过表达FOXO1脂肪干细胞调控自噬对高糖诱导足细胞损伤修复的机制研究

目的 本研究旨在探究过表达FOXO1的脂肪干细胞(adPanobinostatipose-derived stem cells, ADSCs)在高糖诱导足细胞损伤修复中的作用机制。方法 利用胶原酶消化法分离ADSCs。通过慢病毒感染ADSCs来构建过表达FOXO1的ADSCs[ADSCs(FOXO1+)]。实验分为对照组、高糖组、高糖+ADSCs组、高糖+ADSCs(FOXO1+)组和高糖+ADSCs(FOXO1+)+自噬抑制剂3-MA组。利用茜素红染色检测ADSCs成骨分化能力。应用油红O染色检测ADSCs成脂分化能力。通过CCK-8法和流式细胞术检测MPC5细胞活力和细胞凋亡。通过免疫荧光检测MPC5细胞自噬相关蛋白LC3。采用Western blot法检测FOXO1、Bax、Bcl-2、p62和LC3-Ⅱ的蛋白表达。结果 流式细胞术检测显示CD29和CD90在ADSCs中高表达，而CD34和CD45表达极低；此外，茜素红染色和油红O染色结果都证实了成功分离了ADSCs。Western blot法检测结果显示，FOXO1在ADSCs(FOXO1+)细胞中高表达，表明慢病毒转染成功；同时，ADSCs(FOXO1+)细胞与MPC5细胞间接共培养明显提高MPC5细胞的FOXO1表达水平。CCK-8和流式细胞术检测发现，FOXO1过表达能够显著增强高糖诱导的MPC5细胞活力和减弱细胞凋亡。另外，免疫荧光检测表明FOXO1过表达能够促进高糖抑制的MPC5细胞自噬。同时，加入自噬抑制剂3-MA可减弱ADSCBiofuel productions(FOXO1+)细胞对高糖Tezacaftor抑制剂诱导足细胞损伤的修复作用。结论 过表达FOXO1的ADSCs具有修复糖尿病肾病足细胞损伤的作用，其作用机制是通过促进细胞自噬有效抑制高糖诱导的MPC5细胞凋亡。