目的 探讨体外缺氧微环境对c-Raf/MAPK/NF-κB通路的影响，并观察不同浓度氯化钴(CoCl_2)及作用不同时间对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法 采用CoCl_2建立人NSCLC细胞系NCI-H1650和A549细胞体外化学乏氧模型，以作用浓度0μmol/L为对照组，作用不同浓度为实验组。通过不同浓度(10selleck MG1320、200、300、400和500μmol/L)的CoCl_2分别作用NCI-H1650和A549细胞12 h, CCK-8法检测其存活率。根据medical training半数抑制浓度(IC_(50))值选择对缺氧环境适应能力较强的A549细胞，用同样方法进一步检测CoCl_2浓度为50、100、150和200μmol/L作用于细胞6、8、12、24和48 h的存活率。不同浓度CoCl_2作用同一时间，蛋白质印迹法检测细胞HIF-1α、c-Raf、MAPK和NF-κB的蛋白水平。Transwell小室检测CoCl_2对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 当CoCl_2作用于A549细胞时，IC_(50)值为927.5μmol/L,作用于NCI-H1650细胞时，IC_(50)值为890.4μmol/L,成功建立缺氧NCI-H1650与A549细胞模型。当不同浓度CoCl_2(0～500μmol/L)作用于H1650细胞时，CoCl_2作用浓度对细胞存活率无影响，差异无统计学selleckchem AMG510意义，F=2.942,P=0.058;作用于A549细胞时，细胞存活率分别为(1.05±0.04)%、(1.01±0.11)%、(0.81±0.05)%、(0.80±0.01)%、(0.77±0.02)%和(0.51±0.05)%,差异有统计学意义，F=30.930,P<0.001。其中，当浓度>100μmol/L时，各浓度组存活率均高于对照组，差异有统计学意义，均P<0.05。当CoCl_2作用时间为6～48 h,作用浓度一定时，A549细胞存活率无明显改变，差异无统计学意义；当CoCl_2作用时间不变，存活率随着浓度的增加而下降，并呈浓度依赖性，差异有统计学意义。与CoCl_2作用浓度0μmol/L[(38.33±7.64)个]相比，作用浓度分别为50、100、150、200μmol/L时A549细胞迁移数分别为(60.67±7.02)、(83.33±5.03)、(131.67±12.58)和(161.34±47.37)个，差异有统计学意义，F=127.671,P<0.001;其中，当CoCl_2浓度≥50μmol/L时迁移能力均高于对照组，差异有统计学意义，t值分别为-3.728、-8.521、-10.983和-22.115,P值分别为0.020、0.001、<0.001和<0.001。各组蛋白表达水平均高于对照组，差异均有统计学意义，均P<0.05。结论 CoCl_2模拟的缺氧可以使NSCLC细胞增殖、侵袭和转移增加，其机制与c-Raf/MAPK/NF-κB信号通路相关。