研究目的:啤酒花苦味酸类成分(Bitter acids,BA)是啤酒中独特苦香味的来源,且兼具抗氧化活性及促进骨骼健康作用。在抗骨质疏松新药挖掘中,BA因资源丰富、需求广泛、药食两用、安全有效而具备良好开发价值。啤酒花已被证实具有显著的抗老年性骨质疏松作用,然而对于BA抗老年性骨质疏松的作用和机制却鲜有报道。故本研究首次考察BA对D-半乳糖(D-gal)致老年性骨质疏松的作用并探索其潜在机制,以期为老年性骨质疏松新药研发提供依据。研究方法:(1)腹腔注射D-gal建立老年性骨质疏松小鼠模型,通过分析股骨远端骨密度及骨小梁参数,检测血清及尿液骨代谢指标、血清及骨组织抗氧化酶活性,考察BA对D-gal致老年性骨质疏松的药效及抗氧化作用。(2)建立D-gal损伤成骨细胞模型,通过检测成骨细胞增殖、分化、矿化、衰老、凋亡水平,考察BA对D-gal损伤成骨细胞的保护作用。(3)采用D-gal损伤成骨细胞模型,考察BA对D-gal损伤成骨细胞的作用机制:检测成骨细胞氧化应激相关指标;检测成骨细胞Nrf2/HO-1/NQO1通路蛋白的表达,通过Nrf2沉默,对通路靶点进一步验证;检测成骨细胞自噬标志物、自噬流,并以自噬抑制反向验证自噬机制;采用分子对接模拟BA与通路m TOR蛋白结合情况并检测AKT/m TOR通路蛋白表达。结果:(1)BA可显著增加D-gal致老年性骨质疏松小鼠骨密度,改善骨微结构破坏;显著提高血清骨形成标志物碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)水平,降低血清骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)水平;降低尿液钙质水平,降低尿钙/肌酐比值,减少钙质流失;显著提高血清及骨组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平,增加机体抗氧化能力。(2)BA可显著提高D-gal损伤成骨细胞的增殖、分化、矿化水平;抑制衰老及凋亡水平。(3)BA显著提高D-gal损伤成骨细胞SOD、CAT水平;抑制丙二醛(MDA)及细胞内活性氧(ROS)水平。BA显著PD0325901价格提高D-gal损伤成骨细胞Nrf2的入核表达,并激活下游HO-1、NQO1的表达,且经过Nrf2沉默后,BA对HO-1、NQO1的表达促进作用均被剥夺。(4)BA显著提高D-gal损伤成骨细胞自噬标志物Beclin1、LC3-II/LC3-I水平,激活自噬流;经过自噬抑制后,BA对成D-gal损伤骨细胞增殖、分化、矿化的促进作用均受到显著抑制,对D-gal损伤骨细胞凋亡、衰老的抑制作用均被消除。分子对接显示BA与m TOR结合具有较好稳定性;BA抑制D-gal损伤成骨细胞中AKT、m TOR、p70S6K、4EBP1的磷酸化水平。结论:本研究表明:(1)BA减轻D-gal致衰老小鼠机体氧化损伤,减少钙流失,促进骨形成,抑制骨丢失,具有抗老年性骨质疏松的作用。(2)BA可通过Nrf2/HO-BLZ945供应商1/NQO1信号通路及AKT/m TOR自噬调solid-phase immunoassay控信号通路抑制D-gal致成骨胞氧化应激,防止成骨细胞衰老凋亡,发挥骨保护作用。