目的 对新型冠状病毒感染（简称新冠感染）疫情常态化防控期间北京市丰台区某幼儿园聚集性发热疫情的病例标本进行病原学鉴定和基因特征分析。方法 2021年4月对北京市丰台区某幼儿园一起聚集性发热疫情采用描述性流行病学方法进行调查分析，并采集患儿咽Entinostat小鼠拭子样本，提取病毒核酸后，采用实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）进行新型冠状病毒核酸检测和其他常见的呼吸道病毒筛查；采用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription PCR,RT-PCR）扩增人偏肺病毒G蛋白基因序列，应用BioEdit进行病毒G蛋白基因的核苷酸和氨基酸变异分析，采用MEGA 5.0软件构建G蛋白基因的遗传进化树并分析人偏肺Wnt-C59生产商病毒分子分型特征。结果 该起疫情历时8 d，同一班级累计出现16例病例，班级罹患率53.3%(16/30)。共采集12份患儿的咽拭子样本，所有样本新型冠Microscope Cameras状病毒核酸检测均为阴性。呼吸道多病原检测结果显示：12份患儿样本中，6份为人偏肺病毒单一核酸阳性，另外1份为人偏肺病毒和腺病毒混合感染。获得2株G蛋白基因序列，序列比对分析为B2型人偏肺病毒。疫情株G蛋白基因序列与2016年日本流行株（LC337940、LC337935、LC1922349等）序列同源性为96.73%～98.01%。与2019年国内山东青岛株（OL625642、OL625644）、河南省流行株MN944096，核苷酸同源性达98.40%以上；和B2型人偏肺病毒参考株AY297748比较，161～166位点含EKEKEK 6个氨基酸序列插入。结论 此次聚集性发热疫情的病原体为B2型人偏肺病毒，疫情株与2016年日本株、2019年国内山东青岛、河南株高度同源。在新冠感染常态化防控期间，仍需加强呼吸道病原学监测工作。