本实验为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛巨噬细胞吞噬功能和免疫调节的分子机制。利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株及cylA基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染VP-16供应商。利用MTT检测法检测细胞活性,在明确细胞活性不受影响的条件下,进行下列检测。提取被侵染的巨噬细胞总m RNA,利用RT-qPCR手段检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α,以及NOS2的转录水平差异。利用ELISA方法检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α的表达情况。利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,以明确其调控该信号通路的分子机制。在侵染实验前加入p38 MAPK信号通路抑制剂孵育巨噬细胞后,进行侵染实验,利用ELISA方法检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α的表达情况,以研究p38 MAPK信号通路抑制剂对细胞因子表达的影响。经过RT-qPCR检测结果发现,与cylA基因敲除菌株组相比,cylA阳性的粪肠球菌野生型菌株组在IL-10和TNF-α转录水平上调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平下调,并且均具有统计学意义。ELISA结果与RT-qPCR基本一致,其中TNF-α的表达水平提高,但是不具有统计学意义。Western blot检测p38 MAPK磷酸化水平,与cylA阳性的粪肠球菌野生型菌株组相比,cylA基因敲除菌株组p-p38的表达量降低,并且差异极显著。在加入p38 MAPK抑制剂后,ELISA结果显示与不添加p38MAPK抑制剂组相比,添加p38 MAPK抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达量降低,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平提高,并且Organizational Aspects of Cell Biology具有统计学意义。根据上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cylA基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗PUN30119化学结构及防控提供新的靶位,为通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控,为解决由粪肠球菌引起的乳源安全问题提供新的科学思路。