5种苹果病毒多重PCR检测体系的建立

苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎沟病毒（A更多SGV）、苹果茎痘病毒（ASPV）、苹果坏死花叶病毒（ApNMV）和苹果锈果类病毒（ASSVd）是影响我国苹果产业健康发展的重要病毒病害，建立快速、准确的检测方法是防控病毒病的基础。分别设计了ACLSV、ApNMV和ASSVd 3种病毒的检测引物ACL-F1/R1、ApN-F2/R2和ASS-F1/R1，片段的大小分别为1 112、1 025、213 bp。利用新设计和已报道的苹RP56976果病毒特异性引物，通过引物检测效果比较、组合筛选、用量优化及退火温度调试，建立了5种苹果病毒多重PCR检测体系。该检测体系的扩增片段大小分别为biocatalytic dehydrationACLSV 1 112 bp、ApNMV 640 bp、ASGV 449 bp、ASPV 349 bp和ASSVd 213 bp。利用多重PCR和单一PCR分别对50份田间苹果样品进行病毒检测，结果显示，各样品多重PCR检测与单一PCR检测结果一致，表明本研究建立的多重RT-PCR方法可准确、快速、高效地检测单一或复合侵染的5种苹果病毒。