸能力。结果 电转染制备的Raji-Luc CD19 KO细胞转染效率较高，筛选所得两组单克隆细胞敲除效率均达到99%以上，与原始Raji-Luc细胞的荧光素酶表达无显著差异，且不能激活CD19 CAR-T细胞对其进行杀伤。结论 成功构建了Raji-Luc CD19 KO淋巴瘤细胞系。