蓖麻毒素(ricin)与相思子毒素(abrin)同属II型核糖体失活蛋白(ribosome inactivating protein,RIP),毒性强、易获取、隐蔽性强、无特效抗毒剂等特点使其成为潜在的重要生化战剂和生物恐怖物质。因此,发展二者的快速灵敏检测方法具有十分重要的军事和社会意义。目的利用蓖麻毒素及相思子毒素细胞毒性极强的特点,构建基于细胞毒性分析的复杂基质Gefitinib-based PROTAC 3配制中活性毒素高灵敏筛查鉴定方法。方法以不同浓度梯度毒素(0.01～100 ppb)暴露HepG2、A549、HEK-293、HHuman Immuno Deficiency ViruseLa等多种人源细胞系,采用CCK-8法测定毒素的半数抑制浓度(IC50)及检测限(LOD),进行毒性敏感细胞系的筛选与评价;利用毒素特异性中和抗体提高检测方法的特异性,评价中和抗体对毒素细胞毒性的抑制效果,优化中和抗体使用浓度;考察不同稀释度茶、咖啡、蔬果汁、牛奶、蛋白粉、血浆等复杂基质对细胞活力的影响,明确各类基质的检测适用条件;评价毒素与基质复合体系对检测方法的影响。结果不同细胞系对毒素敏感性差异显著,同一细胞系对两种毒素敏感性亦存在差异。其中,HeLa细胞Tezacaftor对蓖麻毒素和相思子毒素的检测最为灵敏,LOD分别达0.2 ppb和0.025 ppb,且增殖速度快、易于培养,是用于检测的理想细胞。利用毒素特异性中和抗体(终浓度10μg/mL),可实现蓖麻毒素、相思子毒素及其它细胞毒性物质的区分鉴定。单独基质在1∶10至1∶1000稀释时对细胞存活率均无显著影响。除牛奶在1∶10稀释时能够抑制毒素的细胞毒性,其余基质对检测体系无显著影响。结论本研究构建的检测方法无需复杂前处理,仅通过简单稀释即可用于复杂基质中蓖麻毒素及相思子毒素的区分鉴定,灵敏度达ppb水平,同时可评价毒素活性,解决现有筛查技术易受基质干扰、需要复杂前处理、依赖于大型仪器、难以快速通量筛查并评判毒素活性、灵敏度不高等问题。