目的:乳腺癌是最常见的恶性肿瘤之一,对女性的生活质量和总生存率有显著影响。其中,三阴性乳腺癌中ER、PR、HER2表达阴性,恶性程度最高。三阴性乳腺癌复发、转移率高是导致患者死亡率增加的主要原因。F框/WD-40域蛋白11基因(FBXW11)是F-box蛋白家族的一个成员,其特征在于其大约含有40个氨基酸基序。FBXW11通过控制与肿瘤细胞增殖和迁移率相关的关键蛋白质的周转,在癌症发展中起着关键作用。研究表明FBXW11对胚胎发育至关重要,在β-连环蛋白/Wnt和NF-κB等信号通路中起关键作用,同时也调节HH和RAS信号通路。FBXW11也在多种肿瘤中发挥作用,如皮肤肿瘤,宫颈癌细胞,肺癌,胰腺癌等。FBXW11与β-连环蛋白/Wnt和Colforsin试剂NF-κB信号通路紧密相关。但FBXW11在乳腺癌中作用尚未见报道。在本研究中探讨FBXW11在三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HCC-1937中的表达以及蛋白表达改变后其对细胞增殖和迁移的影响,进一步证明FBXW11在三阴性乳腺癌中发挥作用,从而为乳腺癌的诊断和治疗提供一定的理论参考。方法:1、采用生物信息学方法利用The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库信息分析FBXW11在各种癌症组织中的相对表达量,从TCGA数据库中,提milk microbiome取正常乳腺组织样本和三阴性乳腺癌组织样本,分析FBXW11在临床三阴性乳腺癌样本和正常组织中的表达情况。2、采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法从乳腺癌细胞MDA-MB-231中扩增FBXW11全长开放阅读框基因,双酶切后经连接,转化,构建FBXW11过表达重组GV141-FBXW11载体,经测序确定重组载体构建成功。3、采用慢病毒感染的方式,构建FBXW11过表达的两种细胞株以及小干扰敲降FBXW11的细胞株,并用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western Blot法验证FBXW11的过表达及敲降效率。4、采用平板克隆形成实验检测FBXW11蛋白表达改变对乳腺癌细胞增殖的影响。采用划痕实验检测FBXW11蛋白表达改变对乳腺癌细胞迁移的影响。再用Transwell小室实验检测FBXW11蛋白表达改变对侵袭的影响。5、采用免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测FBXW11蛋白表达改变后β-连环蛋白、c-Myc、GSK-3β等蛋白的表达水平差异。6、采用免疫荧光(Immunofluorescence technique,IF)技术检测FBXW11与β-连环蛋白的共定位作用。结果:1、通过TCGA和HPA数据库分析,乳腺癌组织中FBXW11的表达水平低于正常组织。2、测序结果表明成功构建重组载体。3、两种细胞株感染慢病毒后RT-q PCR和Western Blot实验表明FBXW11在m RNA水平和蛋白水平均明显过表达。小干扰转染细胞后,Western Blot实验表明FBXW11蛋白表达量明显下降。4、平板克隆形成实验显示FBXW11过表达细胞株克隆形成率比对照组低,而敲降FBXW11的细胞株克隆形成率较高。5、划痕实验和Transwell小室实验表明FBXW11过表达抑制乳腺癌细胞的迁移,而敲降FBXW11后迁移能力增强。6、免疫荧光实验表明FBXW11和β-连环蛋白两者存在共定位。Western Blot实验表明FBXW11蛋白水平的改变会影响Wnt/β-连环蛋白通路。结论:1.FBXW11在乳腺癌细胞MDA-MB-231和HCC-1937中呈低水平表达。在组织中,FBXW11的表达水平较低。2.敲降FBXW11能促进乳腺癌细胞MDA-MB-231与HCC-1937的增殖和迁移。而过表达FBXW11抑制增殖、和迁移能力。3.FBXW11的蛋白水平会影响β-连环蛋白蛋白表达,且FBXW11与β-连环蛋白存在共定位。4.FBXW11通过参与Wnt/β-连环蛋白信号通路进而乳腺癌得发Cobimetinib试剂生发展。5.FBXW11在裸鼠体内抑制肿瘤的生长。