目的 ：建立结核杆菌侵染破骨细胞（osteoclasts,OC）模型，探讨结核杆菌侵染OC后对骨质破坏相关因子表达的影响。方法：采集健康志愿者的外周全血，分离出外周全血中的单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs），利用核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）以及巨噬细胞集落刺激因子（macrophage-colony stimulating factor,M-CSF）诱导使其成为OC，对细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色。将已经构建好的具有卡那霉素（Kana）抗性的H37Rv pMV261-GFP绿色荧光结核菌株进行复苏并加入10%的油酸、白蛋白、葡萄糖和过氧化氢酶添加剂（oleic albumin dextrose catalase,OADC）、7H9以及含卡那霉素的结核杆菌专用液体培养基进行培养，放置于37℃的恒温箱中培养至光密度（optical density,OD）值为600nm时的0.5左右备用；以单纯Odiagnostic medicineC培养为空白对照组；用结核杆菌以不同转染复数（multiplicity of infection,MOI）侵染OC 24h，采用MTT比色法检测细胞存活率最高的MOI为后续实验MOI，使用H37Rv以此MOI侵染OC为实验组；荧光显微镜及结核杆菌抗酸染色分别观测实验MOI时结核杆菌转染情况。实时荧光定量PCR (real time fluorescence quantitative PCR,qRTPCR)检测非受体酪氨酸激酶（C-src）、蛋白激酶K(cathepsin K,CK)、碳酸酐酶2(carhttps://www.selleck.cn/products/gdc-0068.htmlbonic anhydrase 2,CA2)、整合素-β3(integrin-β3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况；免疫组化（immunohistochemistry）检测磷酸化酪氨酸激酶产物（P-src）、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的细胞表面蛋白表达情况；蛋白免疫印迹（western blot,WB）检测P-src、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的蛋白表达水平。结果：TRAP染色显示细胞培养15d后90%以上为OC，可以用于进行实验。荧光结核杆菌成功将其OD值培养为600nm时的0.5。MTT比色法结果显示：在MOI为20∶1时细胞存活率最高（P<0.05），此为实验组MOI；结核杆菌侵染OC后荧光显微镜显示：MOI为20∶1时，绿色荧光标记Blebbistatin临床试验的结核杆菌进入OC，说明成功转染OC；结核杆菌侵染OC后抗酸染色结果显示：MOI为20∶1时，被染成红色的抗酸结核杆菌进入OC，说明结核杆菌H37Rv成功转染OC。qRT-PCR、细胞免疫组化、WB检测结果均显示：MMP-9、CK、C-src、CA2、Integrin-β3的表达实验组均高于空白对照组（P<0.05）。结论：结核分枝杆菌能够转染OC；与空白对照组相比，结核杆菌转染OC的实验组中5种具有骨质破坏作用因子均升高，提示结核骨质破坏可能与此相关，为骨结核疾病诊疗提供新的探索方向。