自1998年第一个反义寡核苷酸药物上市以来,基于核酸类药物的研究越来越多。这些研究中主要以10～30个碱基的小核酸药物为主,包括反义寡核苷酸(ASO)、干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、小激活RNA(saRNA)以及核酸适配体(aptamer)。现在生物样本中定量检测小核酸的方法主要包括实时逆转录聚合酶链反应法(RT-qPCR)、杂交免疫法、LC-FD法和LCMS法。这些方法各有优缺点:A,qPCR法具有灵敏度高、线性范围广(4～8个数量级)和样本制备通量较高的优点。方法开发的复杂程度往往取决于引物和荧光基团的设计,准确性和精密度有限,特异性和潜在的基质效应,无法区别代谢物与分析物,化学修饰会影响。B,杂交ELISA法灵敏度较高,可以分析天然或修饰后的RNA。方法的缺点是特异性较差、重复性较差、线性较窄且不能区分代谢物。C,LSB431542价格C-FD法因杂交荧光探针与Cecum microbiota液相分离的双重选择而具有优秀的特异性,同时样本制备简单、不需要内标、重复性好(±15%准确度与精密度)、兼容多种结构修饰的核酸(碱基,糖,磷酸骨架修饰)。本法通量较低(10～30 min/样本)、难区分3′或5′端的n-1个代谢产物。D,LCMS法采用质谱直接定量,不需要酶和特殊试剂、重复性好、选择性高、通量高、线性宽、可同时测正/反义链、可区分代谢产物与分析物;缺点是灵敏度相对较低。总体来说,基于分子生物学的间接法往往不能直接测量小核酸的浓度、不能研究其代谢产物也不能区分修饰和未修饰的寡核苷酸,但在灵敏度方面却有较突出的表现。以LCMS法为代表的直接法可以直接测定寡核苷酸的浓度,可以同时检测siRNA的正义链和反义链,可以研究寡核苷酸的代谢物同时也能区分修饰与未修饰的寡核苷酸。随着各类高灵敏度质谱的推出,LCMS法在众多方法中将更具优势。以上方法各具特点,在小核酸类药物分析时,需要根据药物开发阶段以及药物特征采用不同的生物分析平台为药物非临床PK、TK及组织分GNE-140布的研究提供分析技术。