目的:肝癌的发病率和死亡率均较高,现有治疗手段效果不佳,严重危害人民健康。既往研究发现,中药胡芦巴的主要活性成分薯蓣皂苷元具有一定的抗肝癌活性,但其具体作用机制不详。另外有研究提示,Hippo信号通路在肝癌等多种肿瘤的发病机理中发挥重要作用。通过网络药理学和分子对接技术,我们发现薯蓣皂苷元抗肝细胞癌作用的核心基因为SRC,故推测薯蓣皂苷元可以通过调控c-Src/Hippo信号通路发挥抗肝癌作用。因此,本研究拟探索薯蓣皂苷元的抗肝癌活性和作用机理。本课题的完成有望为肝癌的临床诊断和治疗提供新的思路。方法:1.基于网络药理学和分子对接方法探讨中药胡芦巴治疗肝细胞癌的主要活性成分及其潜在作用靶点。2.探索c-Src/Hippo信号通路相关分子在肝细胞癌中表达水平及其与疾病发生发展的关系。本研究利用RT-q PCR和Western Blot检测通路相关分子在新鲜肝癌组织和配对癌旁组织中的表达差异情况,对生物信息学数据进行验证。并通过IHC技术检测肝癌组织石蜡切片中c-Src,YAP的蛋白表达水平及细胞定位,回顾性分析其与临床指标(血清AFP水平、肿瘤临床分期、生存时间等)的相关性,评估其临床意义。3.探索薯蓣皂苷元的抗肝癌活性及其对c-Src/Hippo信号通路的调控作用。研究采用MHCC-97H和Hep G2两种人肝癌细胞株进行探索,将细胞分为对照组、薯蓣皂苷元低、高浓度处理组、Hippo信号通路抑制剂组、薯蓣皂苷元和Hippo信号通路抑制剂混合共培养组。分别从增殖(CCK-8法、Ed U染色法)、凋亡(TUNEL法)、侵袭转移(划medical staff痕实验、Transwell实验)多个方向Z-IETD-FMK MW探索薯蓣皂苷元对肝癌细胞的抑制作用,并应用Western Blot检测薯蓣皂苷元对凋亡表型相关分子标志物以及c-Src/Hippo信号通路的调控作用,最后利用Hippo信号通路抑制剂XMU-MP-1进行回复实验进一步验证薯蓣皂苷元可以通过调控c-Src/Hippo信号通路发挥抗肝细胞癌作用。结果:1.借助网络药理学和分子对接方法,最终我们得知中药胡芦巴治疗肝细胞癌的主要活性成分为薯蓣皂苷元、对接核心基因为SRC。2.临床研究显示,与正常肝组织相比,c-Src/Hippo信号通路相关分子c-Src、Lats1、YAP在肝癌组织中高表达,且差异具有统计学意义(P<0.001);相关分析表明,c-Src蛋白表达水平与小体积肿瘤、肝硬化关系密切(P=0.043,P=0.016),YAP表达只与大体积肿瘤存在关联(P=0.03),两者与其他临床、病理特征未见相关;预后分析表明,YAP高表达是影响临床肝癌预后的独立危险因素。3.体外细胞实验表明,与对照组相比,薯蓣皂苷元处理人肝癌细胞株MHCC-97H和Hep G2后,两种细胞的增殖、侵袭转移能力均明显受到抑制,并且细胞凋亡增加(P<0.05)。但经Hippo信号通路抑制剂XMU-MP-1预处理后,与薯蓣皂苷元组相比,共培养组的细胞增殖、侵袭转移能力增加,细胞凋亡进程减慢(P<0.05),使得薯蓣皂苷元的抗肝癌效应得到有效逆转。并且XMU-MP-1预处理两种肝癌细胞可以增加薯蓣皂苷元下调的p-Src、YAP蛋白表达,抑制薯蓣皂苷元上调的p-Lats1、p-YAP蛋白表达,回复效果明显。结论:中药胡芦巴治疗肝细胞癌的主要活性成分为薯蓣皂苷元、作用靶点蛋白为cSrc;c-Src/Hippo信号通路相关分子表达水平与肝癌患NSC 127716采购者疾病严重程度和预后生存密切相关;薯蓣皂苷元可以通过调控c-Src/Hippo信号通路发挥抗肝细胞癌作用。