研究背景小胶质细胞是中枢神经系统中的常驻免疫细胞,既往研究提示小胶质细胞吞噬Aβ后将导致溶酶体膜通透化(LMP),继而激活NLRP3炎性小体,引起炎性级联反应及小胶质细胞介导的神经元损伤。抑制AD转基因鼠中NLRP3炎性小体活化可下调IL-1β,并促进小胶质细胞从M1型向M2型转化,从而改善AD鼠空间记忆受损及行为异常。莱菔硫烷(SFN)具有很强的抗氧化、抗炎作用,在阿尔茨海默病(AD)等多种神经变性病中具有保护作用,但SFN是否可抑制Aβ诱导的原代小胶质细胞中NLRP3炎性小体活化,及其潜在机制尚不清楚。研究目的本研究旨在探讨SFN是否能抑制Aβ诱导的原代小胶质细胞溶酶体膜通透化及NLRP3炎性小体活化,从而调控小胶质细胞M1/M2分型转化,减少小胶质细胞介导的神经元损伤。并进一步探讨活性氧(ROS)、自噬在其中的作用。研究方法1.CCK8、LDH法检测Aβ对原代小胶质细胞活性、毒性的影响;2.CCK8法检测Aβ或者Aβ作用于小胶质细胞后获得的条件培养基(CM)对神经元活性的影响;3.斑点印迹法检测CM中Aβ含量;4.qPCR、WB检测Aβ诱导的小胶质细胞、转基因AD鼠海马中NLRP3、caspase-1PF-07321332试剂、IL-1β表达;5.WB检测Aβ诱导的小胶质细胞、转基因AD鼠海selleck抑制剂马中LC3、P62表达,吖啶橙染色观察小胶质细胞溶酶体膜通透性;6.流式细胞术检测Aβ诱导的小胶质细胞中ROS、CD16/32、CD206表达。研究结果1.CCK8、LDH结果提示SFN能够逆转Aβ诱导的小胶质细胞毒性作用;2.CCK8结果提示SFN能够抑制Aβ对神经元的直HPV infection接毒性作用和Aβ通过诱导小胶质细胞活化介导的间接神经元毒性作用;3.斑点印迹、qPCR及流式细胞术结果提示SFN抑制小胶质细胞介导的Aβ对神经元的间接毒性作用与降低CM中Aβ含量无关,与抑制小胶质细胞炎性反应和M1转化有关;4.qPCR、WB结果提示SFN能够抑制Aβ诱导的小胶质细胞NLRP3炎性小体活化;5.WB、吖啶橙染色结果提示SFN和3-MA(自噬起始阶段抑制剂)都能够抑制Aβ诱导的小胶质细胞自噬流阻滞和LMP,自噬流阻滞在NLRP3炎性小体激活上游;6.流式细胞术和WB结果提示SFN和NAC(ROS抑制剂)都可通过减少细胞内ROS,从而抑制Aβ诱导的小胶质细胞自噬/NLRP3通路激活。结论SFN通过减少原代小胶质细胞内ROS水平,逆转Aβ诱导的小胶质细胞自噬流阻滞、LMP和NLRP3炎性小体活化,从而抑制小胶质细胞炎性反应和M1型转化,减少Aβ通过诱导小胶质细胞活化介导的神经元损伤。