目的:研究艾司氯胺酮在体外对核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导的破骨细胞分化的影响及机制。方法:1、体外培养:从C57BL/6小鼠骨髓中分离获得骨髓源性巨噬细胞(Bone marrow-derived macrophages,BMMs),采用巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和RANKL诱导BMMs向破骨细胞分化。2、细胞毒性实验:采用Cell Counting Kit-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测不同浓度艾司氯胺酮(0,3.125,6.25,12.5,25,50,100,200μmol/L)分别在24h,48h,72h对BMMs的毒性作用,并筛选出合适浓度,然后将诱导分化的破骨细胞分为3组:对照组、RANKL组和艾司氯胺酮组。3、抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色:通过TRAP染色法观察艾司氯胺酮对破骨细胞分化的影响;4、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,q RT-PCR):采用q RT-PCR检测艾司氯胺酮对破骨细胞分化相关基因活化T细胞核因子1蛋白(Nuclear factor of activated T cell-1,NFATc1)、原癌基因c-Fos(Cellular oncogene fos,c-Fos)和组织蛋白酶K(Cathepsin K,CTSK)m RNA表达水平的影响。5、酶联免疫吸附法(ELISA)实验:通过ELISA测定艾司氯胺酮对破骨细胞NF-κB和NFATc1蛋白表达的影响。结果:实验成功建立了RANKL诱导的破骨细胞体外分化培养体系。1、CCK-8检测结果显示,艾司氯胺酮在0～200μmol/L对BMMs无明显的毒性作用(P>0.05)。2、TRAP染色结果显示,与对照组比较,RANKL组和艾司氯胺酮组中TRAP染色阳性的破骨细胞数量增加,差异有统计学意义(P<0.01);与RANKL组比较,艾司氯胺酮组中TRAP染色阳性的破骨细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.01)。3、q RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,RANKL组NFATc1、c-Fos和CTSK m RNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);Bemcentinib细胞培养与RANKL组比较,艾司氯胺酮组NFATGenetic circuitsc1、c-Fos和CTSK m RNA表达降低,差异有统计学意义(P<0.selleck化学01)。4、ELISA实验结果显示,与对照组比较,RANKL组破骨细胞NF-κB及NFATc1蛋白的含量升高,差异有统计学意义(P<0.05),与RANKL组比较,艾司氯胺酮组核因子κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)及NFATc1蛋白的含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:艾司氯胺酮可抑制RANKL诱导的破骨细胞形成和分化,其机制可能与艾司氯胺酮作用于NF-κB信号通路,抑制破骨细胞分化过程中特异性基因NFATc1、c-Fos、CTSK m RNA的表达有关。