将嘌呤核苷磷酸化酶和尿苷磷酸化酶进行共表达和双酶固定化，提高生物法合成阿糖核苷过程中底物转化率和催化剂稳定性。首先，构建Bafilomycin A1浓度大肠杆菌内源嘌呤核苷磷酸化酶和尿苷磷酸化酶过表达工程菌，考察工程菌催化不同阿糖核苷之间转化的效率。将嘌呤E-616452分子量核苷磷酸化酶和尿苷磷酸化酶双酶固定化，并对固定化双酶进行回收利用，考察重复使用过程中固定化双酶的催化效率。研究表明：工程菌催化阿糖尿苷和腺嘌呤生成阿糖腺苷的反应最高转化率可达93.6%。固定化双酶催化合成阿糖2，6-二氨基嘌呤核苷的最高转化率可达99.8%。重复回收使用固定化双酶19次后对底物的转化率达到60.6%，累计有效催化时长累计可达684 h。嘌呤核苷磷酸化酶和尿苷磷酸化酶的双酶耦合体系能高效催化阿糖核苷之间的transboundary infectious diseases转化，固定化修饰有利于延长酶的使用寿命，为生物法生产核苷类似物提供了重要科学参考。