目的初步探索生物活性肽通过TGF-β(16)/Smads信号通路调控心肌纤维化的作用机制。方法(1)第一部分体外细胞实验:利用不同浓度TGF-β1诱导原代心肌成纤维细胞24 h后,通过CCK8法检测细胞存活率选择TGF-β1造模最佳诱导浓度。然后将细胞分为正常对照组、生物活性肽处理组、模型组、高、中、低剂IgE immunoglobulin E量的生物活性肽处理组。采用CCK8法检测各组细胞存活率;通过RT-q PCR检测各组细胞的α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ的相对表达量;Western blotNirogacestat化学结构法检测各组细胞中α-SMA、Smad2、Smad3及其磷酸化水平的蛋白表达量。(2)第二部分动物体内实验:将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组10只,即正常对照组、模型组和生物活性肽组,除正常对照组外,其他两组均通过25mg/kg异丙肾上腺素于皮下注射进行造模,5天后用超声心动图监测心功能等指标鉴定模型成功后,生物活性肽组予以生物活性肽灌胃,正常对照组和模型组用生理盐水灌胃,每天360μl,灌胃周期为14天。治疗结束后麻醉动物迅速取出心脏,将分离的心脏迅速取一部分固定在4%多聚甲醛中,随后制备石蜡切片以便后续HE染色、Masson染色和天狼星红染色以及免疫荧光染色,观察各组心肌组织学、胶原沉积情况;取小块心脏立即放入2.5%的戊二醛制备切片做透射电镜观察www.selleck.cn/products/Dasatinib;将心尖部分置于液氮中,提取蛋白进行Western blot检测各组心肌组织中CollagenⅠ、FN1、TGF-β(16)以及Smad2/3的磷酸化表达水平。结果细胞实验:(1)CCK8法检测结果显示10 ng/ml的TGF-β1有效刺激心肌成纤维细胞的增殖(P<0.01),不同浓度生物活性肽均显著抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞的增殖情况(P<0.05)。(2)RT-q PCR结果显示,与模型组相比,生物活性肽组细胞α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达下调(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。(3)Western blot结果显示,与模型组相比,生物活性肽组细胞中α-SMA、Smad2、Smad3及其磷酸化水平的蛋白表达量下降(P<0.05、P<0.05、P<0.01)。动物实验:(1)生物活性肽组与模型组相比,EF,FS升高(P>0.05),LVIDs和LVIDd降低(P>0.05、P<0.05)。(2)HE染色和透射电镜结果显示,生物活性肽可改善ISO诱导的心肌组织病变以及超微结构的病理改变。(3)Masson染色与天狼星红染色结果一致,生物活性肽干预显著减少了心肌胶原纤维的沉积(P<0.05、P<0.05)。(4)生物活性肽作用后显著下调α-SMA、CollagenⅠ的蛋白表达(P<0.05),对于FN1的降低无显著性差异。(5)生物活性肽干预降低ISO诱导升高的TGF-β1以及磷酸化Smad2/3的表达,但只对TGF-β1表达的降低具有显著性差异(P<0.05)。结论(1)生物活性肽显著抑制了TGF-β1对心肌成纤维细胞的增殖与活化,并抑制了胶原分泌。(2)生物活性肽缓解了小鼠心肌纤维化模型中异丙肾上腺素引起的纤维化。(3)初步研究生物活性肽抑制心肌纤维化作用可能由TGF-β1/Smads信号通路介导调控。