目的 筛选并构建成功表达A亚型人呼吸道合胞病毒(Human RespiratorComponents of the Immune Systemy Syncytial Virus, HRSV)融合前构象F蛋白的重组人5型腺病毒(Recombinant Human type5 adMirdametinibenovirus, rHADV-5),为制备和研发HRSV重组腺病毒载体疫Nirmatrelvir说明书苗奠定基础。方法 在真核表达载体pcDNA3.1(+)上插入具有不同突变位点的HRSV F蛋白编码序列，利用融合前F蛋白单克隆抗体AM14和D25筛选HRSV F蛋白突变体；通过同源重组将筛选出的前构象F蛋白突变体编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体，在HEK293细胞中进行重组病毒的包装和扩增，经氯化铯密度梯度法获得纯化的重组病毒；应用夹心ELISA法和Western blot鉴定F蛋白的表达及构象。结果 通过AM14和D25单克隆抗体筛选出了2个稳定维持在融和前构象的HRSV F蛋白序列(SC-3M和SC-5M)。将SC-3M和SC-5M编码序列插入非复制型人5型腺病毒载体，对两种重组人5型腺病毒(pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M)和空载体(pAd5-vector)纯化，病毒滴度分别达到2.016×10~(10),2.52×10~(10)和2.948×10~(11) IU/mL。pAd5-SC-3M和pAd5-SC-5M感染HEK293后均能高效表达HRSV融合前构象的F蛋白并维持三聚体结构，且pAd5-SC-5M感染细胞中F蛋白表达量高于pAd5-SC-3M。结论 成功在体外传代细胞中获得可高效表达A型HRSV融合前F蛋白的重组人5型腺病毒，为进一步通过动物试验评价该HRSV重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。