溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)是一种由多种原因引起的肠道炎症性疾病,甚至可能发展为癌症。常规药物治疗仅能在一定程度上缓解UC的发生发展,并不能彻底治愈。近年来研究证实乳酸菌(Lactic Acid Bacteria,LAB)可以调节肠道菌群平衡,缓解肠道炎症,表明其有望成为UC的新型替代疗法。而生牛乳中含有丰富的乳酸菌,是人类和动物中益生菌的重要来源。因此,本研究从生牛乳样品中分离鉴定出26株乳酸菌并对其体外益生特性进行评估后,成功筛选出一株具有良好益生潜力的植物乳杆菌L19。接着以3%葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium-Induced,DSS)构建C57BL/6小鼠UC模型,从临床表现、病理组织学、肠道屏障功能和短链脂肪酸水平等多角度探究L19对小鼠溃疡性结肠炎的保护作用。本研究的主要内容和结果如下:研究内容(1)分离鉴定具有益生菌潜力的新型LAB菌株。在四川洪雅县规模化养殖场采集了22份生牛乳,通过稀释涂布法分离纯化得到26株LAB菌株(编号为L1-acute oncologyL26)。然后通过生化鉴定和PCR扩增16S r DNA鉴定其物种分类,体外评估其抗菌活性、共聚集能力、肠道环境和苯酚耐受能力、自凝集能力和细胞表面疏水性等体外益生特性,并对其溶血活性及抗生素敏感性等安全特性进行评估。(2)植物乳杆菌L19对UC的保护作用研究。本试验以C57BL/6小鼠自由饮用3%DSS构建体内UC模型。以美沙拉嗪药物作为阳性对照,分别采用高浓度(4×10~9CFU/m L)、低浓度(1×10~9CFU/m L)的植物乳杆菌L19菌悬液以及L19过滤除菌后的上清液对UC模型小鼠进行干预,每日记录小鼠的食欲,体重,粪便性状和腹泻等临床生理表现。在四周后处死小鼠,采集每只小鼠的粪便、脾脏和结肠样本。然后通过H&E染色(Hematoxylin-eosin staining)分析各组小鼠结肠组织的病理损伤情况,通过PAS染色(Periodic Acid-Schiff staining)染色分析各组小www.selleck.cn/products/Gefitinib鼠结肠组织中杯状细胞的数量,通过免疫组化分析各组小鼠结肠组织中紧密连接蛋白表达水平,确定L19对UC模型小鼠肠道屏障功能的影响。然后采用气相色谱质谱(GC-MS)测定各组小鼠粪便中各种短链脂肪酸(Short-Chain Fatty Acid,SCFAs)的水平。研究结果(1)从22份生牛乳中分离得到26株LAB菌株,其中5株植物乳杆菌(L5、L14、L17、L19和L20)能够黏附并抑制4种常见肠道致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌)的生长,并能在模拟胃液、肠液和0.4%苯酚中保持较高的存活率(分别为92.55～99.69%,76.18～83.99%,76.95～88.91%)。同时,这5株LAB分离菌株还表现出高水平的自凝集能力(83.91～90.33%)和疏水性(79.32～92.70%)。安全性评估结果表明LAB分离菌株均不溶血,且植物乳杆菌L5、L14、L17、L19和L20对13种常见抗生素敏感。此外,这5株selleck NMR植物乳杆菌均具有良好的生长性能。综合以上结果,植物乳杆菌L5、L14、L17、L19和L20较其他21株菌株有更全面的益生潜力,可以作为益生菌候选株。(2)高浓度L19干预后有效缓解了UC模型小鼠的食欲减退和体重减轻,降低了小鼠的疾病活动指数(DAI)评分。L19改善了小鼠结肠组织的病理损伤,并能够增加其结肠上皮层中杯状细胞的数量。此外,L19还上调了小鼠结肠中ZO-1、Occludin和Claudin-3紧密连接蛋白的表达水平,促进其肠道屏障功能的修复。同时,L19还显著提高了UC模型小鼠粪便中乙酸、丙酸和丁酸的水平,促进了UC小鼠肠道中短链脂肪酸的合成。综上所述,本研究从四川洪雅地区原料奶中分离并筛选出5株具有良好体外益生特性和安全性的乳酸菌,分别是植物乳杆菌L5、L14、L17、L19和L20,其中植物乳杆菌L19对3%DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有一定的保护作用,有望成为治疗UC的候选益生菌。