目的:多种外泌体microRNA(miRNAs)可以通过转录后调控参与细胞多个病理生理过程。因此,研究肿瘤细胞来源的外泌体miRNAs在癌症进展中的作用和机制可以指导寻找更好的治疗方法。据报道,外泌体miR-191在多种癌症过程中具有显著的诱导作用,而外泌体miR-191在结直肠癌中的作用和机制尚需进一步研究探索。方latent autoimmune diabetes in adults法:1.首先在CRC组织样本中通过qRT-PCR检测出5个上调的miRNAs。提取CRC细胞上清外泌体进行鉴定,选择一种表达上调最多的外泌体miRBYL719核磁-191进行研究。2.检测外泌体miR-191在FHC和4种CRC细胞株的表达情况,与FHC相比较外泌体miR-191在各个CRC细胞株中表达水平明显增加,其中以SW620和LOVO中外泌体mi-191的表达量最高,故后续实验选择SW620和LOVO继续进行。分离提取这两种细胞株上清液中的外泌体,观察其大小形状。两种细胞株PF-6463922中加入miR-191抑制剂观察miR-191分泌水平。3.将转染了外泌体miR-191抑制剂的CRC细胞和M0巨噬细胞共培养,通过PKH26免疫荧光染色观察巨噬细胞中外泌体miR-191的转染水平,通过流式细胞术检测标记物CD68和CD163+的表达水平,ELISA检测细胞炎性因子IL-4和IL-10的表达水平,免疫印迹法检测M2型巨噬细胞表型标志物YM1和Arg1的表达,判断巨噬细胞M2极化水平。4.另外采用流式细胞术、免疫印迹法和TUNEL染色法检测CRC细胞的ROS水平、铁死亡相关蛋白(SLC7A11和GPX4)和细胞凋亡情况。5.此外,本研究通过动物实验来确定外泌体miR-191和巨噬细胞M2型极化的功能。结果:1.实验首先确定外泌体miR-451、miR-191、miR-7、miR-1197和miR-760在CRC组织中表达上调,并且提取出来自CRC细胞的外泌体,确定以外泌体miR-191作为研究对象。2.转染了外泌体miR-191抑制剂的CRC细胞和巨噬细胞共培养后,抑制miR-191可以诱导CRC细胞产生ROS、铁死亡和凋亡。3.在CRC细胞中抑制miR-191可以抑制巨噬细胞的M2极化,并通过诱导巨噬细胞的铁死亡来延缓CRC的发展过程。4.抑制CRC细胞的外泌体miR-191可以通过加速巨噬细胞的铁死亡来增强CRC细胞的ROS产生、铁死亡和凋亡5.外泌体miR-191也可以通过促进巨噬细胞的M2极化来加速CRC裸鼠的肿瘤进展,并改变其组织病理结构。结论:抑制外泌体miR-191可通过抑制巨噬细胞的M2极化和诱导巨噬细胞的铁死亡来减缓结直肠癌的进展。