【目的】粪肠球菌是一种古老的微生物,是人和动物的消化道内的常见菌群,偶尔定植于口腔和阴道中,属于机会致病菌。但随着粪肠球菌的致病性逐年上升,由粪肠球菌导致的病例也在逐年增加,特别是粪肠球菌导致脑膜炎的病例出现,无疑是给人类及动物的健康带来了严重的威胁。目前在已研究的细菌性脑膜炎病例中,毒力因子在引起炎症、破坏血脑屏障通透性等方面发挥重要作用,但粪肠球菌破坏脑组织结构,引起脑膜炎、脑炎的机制尚不清楚。本研究通过构建致脑膜炎粪肠球菌全基因组随机展示文库,筛选出粪肠球菌突破血脑屏障过程中发挥作用的毒力因子,为日后研究粪肠球菌引发脑膜炎、脑炎的致病机制奠定基础。【方法】(1)建立血脑屏获悉更多障模型,观察不同粪肠球菌对血脑屏障通透性的影响。(2)构建Fasciotomy wound infections致脑膜炎粪肠球菌的全基因组噬菌体随机展示文库。(3)基于噬菌体展示文库,对突破血脑屏障过程中相关毒力因子筛选。【结果】(1)成功分离小鼠原代内微血管内皮细胞和原代星形胶质细胞,以Transwell细胞培养模型为基础,构建体外血脑屏障模型,并以4 h渗透试验、荧光素钠穿透试验、辣根过氧化物酶渗透性试验对血脑屏障模型的通透性进行验证,双层细胞血脑屏障模型具有更低的通透性。选择不同粪肠球菌与血脑屏障模型作用后,XJ6株粪肠球菌能显著引起屏障通透性发生改变。(2)以不同破碎条件对DNA进行破碎,在50%功率,破碎2s,间隔10s的条件下,可将DNA破碎为300～3000的片段,与质粒连接后电转入感受态大肠杆菌,以M13噬菌体基于噬菌体展示技术,构建了粪肠球菌全基因组噬菌体随机展示文库,文库容量为2.7×10~4。(3)选择噬菌体展示筛选方法中的体外细胞筛选法,以血脑屏障模型中脑微血管selleckchem内皮细胞和星形胶质细胞作为靶细胞经过噬菌体随机展示文库与小鼠体外血脑屏障模型相互作用,通过多次筛选、洗脱、富集,共得到69个阳性噬菌体克隆,挑取阳性克隆进行扩大培养,测序后进行比对,共得到7个粪肠球菌基因,分别为透明质酸酶,溶血素,胶原粘附蛋白,表面锚定蛋白,明胶酶样蛋白酶,RNA聚合酶,表面蛋白。