“瓜蒌-薤白”药对诱导自噬抑制NLRP3炎症小体激活减轻RAW264.7巨噬细胞炎症反应

考察“瓜蒌-薤白”药对（GX）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）损伤的RAW264.7巨噬细胞NLRP3炎症小体活化、炎症因子释放及自噬水平的影响，探究GX减轻巨噬细胞炎症反应的自噬机制。通过体外建立LPS诱导RAW264.7巨噬细胞损伤模型；采用CCK8法检测巨噬细胞存活率；Western blot法检测巨噬细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermoprotein domain 3，NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein，ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cystein-asparate protease 1，caspase-1)、白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素18（interleukin-18，IL-18）、酶联相关轻链蛋白3Ⅱ（microtubule-associated protein light chain 点击此处3Ⅱ，LC3Ⅱ）、选择性自噬接头蛋白p62/sequestosome 1（selective autophagy junction proteinp62/sequestosome 1，p62）蛋白表达；ELISA法检测巨噬细胞分泌炎症MRTX1133作用因子IL-18及IL-1β的水平；透射电镜观察巨噬细胞中自噬小体数量；免疫荧光法检测巨噬细胞中LC3Ⅱ、p62的表达水平。结果显示，GX可显著降低巨噬细胞中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达；GX明显增加巨噬细胞中LC3Ⅱ表达，减少p62表达；GX显著减少巨噬细胞中炎症因子IL-18、IL-1β分泌；GX显著提高巨噬细胞中自噬小体数量；GX明显增加LC3Ⅱ的免疫荧光强度，降低p62的免疫荧光强度。加入3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine，3-MA）自噬抑制剂后可逆转GX抑制NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达，减少炎症因子IL-18、IL-1β释放的作用。以上结果表明，GX可能通过上调细胞自噬水平，抑制NLRP3炎症小体immune cell clusters活化，从而减少炎症因子释放抑制巨噬细胞炎症反应。