研究背景:溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种反复发作的慢性非特异性炎症性肠病,目前尚缺乏疗效好、副作用少的治疗UC的药物。黄连(Coptidis Rhizoma)具有改善溃疡性结肠炎的作用,但具体机制不明。去甲乌药碱(Higenamine,Hig)是一种从黄连中提取出来的小檗碱类化合物,具有抗氧化、抗炎、调节免疫的作用。近年来研究发现,去甲乌药碱在肠缺血再灌注损伤、过敏性鼻炎、类风湿性关节炎等疾病中具有保护作用。然而去甲乌药碱是否可以治疗UC目前尚不清楚。研究目的:探究去甲乌药碱对缓解UC的功效,并阐明其改善UC的作用机制。研究方法:1.网络药理学研究:在TCMSP和SymMap上检索黄连活性成分;使用PharmMapper并对黄连活性成分Baricitinib分子量进行靶点预测;在OMIM和Genecards数据库上获取与UC相关的疾病靶点,并使用Venny2.1分别和黄连、去甲乌药碱进行交集,从而获取共同靶点;对共同靶点用R 4.0.2进行KEGG通路富集分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、GO 功能注释分析(Gene Ontology,GO);使用String、Cytoscape3.9.0对共同靶点构建蛋白互作网络。2.动物实验:选用雄性C57BL小鼠随机化分组。正常组每日自由饮用纯水,其余每组自由饮用3.5%葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导小鼠3.急性结肠炎。治疗组每日予去甲乌药碱腹腔注射。每天评估疾病活动指数(Disease activity index,DAI),实验第7天处死小鼠并留取结肠,量取结肠长度。Elisa法检测结肠内IL-6、TNF-α、CXCL1、CXCL2、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平;Ly6G免疫荧光染色观察中性粒细胞浸润情况;Western blot、免疫组化测定结肠ZO-1、Occludin蛋白表达情况;PAS染色标记杯状细胞;Western blot测定AKT、p-AKT表达水平。4.细胞实验:用Caco-2细胞模拟肠上皮细胞,用1ug/ml脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激Caco-2细胞建立炎症模型,同时给予去甲乌药碱干预。采用CCK8检测去甲乌药碱的细胞毒性,qPCR检测IL-6、TNF-α的mRNA表达水平。Western blot检测AKT和p-AKT的表达水平研究结果:1.黄连与UC相交靶点210个,去甲乌diABZI STING agonist体内实验剂量药碱与UC相交靶点162个。KEGG通路富集分析显示去甲乌药碱可能通过调节PI3K-AKT信号通路在UC中起作用。2.动物实验发现去甲乌药碱治疗后结肠炎小鼠DAI评分、结肠炎症、肠道屏障明显改善。细胞实验表明去甲乌药碱具有促进增殖、降低炎症水平作用。此外,动物实验和细胞实验均表明去甲乌药碱可以影响PI3K-AKT信号通路。研究结论:去甲乌药碱可以缓解urogenital tract infectionDSS诱导的小鼠结肠炎,其机制可能是通过调节PI3K-AKT信号通路从而抑制结肠炎症、减少结肠中性粒细胞浸润、改善肠道屏障。